白鹤芋胚性细胞悬浮培养和高效植株再生体系的建立

以白鹤芋（Spathiphyllum cannifolium）试管苗叶柄为外植体诱导获得胚性愈伤组织,建立了胚性细胞悬浮培养系并高频率再生出植株。结果表明,最优的悬浮培养条件为：装有20 mL液体培养基的100 mL三角瓶中接种0.3 g胚性细胞团,悬浮培养基为MS + 0.5 mg ? L-1 TDZ + 1.0 mg ? L-1 2,4-D + 30 g ? L-1蔗糖或麦芽糖,pH 5.8;继代间隔14 d;每个继代周期,胚性细胞团可增殖至接种量的5倍以上;植株再生最优的分化培养基为1/2MS + 0.3 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1蔗糖 + 8.0 g ? L-1琼脂粉,pH 5.8,平均每个胚性细胞团可分化再生出25.1株小植株;胚性细胞的快速增殖和高频率植株再生的状态可保持24周。     

沟叶结缕草胚性愈伤组织继代培养基对其生长和再生的影响

以沟叶结缕草匍匐茎诱导的胚性愈伤组织为材料,通过连续3代的培养,比较了MS、N6和N6AA 3种基本培养基与不同浓度（0.5、1.0、1.5、2.0 mg · L-1）2,4-D组合对愈伤组织生长速度、胚性保持、再生能力、再生植株的抗氧化酶活性、脯氨酸含量和染色体倍性的影响。结果表明：MS培养基添加2.0 mg · L-1 2,4-D对愈伤组织的生长和胚性保持效果最好,胚性愈伤组织比率达85.00%。但不同基本培养基对再生植株的SOD、POD、CAT活性和脯氨酸含量没有显著影响,流式细胞仪测定结果表明其染色体倍性也没有发生变化,植株个体间没有形态差异。     

红姜花体细胞胚胎发生及植株再生的研究

以红姜花（Hedychium coccineum）的花丝和花药为外植体,通过体细胞胚胎发生途径建立了植株再生体系。结果表明：外植体在MS + 4 mg ? L-1 2,4-D + 4 mg ? L-1 NAA + 1 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1 蔗糖 + 7 g ? L-1 琼脂的培养基上经过120 d诱导出愈伤组织,愈伤组织在MS + 1 mg ? L-1 2,4-D + 0.25 mg ? L-1 NAA + 0.25 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1 蔗糖 + 7 g ? L-1琼脂的培养基上经过继代筛选,获得浅黄色松散易碎的胚性愈伤组织。胚性愈伤组织在MS无机盐 + B5维生素+ 100 mg ? L-1谷氨酰胺 + 230 mg ? L-1 脯氨酸 + 100 mg ? L-1麦芽提取物 + 0.02 mg ? L-1 NAA + 0.02 mg ? L-1 TDZ + 0.5 ~ 1.0 mg ? L-1 2,4-D + 45 g ? L-1蔗糖的培养基中通过3个月的悬浮培养,可得到均质稳定的胚性细胞悬浮系（ECS）。胚性悬浮细胞在SH无机盐 + B5维生素 + 100 mg ? L-1谷氨酰胺 + 230 mg ? L-1脯氨酸 + 100 mg ? L-1麦芽提取物 + 0.25 mg ? L-1 NAA + 0 ~ 0.20 mg ? L-1 TDZ + 45 g ? L-1蔗糖 + 7 g ? L-1琼脂的体胚诱导培养基中培养10 d,可见到白色半透明体胚发生,20 d后体胚发育成熟。当TDZ浓度为0.15 mg ? L-1时,体胚诱导率高达4 500个 ? mL-1 PCV ECS（PCV：细胞密实体积）。在SH无机盐 + B5维生素 + 0.20 mg ? L-1 IAA + 0.25 ~ 1.0 mg ? L-1 6-BA + 30 g ? L-1蔗糖 + 7 g ? L-1琼脂的体胚萌发培养基上,体胚萌发率高达100%。将萌发的体胚转移到1/2MS + 1 g ? L-1活性炭成苗培养基中,进一步发育成正常的再生植株,植株室外栽培成活率达90%。     

芹菜胚性愈伤的诱导及高频植株再生体系的建立

通过对芹菜离体培养过程中激素配比、基因型、不定芽产生等条件的研究,建立了芹菜高频植株再生体系。研究表明,芹菜苗期的下胚轴最适于诱导愈伤组织,其愈伤组织诱导和继代培养的最佳培养基是MS+2,4-D1.0mg·L-1+KT1.0mg·L-1和MS+2,4-D0.5mg·L-1+BA0.2mg·L-1+CH500mg·L-1+4%甘露醇;基因型对愈伤组织和胚状体的诱导影响很大;60%以上的愈伤组织在继代培养基上可以从非胚性状态向半胚性和胚性状态转化。愈伤组织在1/2MS+1.5%蔗糖+CH500mg·L-1+KT0.25mg·L-1上获得不定芽或小试管苗;在无激素的MS或1/2MS固体培养基上继续培养不定芽或小试管苗,即可生根或长大,获得芹菜的完整再生植株。     

姜黄愈伤组织再生体系的建立

以姜黄无菌芽的芽基为外植体,进行愈伤组织的诱导和无菌苗再生的研究。结果表明:在MS培养基中添加2,4-D或2,4-D与6-BA的激素组合能够诱导外植体的切口部位产生愈伤组织,但愈伤生长缓慢;在2,4-D和6-BA的激素组合中再加入TDZ,愈伤组织能够不断增殖生长:在MS+0.5mg/L TDZ+0.5mg/L BA+0.3mg/L 2,4-D培养基中,愈伤的诱导率和生长量最高,诱导率达到80%,每个月愈伤生长量为148.6mg;愈伤组织再分化出芽的适宜培养基为MS+0.5mg/L TDZ+2.0mg/L BA+0.2mg/L NAA,再分化率为90%,外植体的平均出芽数为5.1。当试管苗长至5cm时出瓶移栽,成活率可达90%以上。     

中国特有濒危植物八角莲胚状体的发生及其植株再生研究

以我国特有濒危药用植物八角莲(Dysosma versipellis (Hance) M.Cheng)为试材,采用DPS软件正交设计法和SPSS的Duncan's multiple range test,研究了不同植物激素对其愈伤组织形成、胚状体诱导及植株再生的影响,以期为离体培养条件下快速诱导八角莲愈伤组织、胚状体及其植株的再生,以及将来深入研究真菌诱导子诱导八角莲活性成分鬼臼毒素累积的作用机理、信号调控机制和人工种子制作等提供参考依据.结果 表明:八角莲叶和叶柄最适合作为诱导愈伤组织的材料;植物激素对愈伤组织形成的影响效果从大到小依次为2,4-D＞ TDZ＞KT＞NAA＞2-ip,愈伤组织形成的最佳培养基为MS+2,4-D 1 mg·L-1 +NAA 0.05 mg·L-1 +TDZ 0.5 mg·L-1 +2-ip 1 mg·L-1;诱导颗粒状愈伤组织胚状体形成的最佳培养基为MS+6-BA 0.5 mg·L-1 +NAA 0.1 mg·L-1,诱导率为71.33％;胚状体生根和植株再生培养基为MS+IBA 0.5 mg·L-1 +GA30.5 mg·L-1.     

铁线莲‘Multi-Blue’不定芽及体细胞胚发生的初步研究

 用‘Multi-Blue’铁线莲的幼叶、茎尖、嫩茎作为外植体进行培养，发现外植体来源以茎尖为最优，基本培养基以低盐的1/2MS为最佳。茎尖在附加0.5 mg·L-1TDZ+0.01 mg? L-1NAA+2%蔗糖的1/2MS固体培养基上培养1个月后芽增殖率达200.8%，且幼苗长势健壮。茎尖在附加0.8 mg· L-1TDZ+0.5 mg· L-1NAA+2%蔗糖的1/2MS固体培养基上培养时可形成淡黄色块状至颗粒状愈伤，经多次继代培养后可逐渐形成胚性愈伤组织，胚状体诱导率可达60%，进而获得再生植株。     

普通狗牙根种子组培技术优化及植株再生

以普通狗牙根的成熟种子作外植体,通过胚性愈伤组织的发生进行植株再生。结果表明:诱导狗牙根种子产生愈伤组织的最佳培养基为:MS+2,4-D 3 mg/L+壳聚糖4 g/L;暗培养优于光培养,最高出愈率为87.0%;所诱导愈伤组织在1/2原激素浓度下继代,以MS+6-BA0.1 mg/L为分化培养基,获得了再生植株;半透明粘稠状愈伤组织的分化率最高,为63.1%。     

辣椒细胞悬浮培养中体细胞胚形成及植株再生

本研究通过体细胞胚在液体培养基中的培养完来成辣椒(Capsicum annuum var.Ace)植株的再生。并以成熟合子胚为外植体,在含有9.05μM 2,4-D和3%蔗糖的MS液体培养基介质中,形成胚性愈伤组织。将胚性愈伤组织转移到含有4.52μM 2,4-D和3%蔗糖的MS液体培养基中进行继代培养。柠檬酸钾预处理胚性愈伤组织后,细胞放入含6 g/L的L-脯氨酸和铵浓度为10 m M的胚胎起始培养基中。胚胎在含脱落酸1.89μM的1/2 MS培养基中成熟,且体内和体外转化为植物的效率高达97%。     

多倍体萱草的组织培养及其繁殖

本文报道了多倍体萱草花茎外植体愈伤组织的产生和器官分化,以及“试管植株”移栽的条件。发现花茎上部的花梗切段比下部花茎切段的愈伤组织诱导频率高。多倍体萱草品种间,产生愈伤组织的能力、诱导苗的频率以及再生植株数量等,均有不同程度的差异。再生小植株切下置于1/2MS,附加0.3毫克/升IBA的培养基内,一星期左右开始生根,20天后即可移栽土壤中。利用花梗外植体诱导产生的愈伤组织,经长期继代培养,仍保持一定的较高增殖系数和稳定的分化频率。经形态观察,已开花的再生植株,其叶及花形、花色等均无变异现象。     

翠菊‘花束绯红’叶片的植株再生体系建立

以翠菊‘花束绯红’无菌苗为材料,研究了植物生长调节剂浓度及组合、光照条件、不同附加物对叶片及其愈伤组织再生植株的影响。结果表明:(1)在光照培养条件下,诱导翠菊叶片不定芽形成的最适培养基为MS+6-BA3.0mg·L-1+IBA1.0mg·L-1,诱导率为56.7%,平均不定芽数为3.3;(2)黑暗培养不利于叶片不定芽的分化,但促进叶片愈伤组织的形成;(3)培养基中分别添加脯氨酸、水解酪蛋白和NH4NO3等均能明显促进愈伤组织不定芽的诱导,最适培养基为MS+6-BA1.0mg·L-1+IBA0.1mg·L-1+脯氨酸300mg·L-1,诱导率为82.8%,平均不定芽数为4.5;(4)不定芽移到幼苗生根培养基(1/2MS+IBA0.1mg·L-1)上,生根率为89.1%,移栽后成活率达89.3%。     

洋葱高频离体再生体系的建立

 以洋葱（Allium cepa L.）品种‘W465’的幼嫩花序和不同发育时期的幼蕾为外植体材料,研究激素配比对其愈伤组织诱导、再生和生根驯化的影响,以建立洋葱高频离体再生体系。研究结果表明,洋葱幼嫩花序为最佳外植体材料,在含有1.0 mg · L^-1 2,4-D + 1.0 mg · L^-1 6-BA 的B5 培养基上愈伤诱导率为100%,在添加1.0 mg · L^-1 TDZ 的B5 培养基上再生芽分化率为78.13%,在1/2 MS + 0.01 mg · L^-1 NAA 培养基上可诱导生根,驯化移栽成活率达到95%。     

南岭莪术的组织培养技术研究

以南岭莪术根茎上的芽为外植体,采用不同激素浓度的培养基对其进行了芽诱导、丛生芽继代、试管苗生根等研究。结果表明:在MS培养基中添加TDZ 0.05mg/L时,不定芽的诱导率最高,达到90%;丛生芽的增殖培养以MS+TDZ 0.3mg/L培养基为最佳,增殖倍数达到15.8,同时在芽的基部自发形成不定根;将长约3～4cm的生根苗切出,转入1/2MS基本培养基上壮苗,约4周后即可出瓶移栽,成活率达98%以上。     

结缕草愈伤组织诱导及植株再生

 以日本结缕草种子为外植体，2份材料在附加2,4-D 2.0 mg/L水平的Ms培养基上愈伤组织诱导率较高；在含不同水平2,4-D的培养基中添加6-BA对非胚性愈伤组织转变成胚性愈伤组织起重要作用，其中2,4-D 2.0 mg/L配合6-BA 0.1mg/L的Ms培养基诱导出的胚性愈伤组织比例较高；胚性愈伤组织在2,4-D为0.1mg/L的分化培养基上分化率和生根率最高，为46.8％~ 48.1％。     

Development of a regeneration protocol through indirect organogenesis in prickly pear cactus (Opuntia ficus-indica (L.) Mill)

An indirect organogenesis regeneration protocol for Opuntia ficus-indica (L.) Mill var “Blanco sin Espinas” is described. One centimeter square cladode explants sections from previously micropropagated prickly pear plants were cultured in Murashige and Skoog (MS) basal medium supplemented with 20 different combinations of 2,4-dichlorophenoxy acetic acid (2,4-D) and benzyladenine (BA). The best calli induction and regeneration response were observed when 2.26 μM 2,4-D and 2.21 μM BA combination was applied to the nopal explants. Regenerating calli was capable of forming new buds when transferred to MS basal medium supplemented with 0.5 μM BA (proliferation medium). Shoot elongation and rooting were achieved on MS medium without plant growth regulators. Excellent acclimatization to greenhouse conditions was observed for all transferred plantlets. By this procedure no morphological differences were observed between the regenerated and mother plants. This protocol may be also utilized to carry out plant regeneration after genetic transformation, in order to develop transformed plants without the presence of chimeric zones.     

通过体细胞无性系变异获得马铃薯优良新材料

为建立马铃薯（Solanum tuberosum L.）试管薯切片再生体系并评价其体细胞无性系变异的应用潜力,以马铃薯品种‘米拉’的试管薯切片为外植体,通过调节培养基植物生长调节剂配比和蔗糖浓度建立再生体系并获得再生植株;通过逆境胁迫快速筛选出优良再生株系‘M-13’,并比较其生长特性及稳定性;利用SCOT和RAPD分子标记检测其遗传变异。结果表明：不添加蔗糖MS + 2 mg ? L-1 6-BA + 0.25 mg ? L-1 TDZ + 0.1 mg ? L-1 2,4-D可获得最高芽分化率65.33%。与母本‘米拉’相比再生植株‘M-13’生长更为健壮,其试管苗和试管薯质量均约为母本的2倍;‘M-13’的根/冠比和叶绿素含量较母本分别升高了112%、23.78%,而叶片可溶性磷含量和过氧化物酶POD活性则分别下降了16.36%和30.37%。SCOT和RAPD两种分子标记均能在‘M-13’中检测到新条带或缺失条带,与母本间的遗传相似系数分别为0.9323（SCOT）和0.9256（RAPD）,表明‘M-13’的DNA发生变异但仍保持母本的大部分特性。     

防风愈伤组织培养研究

以防风为试材,研究不同外植体、激素组合对愈伤组织诱导及不定芽分化的影响。结果表明:茎段是防风组织培养较为合适的外植体。茎段在添加2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 1.0mg/L的MS培养基上愈伤组织诱导率最高可达100%,叶片在添加2,4-D 1.0 mg/L+6-BA 1.0mg/L的MS培养基上愈伤组织诱导率可达75%;继代后的愈伤组织转到6-BA 1.0 mg/L+NAA0.5 mg/L的MS分化培养基上进行分化,其分化率达72%。