用磁性微珠浓缩纯化猪瘟兔化弱毒

建立磁性微珠亲和吸附提取法一次性完成浓缩和纯化猪瘟兔化弱毒(HCLV)全过程,应用于经检测不达标猪瘟兔化苗的浓缩和纯化,可以提高效价,保证疫苗质量。该法先进,优于免疫亲和层析法,不仅生产成本低,而且还可用于提取名贵中药,除去血液中靶细胞和酶工程载体。     

口蹄疫A型油佐剂和leo佐剂弱毒灭活疫苗免疫持续期的研究

用实验室配制的口蹄疫油佐剂和leo佐剂A型弱毒灭活疫苗各免疫6月龄健康敏感牛（乳鼠中和抗体滴度小于1：4）5头，免疫后每月采血一次，分离血清；采用固定病毒稀释血清的方法，通过乳鼠中和试验检测免疫牛血清中的口蹄疫A型中和抗体的产生与消长情况，用karber法计算中和效价，绘制动态曲线图。结果显示，口蹄疫弱毒灭活疫苗免疫牛，可以产生高滴度的血清中和抗体，免疫牛血清中和抗体效价均在免疫后1个月左右达到高峰。油佐剂疫苗免疫的牛，血清中和抗体效价比较高，但下降比较迅速；leo佐剂疫苗免疫的牛，血清中和抗体效价比较低，但下降比较平缓。     

O型口蹄疫病毒不同宿主适应毒3A基因序列分析

为了对缅甸98谱系O型口蹄疫病毒不同宿主适应毒的3A编码基因序列及其氨基酸序列进行分析,从而研究O型口蹄疫病毒的演化、变异情况,将O型口蹄疫病毒株O/XJ/10-11接种于牛、乳鼠、猪及BHK-21细胞,获得相应的适应毒,以各组织液中的口蹄疫病毒RNA为模板,反转录并扩增3A基因,采用Vector NTI 11.5和DNA Star生物学软件对3A基因进行比对分析。结果表明:牛、乳鼠、猪、BHK-21细胞4种宿主适应毒,3A基因较稳定,变异较少;变异均发生在3A的第99、114位氨基酸上,说明FMDV 3A基因的第99、114位氨基酸在一定程度上与宿主嗜性有关。本试验结果为进一步分析O型口蹄疫病毒不同宿主适应毒基因组的变异奠定了基础。     

巴氏杆菌弱毒苗和鸡新城疫弱毒苗饮水免疫蛋鸡后分泌型免疫球蛋白A细胞的分布

用巴氏杆菌弱菌苗和鸡新城疫弱毒苗通过饮水分别免疫１２月龄的蛋鸡，以葡萄球菌Ａ蛋白—辣根过氧化酶（ＳＰＡＨＲＰ）和兔抗鸡分泌型免疫球蛋白Ａ（ＳＩｇＡ）间接组化染色，显示消化道相关淋巴组织（ＧＡＬＴ）、呼吸道相关淋巴组织（ＲＡＬＴ）及脾中ＳＩｇＡ细胞的产生和分布。结果显示：巴氏杆菌弱毒菌苗免疫组的蛋鸡在十二指肠和盲肠扁桃体中ＳＩｇＡ阳性细胞于首免后３５天出现较多，并一直持续增加到首免后５６天。鸡新城疫弱毒苗免疫组的蛋鸡的ＳＩｇＡ阳性细胞于首免后２８天数量明显增多，首免后３５天达最高峰。呼吸道和脾中同时也出现较多的ＳＩｇＡ阳性细胞。     

BHK-21细胞的悬浮驯化及其在悬培条件下对口蹄疫A型病毒的培养

选取BHK-21细胞株进行悬浮驯化培养,通过对悬浮培养的培养液、PH、溶氧、罐压、搅拌等各种工艺条件的试验,摸索出稳定的培养条件,实现了连续传代49代。并通过接种口蹄疫A型鼠化弱病毒,比较了单层贴壁细胞和悬浮49代细胞接种病毒后的毒价。结果显示两种培养条件下,BHK-21细胞对口蹄疫A型病毒的培养没有明显差异。     

猪口蹄疫O型病毒ORMF8测毒试验

用中国农科院兰州兽医研究所统一提供的猪口蹄疫O型灭活疫苗效检攻毒用种毒ORMF8,在3个企业同时用架子猪进行测毒,分别测得猪的最小感染量(MID)和猪的半数感染量(ID 50).3家单位测得的MID和ID 50分别为10 -6.0 /2 mL,10 -8.2 /2 mL;10 -7.0 /2 mL,10 -7.0 /2 mL;10 -6.0 /2 mL,10 -7.5 /2 mL.将所有实验动物统计计算,MID约为10 -6.3 /2 mL,ID 50约为10 -7.6 /2 mL.从这些数据得出,该试验1 MID约为20 ID 50.     

临西县猪瘟病毒、口蹄疫病毒O型和A型抗体血清学检测与分析

为了解河北省临西县部分猪场猪瘟病毒和口蹄疫病毒疫苗免疫效果，本研究于2022年从临西县部分猪场采集血清样品550份，采用ELISA法分别检测猪瘟、口蹄疫病毒O型和A型抗体合格率，并进一步统计和分析数据。结果显示，该地区猪群口蹄疫O型和A型抗体合格率均超过90%，而猪瘟抗体合格率为77.3%，均达到国家70%以上合格率的要求。进一步分析发现，所有猪场/发育阶段猪群口蹄疫O型和A型抗体合格率差异较小，所有猪场合格率均高于80%；但不同猪场和发育阶段猪群猪瘟抗体合格率存在差异，部分猪场猪瘟抗体阳性率低于70%；保育猪和育肥猪较母猪群抗体阳性率低，分别为70.39%和66.67%。以上研究结果表明，临西县口蹄疫O型、A型和猪瘟疫苗免疫效果均较好，超过国家制定的最低标准，但仍然有个别猪场或猪群存在猪瘟疫苗抗体合格率不高的现象，应引起重视。     

Ⅰ型鸭病毒性肝炎弱毒疫苗的研制

本试验从山东地区分离的多株Ⅰ型鸭病毒性肝炎毒株中筛选出免疫原性优良毒株CL,将其在SPF鸡胚中盲传致弱后制备鸭肝炎弱毒疫苗。安全检验、保存期和免疫效力试验结果表明,研制的鸭肝炎弱毒疫苗安全可靠,无毒副作用;-20℃条件下可保存6个月以上;接种后抗体产生快,3d便可产生较强的免疫力,7d时抗体中和效价为26.3,一次免疫抗体可维持6周以上。     

Ⅰ型鸭病毒性肝炎弱毒疫苗的研制

本试验从山东地区分离的多株Ⅰ型鸭病毒性肝炎毒株中筛选出免疫原性优良毒株CL,将其在SPF鸡胚中盲传致弱后制备鸭肝炎弱毒疫苗。安全检验、保存期和免疫效力试验结果表明。研制的鸭肝炎弱毒疫苗安全可靠,无毒副作用;-20℃条件下可保存6个月以上;接种后抗体产生快,3d便可产生较强的免疫力,7d时抗体中和效价为2^63,一次免疫抗体可维持6周以上。     

抗原浓缩纯化工艺降低口蹄疫O型和Asia1型二价灭活疫苗免疫副反应研究

为降低口蹄疫O型和Asia 1型二价灭活疫苗使用过程中存在的免疫副反应,本研究采用超滤技术对抗原进行浓缩纯化处理,制备浓缩抗原疫苗,通过测定制苗用病毒液LD50值和浓缩抗原疫苗内毒素含量,进行牛副反应试验,并与未浓缩的普通疫苗进行比较.结果表明,制苗用 Asia 1/JSL06株和OS/99株病毒液经浓缩纯化处理后LD50值比常规处理LD50分别提高了1.0和1.25个滴度,内毒素值显著低于普通灭活苗内毒素值(p<0.01),接种本动物后未出现免疫副反应.本研究结果表明,使用超滤技术浓缩纯化抗原可有效降低口蹄疫灭活苗免疫副反应.     

基于两种动物模型测定猪伪狂犬病病毒LD50与TCID50比较研究

伪狂犬病活疫苗作为一种安全有效、全国广泛推广使用的疫苗,其效力检验十分必要,而伪狂犬强毒毒价测定则是效力检验的一个必要前提。本实验选用BHK-21细胞及家兔和小鼠实验动物,来检测PRV的TCID50和LD50,旨在找出基于家兔和小鼠两种实验动物PRVTCID50和LD50之间的关系,以简化该苗的效力检验过程。结果表明:用兔子做效力检验时,可以用TCID50代替测LD50。     

CDV-N重组狂犬病病毒的毒力及其免疫原性测定

为了探究CDV-N重组狂犬病病毒的毒力及对小鼠的免疫效果,将CDV-N重组狂犬病病毒于BSR细胞上扩毒培养、浓缩后测定其FFD₅₀及LD₅₀;将浓缩后的重组病毒液与复合佐剂按一定比例混匀,按不同免疫剂量、不同免疫方式分组免疫接种小鼠,利用ELISA试剂盒对狂犬病、犬瘟热的特异性抗体进行定性/定量检测。结果显示,重组病毒浓缩后的FFD₅₀值为7.85logFFD₅₀/0.1 mL,LD₅₀值为7.67logLD₅₀/0.03mL;免疫接种后第14天抗体阳性率达100%,小鼠血清中的特异性抗体IgG水平随着免疫剂量的递增而递增。试验结果可为CDV-N重组狂犬病病毒制备口服弱毒疫苗的进一步研究提供试验数据。     

亚硒酸钡注射液对豚鼠的安全剂量和LD50测定的研究

对豚鼠皮下注射不同剂量的亚硒酸钡,饲养15 d后,统计了试验豚鼠的存活数与死亡数.结果显示,亚硒酸钡注射液对豚鼠的安全剂量为60 mg Se/kg体重,其LD50为77.481 9 mg Se/kg体重.     

传染性法氏囊病病毒致弱毒株的培育及其遗传稳定性检测

隆化病毒株GX—IBDVE10C25C15为研究对象,将此毒株通过鸡胚成纤维细胞（CEF）连传25代。通过对克隆化毒株1、5、10、15、20、25代次传代毒TCID50（0．1m1）的测定及对41日龄的SPF鸡的致病性试验,结果表明克隆化毒株不同代次传代毒致病力逐代降低,从15代毒开始免疫器官指数、病理组织学变化与健康对照鸡相比差异不显著,由此证明此毒株已经被驯化为弱毒株,并且随着传代代次的增加遗传性能稳定。该弱毒株有望为控制vvIBDV的感染提供一条新的途径。     

硫代甜菜碱对小鼠的急性和亚急性毒性试验

为硫代甜菜碱的安全性评价提供资料,试验进行硫代甜菜碱对小鼠的急性毒性和亚急性毒性研究。采用改良寇氏法测得硫代甜菜碱对小鼠的口服急性毒性LD50为3739.4mg/kg体质量,LD50的95%可信限为3449.1～4054.2mg/kg体质量,属低毒;采用经口灌胃法对小鼠连续给药1个月,30d后各项指标的测定结果表明,硫代甜菜碱在使用剂量范围内对小鼠的行为、体质量、饮食状况及生理生化指标均无不良影响。硫代甜菜碱毒性极低,在临床使用剂量下,作为饲料添加剂长期使用不会引起毒性反应。     

鸡传染性支气管炎H120细胞活疫苗规模化生产的研究

通过近两年时间的试验,摸索出并掌握了利用转瓶培养鸡传支H120细胞弱毒的关键技术,利用转瓶机成功生产出鸡传支H120细胞弱毒活疫苗三批,依照<中华人民共和国兽用生物制品质量标准>,经物理性状、无菌、支原体、特异性、外源病毒及安全检验均合格,EID50平均值分别为6.93、6.71和6.82,免疫保护率均达87%以上.     

泰妙菌素的体外抑菌活性与一般毒性研究

采用二倍稀释法、改良寇式法和蓄积系数法测定了泰妙菌素的体外抑菌活性、急性毒性和蓄积毒性。体外抑菌试验结果显示,泰妙菌素对猪、鸡支原体、猪链球菌、金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别为0 015、0 125、0 5ug/mL,呈现较好的杀菌效果,且较磷酸泰乐菌素效果好;而对大肠杆菌、禽巴氏杆菌效果较差。一般毒性试验结果显示,泰妙菌素对小鼠、鸡的经口LD50分别为1 58g/kg和2 19g/kg。按国际急性毒性分级标准可判断为实际无毒,蓄积系数K>5,为弱蓄积性,且小鼠对其不具有耐受性。     

中兽药胃动力散的安全性研究

为提供胃动力散的安全性毒理学评价资料，采用改良Ｋａｒｂｅｒ法测定小鼠ＬＤ５０；以剂量递增法测定小鼠蓄积性和耐受性；分别以剂量２２３９０ｍｇ／ｋｇ、８９６０ｍｇ／ｋｇ、４４８０ｍｇ／ｋｇ为３个试验组，设阴性和阳性对照组进行小鼠骨髓微核试验；分别以剂量３６０００ｍｇ／ｋｇ、１８０００ｍｇ／ｋｇ、９０００ｍｇ／ｋｇ为３个剂量组，设阴性和阳性对照组进行小鼠精子畸形试验，结果表明：其中ＬＤ５０为４４７７８ｍ