荔枝转基因胚性愈伤组织原生质体分离条件的优化

对荔枝品种下番枝转基因胚性愈伤组织原生质体分离条件进行了优化.结果表明:转基因胚性愈伤组织抗性细胞系Q811培养16-18 d后,转入含8 g.L-1纤维素酶Cellu lose R-10和4 g.L-1离析酶M acrease R-10的CPW+130 g.L-1甘露醇酶液中,在(25±2)℃、黑暗条件下,连续振荡(30-40 r.m in-1)10-11 h进行酶解,转基因原生质体产量达到18.2×106个.g-1,存活率达97.5%.     

荔枝转基因抗性胚性愈伤组织的酯酶同工酶分析

通过对荔枝转基因抗性胚性愈伤组织(EC)的酯酶(EST)同工酶分析发现,9个转基因抗性EC的EST同工酶谱带没有差异,并且与对照的未转化HX30的细胞系差异也不大,这表明荔枝胚性愈伤组织的酯酶同工酶具有保守性,并未受到转基因的影响,可以作为不同荔枝品种转基因材料混杂鉴定的标记。     

枇杷原生质体培养形成愈伤组织

把茂木、尾早生、解放钟、长红等枇杷品种的心脏形至完全成熟的胚,离体培养于分别附加一定浓度植物生长调节剂的B_5,MS和改良MS(大量元素减半,简称mMS)的培养基中,诱导产生胚性愈伤组织.这种愈伤组织在添加低浓度的2,4-D的mMS培养基上产生体细胞胚.以初代和继代培养若干代的愈伤组织作为分离原生质体的材料来源.酶解液的主要成分为纤维素酶、离析酶和崩溃酶,附加0.6 mol/L的山梨醇作为渗透压稳定剂,原生质体的最高得率为1.65±0.6×10~7/g.原生质体经液体浅层培养或半固体培养4—5d后,观察到第1次细胞分裂,2周后形成小细胞团.培养2个月后,获得了愈伤组织.     

香蕉胚性愈伤组织的诱导及胚性细胞悬浮系的建立

分别以3个香蕉品种的多芽体茎尖和5个香蕉品种的未成熟雄花为外植体,诱导产生胚性愈伤组织．结果分别从2个基因组类型为AAA的品种的多芽体茎尖和未成熟雄花获得了胚性愈伤组织,而未能从基因组类型为AAB或ABB的香蕉品种中获得胚性愈伤组织．胚性愈伤组织的诱导率受基因组类型、品种和培养条件等因素的影响．以上述4个品种的胚性愈伤组织为起始材料成功建立了胚性细胞悬浮系,不同香蕉品种,从其胚性愈伤组织建立胚性细胞悬浮系的难易程度有所不同．     

荔枝胚性愈伤组织基因枪转化系统的建立

荔枝是我国南方重要热带亚热带特产果树之一 .建立高效、稳定的荔枝转基因系统 ,对于应用现代生物技术进行荔枝的品种改良具有重要意义 [1] .我们在已建立的荔枝胚性愈伤组织 ( embryogenic callus,EC)体胚发生系统 [2 -4] 及其基因枪转化初步探讨 [5] 的基础上 ,进一步进行了 EC基因枪转化系统的建立研究 ,为将目的基因导入荔枝奠定了重要基础 ,并获得荔枝细胞工程研究中很有价值的有抗性筛选标记的荔枝胚性细胞系 .本研究中 ,以荔枝品种下番枝 (东刘 1号 )幼胚诱导的、长期继代保持的 EC为试验材料 ,建立了荔枝 EC高效遗传转化系统 :…     

基因型和聚乙二醇预处理对甘蔗胚性愈伤组织原生质体分离的影响

对福农８６／１７、桂糖１１号和粤糖５７／４２３等３个甘蔗基因型的胚性愈伤组织进行了原生质体分离，研究了聚乙二醇（ＰＥＧ）预处理对福农８６／１７胚性愈伤组织原生质体分离的影响．结果表明，桂糖１１号的原生质体活力较高，但得率较低，福农８６／１７的原生质体活力和得率都较低，粤糖５７／４２３的原生质体得率较高，但活力也较低．ＰＥＧ预处理可以提高胚性愈伤组织分离的原生质体活力．一定质量浓度和一定时间的ＰＥＧ预处理能够成倍地提高原生质体的得率，以质量浓度为０．５０ｍｇ·Ｌ－１的ＰＥＧ预处理１５ｍｉｎ，甘蔗福农８６／１７每克胚性愈伤组织可分离获得１×１０６个有活力的原生质体     

荔枝胚性愈伤组织染色体数目变异研究初报

荔枝 ( Litchi chinensis Soon.)是我国南方著名的一种热带亚热带木本果树 .自然界的荔枝皆为二倍体 .利用体细胞无性系变异 ,人工筛选出非整倍体或多倍体材料 ,对于丰富荔枝种质资源、育种以及基因定位和功能研究等方面有重要价值[1 ,2 ] .自 1 996年以来 ,我们以“下番枝”、“乌叶”、“元红”等荔枝品种为材料 ,从幼胚、花药等外植体诱导出胚性愈伤组织 ,进行长期继代保持和植株再生研究 ,以期通过体细胞胚胎发生获得非整倍体或多倍体变异材料 .直接用解离液 [酒精 (体积分数为 0 .95 ) +浓 HCl(体积比 =1∶ 1 ) ]解离胚性愈伤组织 ,…     

荔枝花药胚性愈伤组织诱导及倍性检测

探讨了影响荔枝花药胚性愈伤组织诱导的因素,通过2,4-D、KT、NAA三因子的正交试验筛选出荔枝花药胚性愈伤组织诱导的最佳植物生长调节剂组合为2.0mg/L2,4-D 2.0mg/LKT。在探讨不同基因型对诱导率影响的基础上,利用流式细胞仪对不同基因型胚性愈伤组织进行了倍性检测。结果表明,不同基因型荔枝花药胚性愈伤组织诱导率存在显著差异,胚性愈伤组织倍性检测结果也不同。     

玻璃化法超低温保存荔枝胚性愈伤组织及其植株再生

采用玻璃化法对荔枝胚性愈伤组织超低温保存及植株再生进行了初步探讨.将继代保存15 d的荔枝胚性愈伤组织转接到预培养基[MS+50 mL.L-1二甲基亚砜(DMSO)+1 mg.L-12,4-D+20 g.L-1蔗糖+6 g.L-1琼脂糖]中,在5℃低温下预培养.将预培养后的愈伤组织于常温下用体积分数为60%玻璃化溶液(2PVS2)装载20 min,再于0℃下用PVS2溶液平衡40 min;换新鲜的PVS2溶液,迅速投入液氮中保存.1周后取出,于40℃温水浴中化冻,弃PVS2,用1.2 mol.L-1蔗糖液+MS基本培养基的洗涤液洗涤3次,再接种到新鲜的培养基中恢复培养,恢复培养后的胚性愈伤组织能正常进行体细胞胚胎发生、成熟和植株再生.     

荔枝胚性愈伤组织及其体胚发生过程中染色体数目的变化

荔枝胚性愈伤组织及其体胚发生过程中,各离体培养物染色体数目均出现广泛的变异.除正常的荔枝体细胞染色体数目2n=2x=30外,还出现大量染色体数目异常的细胞.植物生长调节剂、培养时间、外植体种类及基因型等对染色体数目变异有一定的影响.愈伤组织染色体数目变异虽然在一定程度上影响荔枝体胚的再生植株频率,但胚性愈伤组织仍能分化形成大量的胚状体.     

幼胚和花药培养诱导荔枝胚性愈伤组织

以福建荔枝主栽品种元红的幼胚为外植体，优化了离体培养诱导胚性愈伤组织（ＥＣ）的培养基．对ＥＣ的诱导，较高质量浓度的蔗糖（５０ｇＬ－１）和２，４－Ｄ（２～４ｍｇＬ－１）优于较低质量浓度的蔗糖（３０ｇＬ－１）和２，４－Ｄ（０．５～１．０ｍｇＬ－１）．ＢＡ和活性炭（ＡＣ）对ＥＣ的诱导有抑制作用．适当的硫代硫酸银（ＳＴＳ）（２９．４μｍｏｌＬ－１）可以抵消ＢＡ的抑制作用．在ＭＳ附加质量浓度为５０ｇＬ－１的蔗糖和２ｍｇＬ－１的２，４－Ｄ培养基上，下番枝、乌叶、元红和陈紫幼胚诱导ＥＣ的频率分别为２２％、１４．５％、１７．２％和１６．８％．在上述培养基中，元红花药产生ＥＣ的频率为０．１％～０．６％，而加入ＳＴＳ（２９．４μｍｏｌＬ－１）可提高至１．２％～５．６％．对影响ＥＣ的诱导因素和它们的相互关系进行了讨论     

马铃薯叶片原生质体的游离纯化

文章以马铃薯四倍体普通栽培品种Desiree、东农303和二倍体野生种S.pinnatisectum品系脱毒试管苗叶片为材料,研究了不同的酶组合、酶液浓度、酶解时间以及温度等因子对原生质体游离纯化的影响。结果表明,低温预处理有助于提高原生质体的产量;最佳酶液组合为纤维素酶1.0%+离析酶0.5%;对于四倍体栽培种较短的酶解时间(13 h)较为适宜,而野生种需要较长的酶解时间(18 h)。     

海岛棉胚性细胞团的原生质体游离和培养

以海岛棉无菌苗下胚轴为外植体诱导产生愈伤组织，挑选胚性愈伤组织建立悬浮培养胚性细胞系。用含有纤维素酶、半纤维素酶和离析酶的混合酶液从新海３号、新海７号和２８２这３个品种的胚性细胞悬浮培养物中游离出原生质体。原生质体用液体浅层法培养仅见再生细胞的１次分裂；用含有低融点琼脂糖的ＫＭ８Ｐ培养基进行琼脂糖珠悬浮法培养，原生质体再生细胞经几次分裂后产生再生细胞团     

福州部分荔枝古树花药胚性愈伤组织的诱导与保持

以福州"宋荔"等部分荔枝古树花药为试材,进行胚性愈伤组织诱导。结果表明,胚性愈伤组织诱导与植物激素的类型、浓度及其组合密切相关,大部分荔枝古树单株花药在M2中诱导率比M1高;同一培养基,不同荔枝古树单株间花药愈伤组织诱导率差异较大,在M1中,X11诱导率高达79.55%,H3的诱导率为0;刚诱导的愈伤组织胚性强,同一荔枝古树单株在不同培养基中体胚发生量不同。诱导出来的胚性愈伤组织在M1和M2培养基上,黑暗中交替培养4代后,转接到M1和M2激素减半的培养基中,于弱光下交替培养,可长期保存。