转牛LDHA基因酿酒酵母构建及产乳酸能力分析

【目的】探究转牛乳酸脱氢酶A基因（LDHA）酿酒酵母发酵制备食品级乳酸的可行性,为采用转基因商业酿酒酵母规模化制备乳酸提供技术支撑。【方法】从NCBI网站检索牛LDHA基因编码序列,并将编码序列中的同义密码子替换为酿酒酵母偏好密码子,经人工合成后导入酿酒酵母表达载体pAUR123,再将重组表达载体p AUR123-LDHA导入商业化酿酒酵母EC1118株,采用Aureobasidin A筛选转基因酿酒酵母。将转基因及非转基因酿酒酵母EC1118株分别接种于含200 g/L葡萄糖的YPD液体培养基中连续培养5 d,期间检测2组酿酒酵母的LDHA活性及其发酵产乳酸能力,以评估转牛LDHA基因酿酒酵母发酵制备乳酸的可行性。【结果】牛LDHA基因编码序列长1170 bp,共编码389个氨基酸残基;以酿酒酵母偏好密码子替换牛LDHA基因编码序列中的同义密码子,其替换率高达58.35%。牛LDHA在酿酒酵母中的预计半衰期>20 h,其二级结构富含α-螺旋和无规则卷曲。替换后的牛LDHA基因编码序列由表达载体pAUR123携带导入酿酒酵母中,经Aureobasidin A筛选获得1株转基因酿酒...     

合作猪血液蛋白多型性研究

以简单随机抽样法 ,应用淀粉凝胶电泳技术对 55头合作猪 1 3个血液蛋白座位的多型性进行了分析。结果表明 :合作猪在运铁蛋白 ( Tf)、淀粉酶 ( Am)、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶 ( 6PGD)及碳酸酐酶 ( Ca) 4个座位表现多型 ,分别受 4,4,2 ,3个共显性等位基因支配 ,其中 Ca C基因为首次发现。其余 9个座位即 Cp、Hp、CEs、Pa、Es D、PHI、G6PD、PGM、MDH未发现多型。     

猪氟烷标记基因及基因型频率的品种间比较研究

本研究采集了丹系长白猪55头、雅南猪51头和新荣昌猪50头，共156头猪的血样。测定了红细胞磷酸己糖异构酶（PHI）、6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶（6PGD）和血浆后白蛋白-2（PO-2）三个氟烷标记基因位点的基因和基因型频率，分析了位点间的连锁不平衡性。结果表明：6PGD有AA、AB、BB三种表现型；PO2有FF、FS、SS三种表现型；PHI有AA、AB、BB三种表现型，但在雅南猪中仅有AA一种表现型。在基因频率差异上，丹系长白猪与雅南猪在PHI、6PGD、PO2三位点都达到了极显著水平（P＜0．01）；丹系长白猪与新荣昌猪在PHI、6PGD、PO2三位点都达到了显著水平（P＜0．05）；雅南猪与新荣昌猪在PHI、6PGD两位点上达到了极显著水平（P＜0．01），在PO2位点上只达到了显著水平（P＜0．05）。三个品种内的公猪与母猪间在PHI、6PGD、PO2三位点上的基因频率差异都不显著（P＞0．05）。丹系长白猪与新荣昌猪在PHI与6PGD、PHI与PO2、6PGD与PO2以及雅南猪在PO2与6PGD位点间的连锁不平衡系数（D）都达到了极显著水平（P＜0．01）。     

农杆菌介导法将深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因(D6D)导入油菜的研究

△6-脂肪酸脱氢酶基因可将亚油酸转化为γ-亚麻酸。我们将克隆的深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因(D6D)插入植物表达载体pBI121,构建了重组质粒pBI121-D6DMI。通过农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导途径,将深黄被孢霉△6-脂肪酸脱氢酶基因导入了甘蓝型油菜恢复系,经过诱导分化获得抗卡那霉素的再生植株。PCR检测及Souther杂交结果表明,外源基因△6-脂肪酸脱氢酶基因已整合到油菜再生植株的基因组中。     

低温对2种紫草科植物△6 脂肪酸脱氢酶基因表达的影响

以紫草科植物新疆软紫草(Arnebia euchroma)和假狼紫草(Nonea capsica(willd.)G.Don)为材料,翻译延伸因子EF1a为内参基因,利用半定量逆转录聚合酶链式反应(semi-RT-PCR)技术,对2种紫草植物中γ-亚麻酸合成关键酶基因△6-脂肪酸脱氢酶基因的表达进行研究。结果表明,△6-脂肪酸脱氢酶基因在紫草植物的叶、茎、根中均表达,在低温诱导不同时间后紫草植物叶片中△6-脂肪酸脱氢酶基因的表达有所增强。气相色谱分析显示,其产物γ-亚麻酸在低温下积累,推测紫草科植物叶片中△6-脂肪酸脱氢酶基因表达量增加可能与适应低温胁迫的逆境有关。     

马氏珠母贝GAPDH基因克隆及其在去甲基化受精卵中的表达分析

利用RACE(rapid amplification of cDNA ends)技术,克隆了马氏珠母贝(Pinctada fucata)甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)基因的全长cDNA序列。GAPDH基因cDNA全长为1 174 bp(Gen Bank登录号:KX129947.1),其开放阅读框长度为1 014 bp,编码337个氨基酸,蛋白质分子量为36.04 ku,理论等电点7.66,无信号肽。蛋白质亚细胞定位显示GAPDH蛋白分布在细胞质中的可能性最大(69.6%)。该蛋白具有1个甘油醛-3-磷酸脱氢酶NAD结构域以及甘油醛-3-磷酸脱氢酶C末端结构域。系统进化分析表明,GAPDH在亲缘关系上与同为软体动物门的厚壳玉黍螺最近,与其动物学分类地位一致。荧光定量PCR分析显示,经去甲基化试剂5-氮杂胞苷处理后的受精卵GAPDH基因表达水平显著上升(P0.05)。     

2种果蝇(Drosophila melanogaster与D.sechellia)线粒体及NADH dehydrogenase subunit基因的密码子偏好性分析

[目的]分析2种果蝇(Drosophila melanogaster与D.sechellia)线粒体基因组及NADH dehydrogenase subunit基因的密码子偏好性。[方法]利用Codon W1.4计算密码子偏好性参数的相关参数。[结果]2种果蝇线粒体中蛋白编码基因的AT含量比GC含量更高。D.sechellia的线粒体基因组的密码子偏好性比黑腹果蝇D.melanogastera的线粒体基因组的密码子偏好性略强。2种果蝇线粒体基因组中各蛋白编码基因CDs中,RSCU值大于1的密码子都是以A或U结尾,而并不以C或G结尾。2种果蝇线粒体基因组及NADH dehydrogenase subunit基因簇基因的密码子偏好性都可能受到突变压力影响。D.melanogaster线粒体基因组中不存在密码子CGC。NADH dehydrogenase subunit 3基因的密码子偏好性可能比其他NADH dehydrogenase subunit基因更高。此外,尽管大部分NADH dehydrogenase subunit基因偏爱使用A或U结尾的密码子,但是在NADH dehydrogenase subunit 6基因中,有2个AU结尾的密码子(AGA、GCA)的RSCU也为0。[结论]该研究结果为2种果蝇线粒体的进化研究提供了新观点。     

小麦GDH1基因克隆及其功能标记开发

谷氨酸脱氢酶(glutamate dehydrogenase,GDH)在植物体内催化合成谷氨酸的可逆反应,通过GDH固氮比谷氨酸合成酶途径更节省能量。在植物大多数组织中,GDH1是该基因家族中表达最高的基因,比其他GDH成员具有更为重要的作用。本研究从普通小麦基因组中分离了TaGDH1基因在A、B、D染色体组的序列。针对TaGDH1a基因在基因组DNA序列1 900~1 983 bp位置存在的核苷酸差异设计了一个插入/缺失标记,同时将该标记定位在5A染色体上。     

巴西橡胶树谷氨酸脱氢酶基因cDNA片段克隆及表达分析

谷氨酸脱氢酶[Glutamate dehydrogenase,(GDH;E.C.1.1.4.2)]在植物处于逆境或胁迫时,发挥着重要的作用,主要功能可能是解除逆境或胁迫条件下高浓度的铵毒害.该研究通过同源克隆从巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)中获得谷氨酸脱氢酶基因(HbGDH)的部分cDNA片段(GeneBank登录号:DQ672585),基蛋白包含一个谷氨酸脱氢酶保守结构域.BLAST比对表明HbGDH基因与拟南芥(Arabidopis thaliana)、水稻(Oryza sati-va)GDH基因分别有82%、79%的同源率;系统进化树分析发现HbGDH蛋白与拟南芥、水稻GDH蛋白聚为一簇;不同组织的表达分析表明HbGDH基因在胶乳中表达较高,叶片中次之,树皮中最低.     

正响应盐胁迫的甘蔗6-磷酸葡萄糖脱氢酶基因的克隆

从甘蔗中克隆获得1个6PGDH基因的cDNA序列,记为Sc6PGDH(登录号:KF921299).该基因序列含有1个1467 bp的完整开放阅读框,推导编码488个氨基酸残基.生物信息学分析可知,Sc6PGDH基因编码的蛋白分子质量为53.6561 ku,为酸性稳定的亲水蛋白,含有信号肽,可能定位于内质网膜上,具有该类蛋白典型的保守结构域6PGD,且与分离自谷子、玉米和水稻的6-磷酸葡萄糖脱氢酶的氨基酸序列同源性分别高达96.11%、95.70%和93.24%,表明该基因在进化过程中比较保守.原核生物生长试验结果显示,甘蔗Sc6PGDH基因的表达蛋白可以显著增强大肠杆菌Rosetta菌株的耐盐性,推测该基因可能参与了生物体对盐胁迫的应答过程.     

东北民猪、长白猪和杂种猪生长肥育的研究——Ⅱ.肌肉生长的特点

按肌肉占体躯各段重和左半肌肉重比例,研究了前中后躯肌肉、四肌群和29块肌肉生长特点和种间差异。结果表明,1.猪前、中和后躯肌肉占体躯各段重比例,后躯最多,中躯最少,前躯肌肉处于中间;2.四肌群总重占左半胴总重24～31％;3.各猪种前肢肌、肩带肌和后肢高低排列顺位大致相同;4.各猪种肌肉生长存在明显差异;5.部分肌肉与总量有明显关系,根据某一块肌肉可估测肌肉总量,眼肌面积、腿臀比和腿臀围是估测肌肉生产力的主要项目,也是瘦肉型猪选种和评定的重要指标。     

鸡PDK4基因的组织表达分析

利用Real Time-PCR 的方法研究PDK4 基因在肉鸡中的组织表达规律尧在不同生长阶段的组织表达趋势及在不同生长速度肉鸡中的组织差异表达遥结果表明院渊1冤鸡PDK4 基因在肌肉组织渊包括腿肌尧胸肌尧心脏冤表达最高曰渊2冤肌肉组织PDK4 基因在12 胚龄的表达较低袁初生1 日龄时表达最高袁此后有所下降曰渊3冤在垂体尧胸肌尧心脏中袁PDK4 基因在杏花鸡中的表达高于白洛克鸡袁而在腿肌中的表达趋势相反曰胸肌中袁PDK4 基因表达在体重轻组中表达高于重组袁而在腿肌中的表达趋势相反遥     

不同比例民猪血统生长肥育猪肌肉品质及肌纤维特性研究

选择不同比例民猪血统(民猪血统比例为1,1/2,1/4,1/8,0)的商品仔猪60头,在同一营养水平下,研究民猪血统对生长肥育猪肌肉品质及肌纤维特性的影响.结果表明,民猪及其杂种猪与杜大长杂种猪相比肉色好(P<0.05),pH正常,滴水损失低(P<0.05),干物质含量高,肌内脂肪含量高(P<0.05),无异常肉发生,肌肉品质随民猪血统比例的增加而改善.肌纤维直径随民猪血统含量增加而变细,肌束内纤维个数逐渐减少.     

民猪、长白猪及其杂种猪肢蹄性状的比较分析

通过观察民猪、长白猪、长民猪静态结构性状,分析不同品种间以及同一品种左、右肢间的差异,发现民猪前肢肢势多为X-肢势,四肢的系关节角、两个跗关节角都存在结构缺陷,民猪后蹄存在明显的左右不对称缺陷,长民猪前系关节和跗关节也存在结构缺陷。     

民猪与皮特兰猪杂交猪肉质研究

[目的]为民猪的保种、开发利用提供参考.[方法]以皮特兰猪为父本,以民猪为母本,通过杂交得到皮民杂交猪,达90 kg体重时进行屠宰试验,并对其肉质性状进行测定.[结果]皮民杂交猪瘦肉率、眼肌面积、剪切力较民猪均有显著提高,而含水量、肉色与民猪相比没有明显差异,系水力、嫩度和肌内脂肪含量较民猪低.[结论]皮民杂交猪能够很好地继承民猪的优良肉质特性.     

简易猪舍覆盖塑料薄膜对猪冬季肥育影响的研究

1986年11月～1987年4月,研究了简易开放猪舍覆盖塑料薄膜对猪冬季肥育的效果,比较了民猪、长白和长民一代杂种猪的肥育能力。结果表明:(1)简易开放猪舍覆盖一层塑料薄膜提高了棚内温度,增加了日增重,并降低了每单位增重、胴体、可食部分、脂肪和肌肉的耗料量、饲料费;(2)在北方冬季寒冷期间,长民一代杂种猪生产水平最高,其次为民猪和长白猪。民猪和长民猪对寒冷有良好适应能力。我国北方高寒地区可推广塑料薄膜覆盖简易开放猪舍,同时,应以民猪为母本,与瘦肉型公猪杂交,开展商品瘦肉型猪生产,以加速我国北方高寒地区养猪生产的发展。     

不同营养水平对民猪和哈白猪影响的研究 Ⅱ.肌肉和骨骼生长发育规律

一、品种间差异 (一)正常饲养组在正常饲养情况下,哈白猪于50公斤体重以后,产肉量占绝对优势,而民猪在四肢骨长度上占优势,其中后肢骨表现最突出.在骨骼重量上两品种间无显著差异. (二)限制饲养组在维持和低维持饲养情况下,民猪不论在肌肉重量上,还是在骨骼重量和长度上都占优势,而且,随营养水平的降低优势程度越明显.由此充分说明,在营养缺乏的情况下,民猪在肌肉重量和骨骼重量与长度方面的抗逆性强于哈白猪. (三)限制饲养组恢复正常饲养总的结果表明:哈白猪和民猪尽管前期遇到营养严重缺乏(维持营养以下),如后期给予正常饲养补偿,两品种的产肉量基本相同,无显著差异,即缩小了两品种生产瘦肉能力的差异;但同时加大了骨骼长度的品种间差异;对骨骼重量的品种间差异无显著影响. 二、营养水平间的差异在70公斤体重阶段,哈白猪和民猪原限制饲养组的肌肉重量、骨骼重量和长度均与其正常饲养组拉平,即两品种限制饲养组都得到补偿.但很难下结论哪个品种的补偿力强. 三、肌肉和骨骼关系民猪股坐夹角比哈白猪小,而坐骨和股骨又比哈白猪长.因此,延长了股后肌群相对髋关节的力臂,相应增大力矩,提高肌肉功率,结果减少了股后肌群的重量.民猪这种肌肉骨骼结构特点有利于生存而不利于肌肉发育.     

东北民猪、长白猪和三江白猪的个别肌肉相对生长模式的研究

本文对试验数据分别以半胴重、半胴肌肉重、腿臀部重和腿臀肌肉重做自变量按比量方程(y=ax~b)分别计算了a(截距)及b(生长系数)值,根据方差分析结果计算了R~2(相关指数)和S_y(剩余标准差)。结果表明,在所有四种不同自变量情况下,后腿五块肌肉的早熟性顺位均有各自品种鈞一致性,显示出品种间遗传差异特征:民猪均以半膜肌为最早熟,而长白猪和三江猪均以股薄肌为最早熟。当以半胴重和腿臀部重做自变量,各肌肉的6值:长白猪最高,民猪最低,三江猪居中。当以半胴肌肉重和腿臀部肌肉重做自变量时,三品种猪各肌肉b值具有共同的趋势:半腱肌b值最高,半膜肌R~2值最高。研究证明,民猪的内收肌和长白猪的半膜肌最近似各自品种的半胴肌肉总重和腿臀部肌肉重的生长势模式。     

民猪与长白猪主要组织器官生长规律研究

选择民猪和长白猪为研究对象,利用异速生长式分析两个品种1～8月龄组织器官的早熟顺序。结果表明,民猪脂肪沉积较早,在2.5～6月龄间沉积大量的脂肪,生长发育全期腹内脂肪的沉积能力突出,而长白猪在6月龄后沉积脂肪速度加快;两个品种各脂肪组织占胴体比率在6～8月龄维持不变。民猪肉、脂、骨、皮早熟性顺序为:骨骼>肌肉>皮肤>脂肪,而长白猪为:骨骼>皮肤>肌肉>脂肪;两品种猪脂肪组织早熟性顺序均为:肠系膜脂肪>皮下脂肪>肾周脂肪>大网膜脂肪。民猪内脏器官早熟性顺序为:小肠>肾>胰>肝>脾>肺>心>胃>大肠;长白猪内脏器官早熟性顺序为:小肠>肾>肝>胰>心>脾>胃>肺>大肠。     

X-linked 6-phosphogluconate dehydrogenase in drosophila: subunit associations

6-Phosphogluconate dehydrogenase (PGD) subunits have been dissociated and reassociated in vitro. The intermediate PGD of the heterozygous phenotype is reproduced by reassociation in vitro of subunits derived from the two types of PGD from homozygous flies. This result has a bearingon gene action in the diploid organism and on the mechanism of dosage compensation in Drosophila melanogaster.