柑橘溃疡病抗性育种专家系统构建

柑橘溃疡病严重危害我国柑橘产业的发展。进行溃疡病抗性育种是解决这一问题的根本。本文提出建立柑橘溃疡病抗性育种专家系统的设想。本专家系统根据福建省农业科学院果树研究所的育种经验设计而成,包含传统育种和现代育种2个部分,在此基础上,细分为抗感亲本的选择及选配、杂种鉴定、杂种抗性评价、已知抗病基因（R基因）的搜集、抗病候选基因（RGA）的获得、溃疡病抗性基因的克隆等6个模块,基本实现对柑橘溃疡病抗性育种的管理。     

柑橘溃疡病抗性相关的SSR标记筛选

以抗柑橘溃疡病的‘宜昌橙2586’与易感病的‘岭南沙田柚’进行杂交,随机选取F₁ 代材料80 株,开展溃疡病抗性田间接种鉴定。鉴定结果表明,溃疡病抗性在F1 代分离明显,若将免疫和高抗类型均视为抗病,中抗、中感和感病类型均视为感病,则抗感的分离比例接近1︰1。采用集合分离分析法BSA (Bulked Segregant Analysis),结合SSR 分子标记技术,筛选到1 个与柑橘溃疡病抗性相关的分子标记CCR-110。利用F₁ 代分离个体和公认的抗感材料对标记进行验证分析,发现该标记表现较好的抗性相关性。F₁ 群体相关分析表明,该标记与柑橘溃疡病抗性的相关系数为0.79;采用最大似然法计算重组率为9.38%±3.5%,通过 Kosambi 函数将其转换成图距单位（cM）,遗传距离为9.11 cM;感病的甜橙类、柚类、枳类没有此标记,抗病的金柑类、宜昌橙类、香橙类、宽皮柑橘类的多数材料出现此标记。     

枸橼种质对柑橘溃疡病的抗性鉴定

柑橘溃疡病(Xanthomonas citri subsp. citri,Xcc)是严重阻碍柑橘产业发展的世界性检疫病害,防控困难,选育抗病品种为防治溃疡病的唯一有效办法。枸橼C-05是柑橘属独特的抗溃疡病种质,为抗性机理和抗病育种提供了种质基础。为了进一步评价枸橼C-05的抗性,另外收集了13份枸橼种质,对其进行溃疡病的离体和活体抗性评价。叶片形态学观察表明,14份枸橼种质存在较大的形态学差异。采用离体与活体注射接种不同浓度的柑橘溃疡病菌,根据叶片的感病症状、病斑周围黄色晕圈大小等典型溃疡病症状,综合评价枸橼类种质的抗病性。结果表明:枸橼种质之间对溃疡病的抗性存在极大差异,溃疡病的抗性评价综合病情指数显示枸橼C-05、园香橼、矮果香橼、美国枸橼、普通枸橼和印度大果综合病情指数较小,表现为极抗病或抗病,其他枸橼种质表现不同程度的感病性;枸橼种质的抗病或感病性与其叶片形态特征无关。枸橼C-05和5个抗病枸橼种质对柑橘溃疡病具有针对性的抗性,这对进一步研究抗病机理和抗病育种具有重要意义。     

3种柑桔材料水杨酸处理前后对柑桔溃疡病的抗性分析

为了探明对柑桔溃疡病敏感度存在差异的金弹Fortunella crassifolia、甜橙Citrus sinensis和枳Poncirus trifoliata经水杨酸处理前后的抗病性差异,对3种柑桔材料进行外源水杨酸处理并进行柑桔溃疡病菌接种。结果表明,3种柑桔材料中,金弹对柑桔溃疡病的抗性最高,其次为甜橙,枳的抗性最低(病害症状最明显且细菌增殖最快);经过水杨酸处理后,3种柑桔材料对柑桔溃疡病的抗性都有提高,死亡细胞数量减少,相对电导率降低,叶绿素含量提高,柑桔溃疡病菌繁殖量减少;从水杨酸处理后抗病基因的表达变化来看,金弹中抗病基因NPR1、PR1基因被诱导上调表达且显著高于其余两种柑桔材料,同时,PAD4上调表达水平也较高。     

琼中绿橙柑橘溃疡病药剂防治试验

试验结果表明,供试药剂12%绿乳铜乳油、86.2%铜大师可湿性粉剂、53.8%可杀得干悬浮剂和30%扫细悬浮剂4种药剂防治柑橘溃疡病的效果较好;在第3次药后10天,叶片溃疡病的防效在75.18%~77.46%,果实溃疡病的防效在79.91%~82.10%;建议在柑橘溃疡病发生初期应用上述药剂进行轮换施药,施药次数为3~4次,隔7~10天喷1次,可有效控制其发生和蔓延。     

蒙山县柑橘溃疡病的发生及防治

随着蒙山县柑橘生产的发展,柑橘溃疡病的发生也呈蔓延趋势,本文通过观察溃疡病发生情况,分析了发生原因,提出了通过栽培管理及时用药防治等措施进行综合防治,以期为防治柑橘溃疡病提供参考。     

应用铜制剂防治柑橘溃疡病的研究进展

对防治柑橘溃疡病的主要药剂--铜制剂的种类、施用方法、作用机理以及其不足之处进行总结,综述了柑橘溃疡病菌（Xanthomonas citri subsp. citri,Xcc）抗铜性产生及抗铜性的分子机理研究进展,并探讨柑橘溃疡病菌产生铜抗性的防控方法。     

红心柚和美国枸橼杂种后代对柑橘溃疡病的抗性评价

为了探究枸橼对柑橘溃疡病(Xanthomonas citri subsp.citri,Xcc)的抗性遗传规律,以感溃疡病品种红心柚为母本,与抗溃疡病种质美国枸橼进行杂交,获得了F₁代杂种,并以F₁自交后获得了F₂代。对F₁杂种进行活体叶片注射接种鉴定,对所有F₂代253株进行离体叶片注射接种鉴定,随后对其中的225株F₂活体叶片进行注射接种鉴定,并对部分F₂代活体叶片接种后进行溃疡病菌定量分析。鉴定结果表明,红心柚和美国枸橼杂交获得的75个F₁全部为感病,没有抗感性状分离。对253株F₂植株离体叶片鉴定结果显示,76株表现为抗病,177株表现为感病。对225株F₂植株活体叶片鉴定结果显示,72株为感病,症状与感病品种‘冰糖橙’类似;118株为较感病,发病程度较‘冰糖橙’轻,与感病亲本红心柚的病症相似;10株为较抗病,抗性接近于抗病亲本美国枸橼;4株为抗病,抗性与抗病种质...     

柑橘不同品种对溃疡病抗病性差异的调查

柑橘溃疡病是目前柑橘生产中重要的细菌性病害,各柑橘产区普遍发生。该病能危害柑橘叶片、枝梢和果实,其中以苗木和幼树受害特别严重,造成落叶、枯梢,     

柑橘溃疡病菌分化及防治研究进展

对柑橘溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp.citri,Xcc)的分类地位、菌系分化和致病机理进行了总结,重点阐述了运用生物学、血清学和分子生物学方法鉴定溃疡病菌遗传变异的研究进展,并介绍了该病的防治方法。     

过氧化氢酶基因CsKat01与柑橘溃疡病相关性分析

为了探究过氧化氢酶基因CsKat01在柑橘抵御溃疡病过程中的作用,对感病品种'晚锦橙'和抗病品种'四季橘'中CsKat01进行了生物信息和表达分析,并探究了溃疡病菌接种处理后两品种中CAT酶活性和H2O2含量的关系.克隆CsKat01的编码序列并对该基因及其编码蛋白进行结构和功能分析,发现CsKat01编码框全长为1 ...     

柑橘MAPK基因的生物信息及其响应溃疡病菌侵染的表达分析

为挖掘柑橘溃疡病抗性关键基因,对柑橘促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)基因家族进行注释和功能域分析,明确了CsMPK1、CsMPK3、CsMPK4、CsMPK6和CsMPK19的组织表达特异性和在抗病品种‘金弹’(Fortunella japonica Swingle)和感病品种‘晚锦橙’(Citrus sinensis Osbeck)中受病原菌(Xanthomonas citri subsp.citri,Xcc)诱导的表达情况;并对CsMPK19进行了生物信息分析。共注释出12个柑橘MAPK基因家族成员,根据系统发育树将其分为3个亚类,均含有促分裂原活化蛋白激酶(Pkinase)功能结构域。其中CsMPK1、CsMPK3、CsMPK4-1和CsMPK6在果实中表达水平较高,CsMPK19在叶片中表达量相对较高。CsMPK1的表达在溃疡病抗(感)品种中均受病原菌强烈诱导,且在感病品种中上调的幅度高于抗病品种;CsMPK3和CsMPK6仅在感病品种中病原菌处理早期有较强烈的响应;CsMPK4-1和CsMPK4-2的表达在感病品种中受病原菌诱导上调,而在抗病品种中病原菌处理后低于水处理对照;...     

柑橘CsNCED3-2的克隆及其响应溃疡病菌侵染的表达分析

柑橘溃疡病是世界柑橘的一种重要病害,对柑橘产业造成严重的经济损失。对柑橘中9–顺式–环氧类胡萝卜素双加氧酶(NCED)基因家族进行注释,并克隆出受柑橘溃疡病菌诱导表达的CsNCED3-2,确定了其表达模式。从柑橘全基因组公共数据库共注释出14个NCED基因家族成员,根据系统发育树和功能结构域将其分为4个亚类;CsNCED3-2其序列全长2 377 bp,开放阅读框1 830 bp,编码609个氨基酸,属于RPE65超家族成员和类胡萝卜素双加氧酶家族成员,是非分泌性蛋白;在‘晚锦橙’和‘金弹’叶片注射溃疡病菌后的各个时间点,‘晚锦橙’叶片中CsNCED3-2的相对表达量总体高于‘金弹’,并且两品种的相对表达变化呈相反趋势;与茎、叶和种子相比,CsNCED3-2在两品种果皮中表达量较高;两品种的CsN CED3-2上游启动子均含有参与植物激素和逆境应答相关的顺式作用元件ABRE(脱落酸响应)、TCA-element(水杨酸响应)、MYC/MYB(干旱响应)等,但数量和类型存在差异。     

赣南地区部分脐橙品种对溃疡病的抗性

以多个脐橙优良品种为试材,采用离体、活体针刺法接种溃疡病菌,通过观察和测定菌斑数、叶片含水量、叶片丙二醛(MDA)含量等指标,研究同一砧木嫁接不同品种及不同砧木嫁接同一品种组合对溃疡病的抗病性,以期筛选出抗逆性较优的脐橙砧穗组合,并为赣南地区脐橙抗溃疡病种质资源的筛选与鉴定提供参考依据。结果表明:离体和活体针刺接种溃疡病菌的理想接种浓度约为8.4×107 cfu·mL-1;不同品种对比发现"纽荷尔"脐橙在接种溃疡病菌液后相对发病率最高,约为88%~96%,说明其对溃疡病的抗病性较弱;"华盛顿"脐橙相对发病率最低,约为36%~57%,说明其对溃疡病的抗病性较强;同一品种不同砧木组合对比,发现以枳壳作砧木的植株发病率均比以枳橙作砧木的高,表明以枳橙作砧木的植株耐受能力强于以枳壳作砧木的植株;柑橘对溃疡病的抗性与叶片含水量呈负相关,相关系数R2=-0.948,与丙二醛含量呈负相关,相关系数R2=-0.887。     

柑橘响应溃疡病菌转录因子基因CsAP2-09的克隆与功能分析

对柑橘中AP2转录因子进行注释,并克隆柑橘溃疡病相关的Cs AP2-09,研究外源水杨酸、茉莉酸甲酯、乙烯利、机械损伤以及溃疡病菌对该基因的诱导表达,确定其表达模式。从柑橘全基因组公共数据库一共注释出12个AP2成员,据系统发育和结构可以将其分为4个亚类;可能与抗、感溃疡病相关的Cs AP2-09基因全长4 159 bp,开放阅读框1 467 bp,编码488个氨基酸,具有典型的AP2结构,同时也具有一些结构特殊性;该基因在细胞核中优势表达,与定位信号预测结果吻合;上游启动子元件含多个与植物逆境或激素应答相关的顺式作用元件,如BOX-W1、CGTCA-motif、TCA-element、WUN-motif等;诱导结果表明Cs AP2-09对外源水杨酸、茉莉酸甲酯、乙烯利及机械损伤均有响应;柑橘溃疡病菌侵染可诱导抗病品种四季橘中此基因明显上调表达,而在感病品种纽荷尔中变化趋势不显著。上述研究表明Cs AP2-09是一个响应溃疡病菌侵染的,可作为研究柑橘抗溃疡病的候选基因。目前已将其在锦橙中超表达,共筛选出8个转基因植株,后期将对其进行抗病性评价以确定其分子育种价值。     

柑橘抗溃疡病转录因子CsAP2-09互作蛋白筛选与分析

以前期获得的柑橘抗溃疡病的正调控转录因子基因CsAP2-09超表达植株为材料,利用GST融合蛋白沉降技术(GST pull-down)联合液相色谱串联质谱(LC–MS/MS)方法筛选并鉴定CsAP2-09的互作蛋白。首先原核表达并纯化GST-CsAP2-09作为诱饵蛋白,然后与CsAP2-09超表达植株叶片总蛋白孵育、洗脱后进行SDS-PAGE验证,最后进行LC–MS/MS鉴定。得到17个互作蛋白,将蛋白进行注释、GO分析、KEGG分析,发现其中5个可能与植物抗病相关(如过氧化氢酶Cs3g27280)。构建这17个蛋白的互作网络,其中14个蛋白的互作关系得到已有数据的支持。对CsAP2-09与互作蛋白的共表达分析发现CsAP2-09超表达引起了16个蛋白表达上调和1个蛋白表达下调。     

溃疡病菌侵染早期柑橘细胞程序性死亡的响应特征及机制

为进一步研究柑橘溃疡病抗性与细胞程序性死亡的关系,以高感品种晚锦橙(甜橙类,Citrus sinensis Osbeck)和高抗品种金弹(金柑类,Fortunella crassifolia Swingle)为试材,从抗性特征、发病早期的相关信号变化、抗氧化酶活性和基因表达变化等方面探讨柑橘细胞程序性死亡响应溃疡病菌(Xanthomonas citri subsp. citri)侵染的特征及机制。接种溃疡病菌后,晚锦橙叶片出现明显的海绵状凸起,为典型的溃疡病症状;而金弹则出现超敏化反应细胞坏死症状。接种前,过氧化氢(H₂O₂)在金弹中的基础水平较晚锦橙高;接种后,两品种的H₂O₂含量均上升,但金弹上升幅度高于晚锦橙。随着H₂O₂水平升高,代表膜脂过氧化程度的丙二醛(MDA)含量在两个品种中均增加,但金弹中增加幅度更大。抗氧化酶系统中的超氧化物歧化酶(SOD)活性在晚锦橙和金弹叶片中均呈下降趋势;过氧化氢酶(CAT)活性在两个品种中均提高且差异不大;过氧化物...     

不同类型柑橘中黄脉病毒衣壳蛋白基因的保守性及复制水平

为研究不同柑橘品种对柑橘黄脉病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)变异的影响,将CYVCV毒株CQ01嫁接接种于4类共35个柑橘品种,对不同植株中CYVCV的衣壳蛋白(CP)基因进行分析,结果发现仅有少数位点发生了变异。运用RT-qPCR技术检测不同柑橘品种中CYVCV的相对含量,发现甜橙类品种中CYVCV的相对含量最高,墨西哥来檬中CYVCV的相对含量最低。植株中CYVCV的含量与其症状不存在明显的关联。