高产纤维素酶菌株的鉴定及其活性特征

为分析倒木中具有高产纤维素酶菌株的羧甲基纤维素(CMC)酶活性的大小,以天宝岩国家级自然保护区内长苞铁杉倒木作为研究对象,将菌源通过富集培养、滤纸崩解、CMC酶活测定,分离筛选出具有高效降解纤维素的菌株,并将筛选出的高产纤维素酶菌株进行18S rRNA测序分析鉴定。结果表明,经过初筛、复筛,得出TB4为高产纤维素酶的目的菌株,经鉴定该菌株为小刺青霉,该菌株产纤维素酶的酶活性为243.73 U·mL~(-1)。     

纤维素酶高产菌株的诱变选育

[目的]选择有效的方法选育高产纤维素酶菌种。[方法]利用黑曲霉为出发菌株,经过紫外线和亚硝酸复合诱变,选育出酶活力高的突变株进行培养并测定其酶活。[结果]在单因子诱变中,紫外线效果明显优于亚硝酸,致死率70%~80%的诱变剂量比较理想。复合诱变比单因子诱变效果好,产酶能力得到提高,而且菌落生长速度也加快,在多次传代试验中,菌株的性状也比较稳定。出发菌株通过紫外线(15 W,照射距离30 cm左右,照射时间8 min)和亚硝酸(0.1 mol/L的NaNO3处理5 min)的复合诱变,复筛得到纤维素酶高产菌株,纤维素酶活力提高了61.10%,滤纸酶活力提高了64.01%。[结论]通过紫外线和亚硝酸复合诱变能选育出有较高纤维素酶活力的菌株。     

菌糠中高产纤维素酶优良菌株的筛选与鉴定

本研究旨在从菌糠中筛选高产纤维素酶的菌株用于发酵菌糠制备生物饲料。以活菌数和纤维素酶活性为指标,经富集培养,初筛、复筛,得到高产纤维素酶的菌株S-4,纤维素酶活性可达67.5U/mL。通过菌落形态、菌体形态、生理生化特征和16SrDNA分子测序进行优良菌株鉴定。结果表明,菌株S-4为芽孢杆菌属的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),可以应用于菌糠的发酵制备发酵饲料。     

复合诱变选育柚苷酶高产菌株的研究

以柚苷酶产生菌黑曲霉FY01—4为试验菌株,采用紫外线和60Co-γ射线进行复合诱变,经摇瓶复筛选育出一株柚苷酶高产菌株C15,酶活达1285．6U／mL,是出发菌株的3．59倍。连续传代10代,酶活仍保持在1200～1300U／mL之间,菌株产酶稳定性良好,可作为生产柚苷酶的优良菌株。     

复合诱变选育柚苷酶高产菌株的研究

以柚苷酶产生菌黑曲霉FY01—4为试验菌株,采用紫外线和60Co-γ射线进行复合诱变,经摇瓶复筛选育出一株柚苷酶高产菌株C15,酶活达1285．6U／mL,是出发菌株的3．59倍。连续传代10代,酶活仍保持在1200～1300U／mL之间,菌株产酶稳定性良好,可作为生产柚苷酶的优良菌株。     

纤维素酶产生菌的诱变与筛选

[目的]为提高纤维素酶产生菌的酶活力。[方法]以抚顺近郊堆积腐烂秸秆的土壤为分离源,利用CMC刚果红平板培养基筛选出纤维素水解圈与菌落直径比值(Hc值)较大的菌株Y-07。以Y-07为出发菌株,在最适诱变剂量条件下,对其进行紫外线诱变和亚硝酸诱变。[结果]经过3轮复筛,紫外线诱变后的U10菌株为试验中获得的高产纤维素酶菌株,其酶活最高达到2.499 IU/ml,其活性是Y-07的3.41倍。[结论]该方法为进一步提高纤维素酶产生菌的酶活力奠定了基础。     

高产纤维素酶黑曲霉菌株的化学诱变选育

以1株黑曲霉(Aspergillus niger F1)为出发菌株,经过亚硝基胍、硫酸二乙酯和氯化锂诱变处理,选育出1株纤维素酶高产菌株L1.在适宜条件下,其产CMCase活力为出发菌株的150.2%.     

果胶酶高产菌株的微波-硫酸二乙酯复合诱变选育

以黑曲霉(Aspergillus niger)HY-D7为出发菌株,采用微波、硫酸二乙酯(DES)进行诱变处理以获得果胶酶高产突变菌株。首先使用透明圈法进行初筛,选育出透明圈直径与菌落直径比值有大幅提高的突变株,然后采用固体发酵法进行复筛,最终筛选出1株果胶酶高产突变株HY-Z40,其酶活性达到了2 198 U/g,比出发菌株提高了1.51倍,且遗传性能稳定。     

紫外线诱变黑曲霉提高产酶活力的研究(英文)

[目的]选育高产纤维素酶生产菌。[方法]以一株黑曲霉(Aspergillus niger)为出发菌株,经过紫外线(UV)诱变处理,选育出一株纤维素酶高产菌株生产菌。[结果]在适宜的条件下,选育得到的菌株2(15)产CMC活力最强,与出发菌株相比提高了近50%。[结论]今后应用于饲料生产中提供基础。     

复合诱变选育高产纤维素酶黑曲霉菌株

[目的]选育高产纤维素酶生产菌。[方法]以1株黑曲霉(Aspergillus niger F1)为出发菌株,经过紫外线、亚硝基胍、硫酸二乙酯诱变处理,选育出1株纤维素酶高产菌株生产菌。[结果]在适宜条件下,选育得到的菌株D3产CMC活力为出发菌株的145.5%。[结论]NTG、DES和紫外线作用机理不同,但都能对微生物细胞中的DNA造成突变,使其具有新的特性。     

橘皮果胶酶高产菌株的筛选与产酶条件的优化

为合理利用橘皮进行工业化提取果胶酶,采用平板分离法进行果胶酶高产菌株的筛选与产酶条件的优化。结果表明:经过初筛和复筛分离得到1株果胶酶的高产菌株,根据形态特征观察初步鉴定其为黑曲霉。其固态发酵最优产酶条件为:橘皮粉0.5g,硫酸铵0.20g,麸皮10g,水10mL,28℃培养3d,在此条件下,该菌株的酶活力可达到1 447.86U·mL-1。     

高产复合酶益生菌的氮离子注入诱变选育

以产复合酶益生菌黑曲霉ANO1为出发菌株,经多次N 注入诱变处理,结合平板透明圈法定向选育,得到高产变异菌株ANO2。结果显示,出发菌株ANO1酸性蛋白酶、纤维素酶和果胶酶的酶活显著提高,分别由71.6IU/g、141.7IU/g和264.8IU/g提高到996.5IU/g、940.4IU/g和906.5IU/g。变异菌株ANO2经传5代培养,产酶特性稳定。同时对原菌株和变异菌株的生物学特性进行了相关的研究,结果表明变异菌株的生物量和产酶量成正相关。     

以amdS为筛选标记的黑曲霉遗传转化体系的建立

黑曲霉是一种重要的发酵工业微生物,也是用于研究丝状真菌生长、发育、代谢、基因功能等的模式微生物。将构巢曲霉来源的乙酰胺酶编码基因amdS在黑曲霉中异源表达,成功得到黑曲霉amdS转化子。经表型分析,amdS赋予了黑曲霉在乙酰胺为唯一氮源的培养基上生长的能力,而野生型菌株则生长微弱。构建了以amdS为筛选标记的基因敲除载体,以草酰乙酸水解酶基因oahA上下游同源序列构建oahA敲除质粒,转化黑曲霉后成功筛选到oahA敲除菌株,草酸合成水平明显降低。结果表明,利用amdS作为营养筛选标记能够很好地应用于黑曲霉遗传转化操作中。     

以amdS为筛选标记的黑曲霉遗传转化体系的建立

黑曲霉是一种重要的发酵工业微生物，也是用于研究丝状真菌生长、发育、代谢、基因功能等的模式微生物。将构巢曲霉来源的乙酰胺酶编码基因amdS在黑曲霉中异源表达，成功得到黑曲霉amdS转化子。经表型分析，amdS赋予了黑曲霉在乙酰胺为唯一氮源的培养基上生长的能力，而野生型菌株则生长微弱。构建了以amdS为筛选标记的基因敲除载体，以草酰乙酸水解酶基因oahA上下游同源序列构建oahA敲除质粒，转化黑曲霉后成功筛选到oahA敲除菌株，草酸合成水平明显降低。结果表明，利用amdS作为营养筛选标记能够很好地应用于黑曲霉遗传转化操作中。     

桔梗总皂苷与桔梗总次皂苷祛痰作用的比较

采用小鼠酚红祛痰法比较了桔梗总皂苷及桔梗总次皂苷的祛痰作用。试验结果表明:桔梗总皂苷及黑曲霉转化的桔梗总次皂苷均能增加小鼠呼吸道酚红排泌量(P<0.05)。桔梗总皂苷及桔梗总次皂苷的高、中剂量组有较强的祛痰作用。     

紫外-氯化锂复合诱变选育聚半乳糖醛酸酶高产菌株

[目的]研究聚半乳糖醛酸酶高产菌株的复合诱变条件。[方法]黑曲霉孢子经紫外线辐射2 min后,涂布于含0.8%LiCl的培养基上培养,经初筛和复筛后测定聚半乳糖醛酸酶活力。[结果]获得1株产聚半乳糖醛酸酶活力为10.450万U/ml的菌株,产酶活力比出发菌株提高了60.77%。[结论]产聚半乳糖醛酸酶的黑曲霉经紫外线辐射2 min、0.8%LiCl复合诱变后,产酶活力提高了60.77%。     

脂肪酶产生菌的筛选·产酶条件及酶特性研究

[目的]筛选脂肪酶高活性菌株作为脂肪酶生产菌株和脂肪酶基因的供体菌。[方法]从油脂厂等地采集26份含菌样品,采用溴甲酚紫平板对样品进行初筛,以产脂肪酶发酵培养基摇瓶复筛,获得1株产脂肪酶活性较高的菌株09-7-1,经鉴定该菌株为黑曲霉（Aspergillus niger）。采用正交试验对影响该菌株产酶的因素进行了研究,并探讨了该菌株所产脂肪酶的性质。[结果]该菌株最佳产酶条件：碳源为0.5%的可溶性淀粉,氮源为0.2%的酵母膏,培养温度为32℃,发酵液pH为5.2,该菌株最初发酵液中酶活力为13.164 U/ml,优化后酶活力达24.112 U/ml,是最初酶活力的1.83倍。该菌株所产脂肪酶最适作用温度为30℃,最适作用pH为7.0;酶液在60℃保温90 min后,活性损失较少,pH为5.5～10.0内稳定。[结论]该研究可为脂肪酶生产和基因研究奠定基础。     

抗黑曲霉乳酸菌筛选及其抑菌性能研究

本文以10株小米发糕源乳酸菌为研究对象,采用双层平板划线法和96孔板法筛选出对黑曲霉具有较好抑制效果的乳酸菌株,并以乳酸菌对黑曲霉菌落的抑菌率为指标,研究不同pH值、温度、酶处理下乳酸菌对黑曲霉的抑制效果。结果表明：菌株1-6-2X抗黑曲霉效果最好,抑菌率达到87.78%,在pH值3.0～5.0时仍保持抑菌性,有良好的热稳定性,经胃蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶处理后抑菌率显著下降,可作为开发抗黑曲霉乳酸菌的出发菌株。     

高温乳糖酶产生菌株的诱变选育

以产高温乳糖酶的黑曲霉菌株(Aspergillusniger)D2-26作为出发菌株,经1次紫外线和3次γ射线诱变后,获得1株产高温乳糖酶的黑曲霉突变株UCo-3,其菌落形态较出发菌株略有差异,菌落呈圆形年轮状,菌落背面只在接种处有明显的皱褶。该突变株产生的高温乳糖酶活力达16 27U mL。     

发酵凤眼莲的菌种筛选

[目的]通过菌种筛选探讨发酵凤眼莲的利用价值。[方法]将5种菌种分别置于PDA、PD、营养琼脂、牛肉汤固定培养基上进行菌种活化培养,继后通过单个菌种发酵试验和组合菌种平板拮抗试验对菌种进行筛选。[结果]根据5种菌种在凤眼莲固体培养基上的生长状况,选择生孢噬纤维菌、产朊假丝酵母和黑曲霉作为发酵菌种,其菌种组合发酵效果显著优于单一菌种发酵效果。采用3种菌组合在水分65％、pH值7．0和温度28℃的条件下发酵凤眼莲,产物的粗蛋白含量为47．33％,比所用培养基的粗蛋白含量提高173．74％,粗纤维降解率达77．06％,且有发酵香味,具有优质蛋白饲料的特性。[结论]筛选良好的组合菌种对凤眼莲进行发酵,能有效解决凤眼莲作为饲料存在的高水分、高纤维、低蛋白等问题。