雏半番鸭呼肠孤病毒的分离与鉴定

自以肝脏、脾脏、胰腺、肾脏表面出现多量针尖大的白色坏死点和法氏囊出血为特征的病死雏半番鸭脏器中 ,以番鸭胚分离到病毒 ,经对分离的病毒株 (FZ2 株 )进行形态学观察、理化特性测定以及血清定性中和试验等 ,发现该病毒无囊膜 ,直径为 5 5～ 70 nm;对氯仿处理敏感 ,对乙醚处理不敏感 ;无血凝活性 ;可被鸡关节炎病毒阳性血清、雏番鸭呼肠孤病毒阳性血清所中和 ,但与鸡传染性法氏囊病病毒、鸡减蛋综合征病毒无血清学关系。据此 ,确定 FZ2 株病毒为呼肠孤病毒     

番鸭呼肠孤病毒诱导雏番鸭免疫器官细胞凋亡的研究

以番鸭呼肠孤病毒腿部肌肉接种10龄健康雏番鸭,复制番鸭"花肝病",并研究其不同时期诱导免疫器官细胞凋亡的能力.结果表明,雏番鸭在感染病毒后的12 h、24 h、48 h、72 h、144 h均能观察到胸腺、脾脏、法氏囊细胞凋亡的典型形态学变化,在12～24 h达到高峰,72 h后逐渐降低.由此可知,雏番鸭呼肠孤病毒对雏鸭免疫器官的细胞凋亡具有诱导作用.揭示该病毒致病机理与淋巴细胞凋亡从而引起的免疫抑制相关.     

番鸭呼肠孤病毒B3分离株的致病性研究

用番鸭呼肠孤病毒B3分离株接种番鸭胚，半番鸭胚和鸡胚，导致接种胚死亡，并产生基本一致的病理变化，死亡胚周身出血，肝，脾有灰白色坏死点，感染番鸭肝细胞出现颗粒变性，随后崩解，该 病毒具有经胚蛋，滴鼻，饮水，肌肉和爪垫注射与同居感染的能力，潜伏期3－11天，不同途径接种1日龄敏感番鸭死亡率达100％，接种1日龄番鸭，半番鸭和雏鸡爪垫可引起注射部位炎性反应，爪垫和肌肉注射1日龄半番鸭和雏鸡不引起死亡。感染番鸭主要可见肝，脾，心肌，肾，法氏囊，腺胃，肠粘膜下层等组织局灶性坏死，其中以肝，脾尤为显著，肝组织和脾白髓结构遭到严重破坏；肝，脑血管周围和肾间质，肺间质，心肌间有淋巴样细胞或／和吞噬细胞聚集，法氏囊淋巴细胞变性和坏死，电镜观察感染胚肝细胞和脾淋巴细胞胞浆内有大量病毒样颗粒及近核包涵 体，感染细胞多核化，空泡化及颗粒化，可见含有病毒样颗粒的凋亡细胞，吞噬细胞胞浆内和凋亡小体内有病毒样颗粒。     

番鸭呼肠孤病毒病雏番鸭实质器官的超微结构

对人工感染番鸭呼肠孤病毒发病雏番鸭的心、肝、肺、肾、脾脏、胸腺、法氏囊等7种实质器官的超微结构进行了观察。电镜下发现：心、肝、肺、肾等实质器官出现不同程度的细胞变性、水肿以及局灶性溶解坏死；各器官血管内皮细胞脂滴增多、水肿以至坏死脱落．通透性增加；浆细胞、淋巴细胞和吞噬细胞呈散在或灶性浸润于坏死区和实质细胞间。免疫器官脾脏、胸腺和法氏囊中的部分淋巴细胞、浆细胞坏死和不同程度凋亡，且细胞溶解坏死形成大小不一的坏死灶并被大量增生的吞噬细胞所吞噬，淋巴细胞数量明显减少。上述结果提示，番鸭呼肠孤病毒能导致番鸭免疫抑制。     

鸭源呼肠孤病毒对雏鸭致病性研究

30只10日龄樱桃谷肉鸭随机平均分为试验组和对照组,试验组静脉接种分离的鸭源呼肠孤病毒(DRV)SDWF株,每只0.2mL(ELD50=10-2.36/0.2mL),对照组每只静脉接种0.2mL生理盐水。于感染后3、6、9、12、15d每组随机抽取3只采血,利用流式细胞术分析外周血CD4+/CD8+比值变化,并测定血清中IL-6及INF-γ含量以及免疫器官指数,同时观察试验组鸭临床症状、剖检变化及病理组织学变化。结果显示,攻毒后3d,试验组雏鸭表现精神沉郁,食欲不振,生长发育缓慢,体质量下降。剖检变化表现为脾脏出血、肿大、坏死,肝脏坏死。病理组织学变化表现为脾脏、法氏囊淋巴细胞流失严重,网状纤维显现;脾脏坏死,形成肉芽肿,血管动脉管壁疏松、增厚。攻毒后3d,外周血CD4+/CD8+比值升高,随后于攻毒后6、9d开始迅速下降,显著低于对照组(P0.05),后期虽有所回升,但是CD4+/CD8+比值仍然低于对照组;血清中IL-6及IFN-γ含量变化规律与外周血CD4+/CD8+比值变化规律相似,在攻毒后9d均显著低于对照组(P0.05);胸腺、法氏囊指数均在攻毒后6d显著低于对照组(P0.05),脾脏指数在整个试验观察期间高于对照组。结果表明,脾脏、法氏囊是雏鸭感染DRV的主要靶器官,免疫器官淋巴细胞流失严重,T细胞数量减少,IL-6、IFN-γ分泌量降低,从而导致机体免疫抑制。     

番鸭呼肠孤病毒的致病性研究

前言 番鸭呼肠孤病毒（Muscovy duck reovirus,MDRV）病（番鸭肝白点病、白点病、花肝病）是由番鸭呼肠孤病毒引起的番鸭一种高发病率、高致死率的传染病,     

一起鹅源番鸭呼肠孤病毒的分离鉴定

2019年1月以来,山东菏泽、聊城、济宁、潍坊等地雏鹅发生了肝脏有密集性白色坏死灶的传染病。为寻找发病原因,笔者对发病鹅进行了症状观察、病理剖检、病原分离和PCR检测。剖检结果表明,病死鹅肝、脾密集性坏死灶出现几率近100%。PCR检测和序列比对结果表明,病原初步确定为番鸭呼肠孤病毒。根据检测结果采取了免疫接种、消毒等综合措施,病情得到了控制。     

雏番鸭呼肠孤病毒病的防治试验

番鸭呼肠孤病毒(muscovy duck reovirus,MDRV)感染,俗称番鸭"白点病"、"花肝病",是由MDRV引起雏番鸭的急性烈性传染病.     

番鸭呼肠孤病毒YF株的分离鉴定及细胞培养特性研究

从广东云浮地区采集一份疑是呼肠孤病毒病料,按常规研磨处理,接种番鸭胚收获尿囊液,提取核酸进行RT-PCR检测,结果是阳性。采用番鸭胚成纤维细胞、DF1鸡胚成纤维细胞系对收获尿囊液进行增殖培养,探索其培养特性,结果该毒株在这种细胞上增殖良好,均产生明显的细胞病变,其中在DF1鸡胚成纤维细胞系上病毒的TCID50最高。     

一株肉鸡呼肠孤病毒变异株的分离鉴定

旨在研究肉鸡呼肠孤病毒分离株致病与基因组变异情况。2017年从山东潍坊地区跗关节肿胀、出血严重商品肉鸡中收集病料,进行病毒分离,通过RT-PCR检测、电镜观察对病毒进行鉴定;将分离到的病毒回归商品肉鸡;设计18对引物对分离株全基因组扩增测序,并进行了遗传进化分析;将分离毒株与经典毒株S1133进行血清交叉中和试验。结果表明分离到一株禽呼肠孤病毒(命名为WF17),回归商品肉鸡能完全复制出临床症状,并能从试验鸡中重新分离到该病毒。该分离株基因组完全符合禽呼肠孤病毒基因组结构特点,主要抗原σC蛋白基因与台湾918株最接近,相似性为92.7%,与S1133株的相似性只有55.9%。WF17株与S1133株的抗原相关指数(R值)只有0.19。目前以S1133株为主的商品化疫苗无法对禽呼肠孤病毒变异株产生有效保护。     

鸭源肠球菌的致病性试验

以临床分离的2株鸭源肠球菌分别接种小白鼠,观察感染后小白鼠的主要临床症状和病变特点,并测定感染小白鼠的发病率、死亡率及半数致死量,旨在探讨这2个菌株对小白鼠的致病性。结果表明,2株肠球菌均能造成小白鼠发病。该病原主要侵害小白鼠肝脏、脾脏和肾脏,最明显的病变特征是引起脾肿大、纤维素性渗出性炎症;肝脏淤血、出血甚至坏死;肾间质血管淤血等。从而揭示了肠球菌可引起小鼠感染发病并导致组织病变而死亡。     

番鸭呼肠孤病毒诱导的细胞凋亡观察

以番鸭呼肠孤病毒人工感染10日龄健康番鸭,运用原位末端标记技术及免疫组织化学方法,对番鸭呼肠孤病毒感染后番鸭多种组织的细胞凋亡进行检测,对死亡因子FasL的表达进行研究。原位末端标记检测显示,多种组织器官中出现大量阳性细胞,表明番鸭呼肠孤感染可引起肝脏、脾脏、肾脏、肺脏、胸腺、盲肠和法氏囊发生不同程度的细胞凋亡。免疫组织化学研究结果表明,感染番鸭呼肠孤病毒后,肝脏、肾脏、肺脏、胸腺、盲肠和法氏囊等多种组织中可观察到FasL表达,且各种组织FasL表达的强弱与原位末端标记检测的细胞凋亡指数高低相一致。结果表明番鸭呼肠孤病毒诱导细胞凋亡的机制与FasL的表达密切相关。     

广东新型鸭呼肠孤病毒σB蛋白基因克隆及序列分析

为研究广东新型呼肠孤病毒（NDRV）的基因变异及遗传演化情况,本试验从广东不同鸭场病死鸭肝脏、脾脏等组织脏器中分离到8株流行毒株,用RT-PCR方法进行σB蛋白基因扩增、克隆与序列分析,并与其他毒株σB蛋白的氨基酸特性、蛋白抗原和蛋白基因进行系统进化比对分析。结果表明,广东省鸭群中感染的NDRV与国内其他地区报道的DRV核苷酸序列同源性很高,达96.6%~99.5%,而与禽呼肠孤病毒（ARV）和番鸭呼肠孤病毒（MDRV）的同源性则较低,分别为64.6%~66.5%和66.2%~67.1%;8株NDRV之间的核苷酸序列同源性高达97.7%~99.7%。与其他毒株比较结果显示,本试验分离的NDRV毒株磷酸化位点均比参考毒株ARV和MDRV少,且大多数区域的抗原指数都较高,抗原性与MDRV较为接近,遗传进化分析结果表明,NDRV和国内其他DRV处于独立的进化分支,ARV和MDRV则处于不同分支。结果表明,广东省流行的NDRV毒株σB蛋白基因序列高度保守,且广东地区分离的NDRV与国内其他地区分离的DRV没有明显的地域差异。     

禽流感病毒番鸭分离株对不同禽类致病性的研究

将禽流感病毒番鸭分离株ZM的感染性鸡胚尿囊液静脉或肌肉接种不同禽类,同时设鸡源JC株对照,以了解毒株的致病特点。结果显示ZM株与同期分离JC株致病能力相当,两毒株均对鸡、鹅、番鸭、鹌鹑和鹧鸪显示了很强的致病能力,致死率50％-100％,死亡禽类的肝、肾、肺、脾、胰腺等多个组织器官均存在严重的损伤。鸽子,肉鸭和绍鸭(除zM株致死一只绍鸭外)均未发生死亡,外观健康。     

抗鸡传染性腺胃炎酶标抗体的制备和应用

在前期从患病鸡腺胃内分离到呼肠孤病毒的基础上，以该病毒为免疫原对兔进行免疫制备高免血清，分离纯化IgG，进行辣根过氧化物酶（HRP）标记，并用ELISA双抗体夹心法对山东省青岛、枣庄、泰安等地区采集的传染性腺胃炎的腺胃样品进行检测，结果表明制备的抗鸡传染性腺胃炎呼肠孤病毒的酶标抗体检测传染性腺胃炎特异性强、灵敏度高、较简便。     

仔猪腹泻粪样中猪呼肠孤病毒的分离鉴定

通过在病毒培养液中添加胰酶的方法,笔者从仔猪腹泻粪样中分离并鉴定了1株能在Vero细胞上稳定产生CPE,即以细胞颗粒增多、肿胀、漂落为特征的猪呼肠孤病毒SC-A株。在感染细胞中,病毒胞浆包涵体及特征性微管样结构明显,病毒粒子多呈典型的晶格状排列,直径约70 nm。克隆测序结果表明：SC-A S2全基因（DQ396805）大小为1 331 bp,其开放阅读框编码1个由418个氨基酸残基组成、相对分子量约为47.14 ku的σ2蛋白;与标准株T1L、T2J、T3D的核苷酸序列相似性分别为86.9%、76.7%、85.4%,推导氨基酸序列相似性分别为94.6%、93.3%、98.3%。在以σ2氨基酸序列构建的进化树中,标准株及野外分离株可被划分为A、B、C 3个大的进化分支;除T3C31外,其余3型野外分离株及SC-A株和所有血清1型病毒株均位于进化分支C中。     

Myxovirus Influenza A Isolated from Ducklings

A strain of haemagglutinating virus isolated by Walker and Bannister in 1953 and identified by them as “Filterable Agent” of ducks has been examined. The evidence suggests that although belonging to the Myxovirus Influenza Type A group, it possesses specific strain properties.     

聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定禽呼肠孤病毒

从感染禽呼肠孤病毒的细胞中,以SDS和酚提取病毒核酸,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法将分节段的核酸分开,经银染色显示,呈3-3-1-3分布,此法可用于禽呼肠孤病毒的快速检测、鉴定。同样方法未能使传染性法氏囊病毒核酸显示。