利用抑制差减杂交技术分离茄子单性结实相关ESTs

以茄子（Solanum melongena）单性结实品系D-10和非单性结实品系03-2的子房cDNA分别为试验组（Tester）和驱动组（Driver）,利用抑制差减杂交（SSH）技术构建了正反两个SSH-cDNA文库,分别包含472和124个克隆。通过测序、序列拼接后,共获得384个Unique ESTs。将其与非冗余蛋白数据库进行BLASTx比对,在E值小于等于1e-10条件下,有257个ESTs能找到相匹配的蛋白质,其中121个ESTs与非冗余蛋白质数据库中已知功能的蛋白质具有高度的相似性。功能注释结果表明,具生物过程、分子功能和细胞组分的EST分别为107、102和119条。推测与单性结实相关的EST有5条：2条ESTs属于MADS-box转录因子家族,1条与生长素增长蛋白同源,1条属于P450还原酶系,1条属于MAPKK家族;另外136个ESTs代表了未知功能基因。     

纽荷尔脐橙叶片矿质元素含量适宜值的研究

 在闽西北中亚热带红壤地区,采集纽荷尔脐橙[Citrus sinensis（L.）Osbeck‘Newhall’],50个果园（范围N25°3′27″ ~ N27°8′、海拔160 ~ 660 m）,100个单株的叶片、土壤和果实样品,研究果实品质及株产等级与26个矿质元素的关系。结果表明：①果实品质受叶片矿质元素的影响依次为：可溶性固形物（36.5%,贡献率,下同）> 粗纤维（27.1%）> 可滴定酸（20.0%）> 单果质量（16.1%）;叶片矿质元素对品质影响的贡献率依次为：K（15.8%）> Cu（11.3%）> Ca（11.2 %）> N（10.5%）> Ni、B（8.7%）> Cd（7.8%）> P（7.4%）> Mg（7.3%）,累计贡献88.7%。②叶片矿质元素对株产等级影响的标准回归系数排序为：La（–0.553）> Ni（–0.405）> Zn（+ 0.395）> Cu（–0.377）。③推荐16项叶片矿质元素诊断标准“元素（< 缺乏;适宜下限 ~ 适宜上限;> 过量）”：N（2.7% ~ 3.2%）、P（0.13% ~ 0.20%）、K（1.2% ~ 1.9%;> 2.2%）、Ca（2.5% ~ 4.0%）、Mg（< 0.20%;0.22% ~ 0.45%）、Cu（5.0 ~ 25 mg · kg^-1;> 60 mg · kg^-1）、Zn（20 ~ 50 mg · kg^-1）、Fe（50 ~ 200 mg · kg^-1）、Mn（20 ~ 150 mg · kg^-1）、B（< 20 mg · kg^-1;35 ~ 150 mg · kg^-1）、Mo（0.05 ~ 1.0 mg · kg^-1）、S（0.28% ~ 0.40%）、Cl（< 0.2%;> 0.5%）;限量元素Ni（≤ 3.0 mg · kg^-1）、Cd（≤ 0.3 mg · kg^-1）、La（≤ 12 mg · kg^-1）。     

纽荷尔脐橙果实品质评价系统的建立与应用

为使纽荷尔脐橙果实品质评价标准化,为各地纽荷尔脐橙的品质比较提供参考。收集了湖南省不同产区的纽荷尔脐橙28份构建纽荷尔脐橙果实品质评价系统,采用30份脐橙果品对其进行应用。通过测定果品的9个果实品质指标作为数据集,基于纽荷尔脐橙品种特性,纽荷尔脐橙果实评价系统将指标数值趋向性调整,标准化,赋予权重,得出纽荷尔脐橙果实品质得分排名,结合主成分分析法及专家品鉴的方法验证纽荷尔脐橙果品评价结果。建立了纽荷尔脐橙果实品质评价系统模型,开发并应用了纽荷尔脐橙果实品质评价应用软件。与主成分分析法和专家品鉴结果相比,该评价系统能够为纽荷尔脐橙果实品质评价提供更为客观的结果。纽荷尔脐橙果实品质评价系统,能够为多品种多地区脐橙果实品质提供客观标准的评价,为品种选育及适地适栽提供参考。     

本地早柑桔果实贮藏中内源ABA、IAA变化与枯水的关系

本地早柑桔果实贮藏中内源ＡＢＡ、ＩＡＡ变化与枯水的关系陈昆松１陈青俊２张上隆１（１浙江农业大学园艺系，杭州３１００２９；２浙江省轻工业研究所，杭州３１０００９）关键词柑桔，果实，ＡＢＡ，ＩＡＡ，枯水ＴｈｅＲｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐＢｅｔｗｅｅｎＣｈａ...     

‘岩溪晚芦’椪柑果皮与果肉差减cDNA文库的构建及初步分析

 以‘岩溪晚芦’(Citrus reticulata Blanco)成熟果皮和果肉为材料,采用抑制性差减杂交技术,成功构建了果皮（tester）与果肉（driver）的差减cDNA文库。结果显示：cDNA克隆外源插入片段大小介于100～500 bp之间。成功对411个克隆进行了测序,测序结果经与NCBI基因库中序列进行比较,377个EST 找到了同源序列,它们分属于126个基因,涉及到与色素合成、能量代谢、初级代谢、次生代谢、抗逆防御、蛋白代谢、信号转导、香味形成、果皮软化（衰老）、精油合成、抗氧化代谢等代谢途径和生理生化过程。还有一些基因涉及到三价铁螯合物、反转录转座子gag蛋白、查尔酮合成、硼离子转运、儿茶酚氧位甲基转移酶等功能。功能已知且没有重复的EST共有63个,占总数的49.2%。有5个基因共62个克隆虽在Blast搜索时找到了较高的同源性序列,但功能目前尚未明确,有待进一步深入分析。另有34个基因未搜索到同源序列,可能为新发现的基因。     

纽荷尔脐橙疑似耐寒突变体的初步鉴定与评价

【目的】鉴定纽荷尔脐橙疑似耐寒突变体是否发生了遗传性状变化,评价其耐寒能力是否较野生型增强。【方法】以纽荷尔脐橙突变体与野生型为试材,观测比较春梢叶片性状和果实外观性状,分析比较果实内在品质,应用SSR分子标记鉴定遗传变异,石蜡切片观测比较叶片组织结构,分析比较-6℃低温处理叶片的电解质渗出率、脯氨酸含量、超氧化物歧化酶活性等抗寒性相关指标。【结果】纽荷尔脐橙突变体春梢叶片、翼叶、叶柄等性状,果实形状、果皮颜色、果实大小、油胞等性状与野生型没有差异;果实含酸量连续2 a（年）较野生型低24.7%～38.6%;1对SSR引物扩增显示突变体与野生型在250 bp左右存在2条差异带;突变体叶片细胞结构紧密度、栅栏组织与海绵组织厚度的比值均极显著大于野生型;突变体叶片的电解质渗出率未低温处理以及-6℃处理2～10 h均低于野生型,-6℃处理8 h的电解质渗出率相当于野生型叶片-6℃处理6 h的水平;突变体叶片中脯氨酸含量极显著高于野生型,-6℃低温处理使突变体与野生型叶片脯氨酸含量差异增大;突变体超氧化物歧化酶活性未低温处理（0 h）和低温处理2 h至10 h均显著高于野生型。【结论】该突变体...     

纽荷尔和清家脐橙果实大量矿质营养元素含量与累积变化

在重庆北碚,以30年生枳砧清家脐橙和纽荷尔脐橙为材料,分析果实生长发育过程中N、P、K、Ca、Mg和S等6种大量营养元素含量和累积量变化。结果表明,果实生长发育过程中,纽荷尔和清家果实中N、P、Mg和S含量4月最高,Ca在10月最高,纽荷尔和清家K含量分别在9月和7月最高;Ca的主要累积时期,纽荷尔脐橙果实为6—7月和9—10月,清家脐橙果实为6月、8月和10月;除Ca外的其他大量矿质营养元素累积量较大的时期,纽荷尔和清家脐橙果实的总体上均为6—9月和11月,但清家脐橙累积最高峰一致出现在6月,纽荷尔脐橙累积最高峰至少推迟1个月左右。     

纽荷尔脐橙果实发育期叶片不同形态硼含量与缺硼的关系

以‘纽荷尔’脐橙为材料,连续两年研究了缺硼和正常（对照）叶片总硼和不同形态硼含量的动态变化。结果显示：1）在果实膨大期（花后120~160 d）,越冬老叶和春梢新叶的总硼含量均有一个显著下降的过程,且大部分时间里缺硼处理的比对照硼含量低;2）缺硼树越冬老叶的自由态硼和半束缚态硼含量在果实膨大期很低,对照较高;缺硼树越冬老叶在花后120~160 d束缚态硼含量较低,相对含量较高;3）缺硼和对照树春梢新叶的自由态硼和半束缚态硼含量比越冬老叶高,束缚态硼含量较越冬老叶低;缺硼树叶片的3种形态硼含量在花后140~160 d显著低于对照,且束缚态硼相对含量较高。就‘纽荷尔’脐橙叶片不同形态硼的动态与缺硼的生理机制进行了讨论。     

‘纽荷尔’脐橙果实发育过程中几种柠檬酸代谢相关基因的表达特征分析

【目的】探讨‘纽荷尔’脐橙果实发育过程柠檬酸变化规律及其与相关基因表达的关系。【方法】以赣南脐橙‘纽荷尔’为材料,利用高效液相色谱法(HPLC)测定了脐橙果实中有机酸组分的变化规律并采用实时定量PCR(Q-PCR)分析了柠檬酸代谢相关基因的相对表达量。【结果】‘纽荷尔’脐橙果实有机酸以柠檬酸为主,奎尼酸次之,苹果酸最少。伴随着果实发育成熟,柠檬酸、奎尼酸和酒石酸含量则呈下降的趋势,总有机酸及可滴定酸的变化趋势与柠檬酸的变化趋势一致;Cit CS1的转录丰度呈现不规则的表达模式,而Cit CS2的转录丰度变化不大,中期略有下降,呈现相对稳定的表达模式;Cit Aco1呈前期低丰度表达,后期高丰度表达,而Cit Aco2从盛花后60 d到成熟呈平稳上升趋势,伴随果实发育,Cit Aco3相对表达量变化幅度较大,总体上呈现先升后降的趋势;果实中Cit IDH1和Cit IDH3的相对表达量呈平稳上升的态势,而Cit IDH2的相对表达量在整个发育阶段比较低;Cit GAD4呈高丰度表达的态势,且变化幅度比较大,在盛花后120 d相对表达量达到最大值,但果实中Cit GAD5的相对表达量一直较低,且伴随果实成熟呈下降趋势;脐橙果实中Cit GS2表达水平略低,在整个发育阶段呈现先平稳上升再平缓下降的趋势,变化幅度不大。【结论】随着‘纽荷尔’脐橙果实发育成熟,柠檬酸降解,总有机酸含量下降,这种变化与柠檬酸合成无直接关联,而对降解相关基因的表达有所影响,尤其是Cit Acos、Cit IDH1、Cit IDH3与Cit GAD4的表达水平随着柠檬酸的下降而不断升高,可能是影响‘纽荷尔’脐橙果实成熟过程有机酸含量不断下降的原因之一。     

‘纽荷尔’脐橙与‘尤力克’柠檬种间体细胞杂种的代谢特征分析

利用GC–MS(气相色谱—质谱)测定柑橘种间体细胞杂种——‘纽荷尔’脐橙(Citrus sinensis Osbeck)+‘尤力克’柠檬[Citrus limon(L.)Burm. F.]和其两个融合亲本果实的初生代谢物含量,包括可溶性糖、有机酸、氨基酸和脂肪酸;利用LC–MS(液相色谱—质谱)测定果实类黄酮含量,综合评估体细胞杂种果实的代谢特征。结果表明,体细胞杂种初生代谢物组成总体偏向‘尤力克’柠檬,苹果酸、柠檬酸和脂肪酸含量均高于两亲本,大多数氨基酸含量介于两亲本之间。体细胞杂种中共检测到48种类黄酮,整体偏向柠檬亲本;其中有33种物质含量介于两亲本之间,15种高于或低于两亲本。     

纽荷尔脐橙果实对源叶光合作用的影响

在纽荷尔脐橙果实膨大期,选取1年生双果枝、单果枝和营养枝,晴天测定源叶净光合速率(Pn)、气孔导度(Cond)、蒸腾速率(Trmmol)、胞间CO2浓度(Ci)和叶面温度(Tleaf)等生理指标,探讨挂果对源叶光合特性的影响。结果表明,挂果水平对源叶Pn、Cond、Trmmol有显著影响,对Ci和Tleaf无明显影响;上午以挂果多的枝条的源叶Pn、Cond、Trmmol峰值更低,下午则呈相反的趋势。不论枝条挂果多少,源叶Pn日变化呈典型的"双峰"曲线;Pn与Tleaf呈抛物线相关,当叶温达36℃左右时叶片光合作用最强。     

利用抑制消减杂交技术分离辣椒细胞质雄性不育育性恢复相关EST

 以辣椒(Capsicum annuum L. ) 细胞质雄性不育系23A、121A, 和其相应的近等基因恢复系23C、121C为试验材料, 利用抑制消减杂交( SSH) 技术成功构建了CMS恢复基因诱导表达的消减cDNA文库。结合高密度点阵膜杂交差异筛选, 获得了282个阳性克隆。通过测序, 除去重复序列共得到175个Unique ESTs。在GenBank上进行BLAST分析, 55个EST片段未找到对应的同源序列, 可能代表了新基因;120个EST片段找到了对应的同源序列, 包括103个已知功能基因和17个未知功能基因。按照MIPS功能分类法, 将其分为14个功能组, 涉及代谢、胁迫应答、蛋白活性、转录因子、信号转导等多方面的功能。     

纽荷尔脐橙及其椭圆形变异株系果实生长规律研究

对纽荷尔脐橙及其椭圆形变异株系的果实纵、横径进行定期田间测定,研究其果实生长的变化规律。结果表明,纽荷尔脐橙及其椭圆形变异株系果实纵、横径和体积在生长过程中均出现3次生长高峰,且高峰出现的时间一致;第1、2次生长高峰生长量较大,是决定果实大小和品质的关键时期。     

赣南纽荷尔脐橙果实品质比较研究

以赣南9个县市的96个纽荷尔脐橙园为试材,研究树龄、土壤类型、施肥种类和年平均气温对脐橙果实品质的影响。结果表明,随树龄增加,脐橙果实可溶性固形物含量提高;红壤和紫色土果园的果实品质较好,黄壤稍差;施用花生饼肥或生物有机肥为主的果园果实品质更好,可溶性固形物含量和固酸比显著高于施用化肥为主的果园;年平均气温19.2～19.7℃生态区的果实可溶性固形物含量和固酸比显著高于17.7～17.8℃生态区和18.5～18.8℃生态区。     

纽荷尔等30个脐橙品系在云南引种比较试验

针对当地柑桔生产以宽皮柑桔类为主 ,甜橙尤其优质甜橙种植比例偏小 ,部分柑桔种植者盲目引种脐橙的实际 ,为调整优化品种结构提供依据 ,于1989年 8月引进 30个脐橙品系进行试种筛选。现将主要结果报道如下。1　材料与方法试验在海拔 12 0 0m的云南南盘江中上游的华宁县牛山果园进行。该地年平均气温 2 0 0℃ ,极端最低温 - 2 7℃ ,极端最高温 37℃ ,≥ 10℃年积温74 0 0℃ ,日照 1991 5小时 ,雨季相对湿度 74 %～80 % ,属南亚热带气候 ,赤红壤土类 ,土壤有机质1 80 % ,pH值 7 0。供试脐橙品系为 :纽荷尔、林上、清家、白柳、森田、奉节 …     

不同柑橘砧木对锦橙果实品质的影响

 2006—2008年连续3年研究11种砧木对铜水72-1锦橙果实品质的影响。结果表明：不同砧木对果实颜色和内在品质均有影响,其中以卡里佐枳橙为砧的果实亮度最好,黄色度值最高,果实最大,果皮最薄;以路比枳为砧的果实红色度值和固酸比（TSS/TA）最高,果皮最厚;以沃尔卡姆为砧的亮度最差,黄色度值、单果质量和可食率最低,中心柱最小;以C35枳橙为砧的中心柱最大且维生素C含量最低;以光皮酸橙为砧的果实红色度最低而可食率最高;以里其16-6枳为砧的果实可溶性固形物（TSS）含量最高;以孙楚沙橘为砧的果实可滴定酸（TA）和维生素C含量最高,而TSS/TA最低;果实TSS和TA最低的砧木为枸头橙。品质综合评价,性状表现较好的为孙楚沙橘、卡里佐枳橙和C35枳橙,而表现较差的为兰普莱檬和沃尔卡姆柠檬。     

夏金脐橙落花落果规律研究

脐橙落花落果严重,着果率较低,保花保果的成败是脐橙高产的关键。对夏金脐橙的落花落果进行了观察。结果表明,不同年份夏金脐橙落蕾落花的开始时间和高峰期不同,落蕾落花高峰期一般出现在落蕾落花开始后的4~5天,2008年集中在4月中旬初,2009年在3月下旬末;4月21日开始第一次生理落果,持续35天左右,于5月底结束,4月底至5月初出现落果高峰;落花结束后15~16天,于5月上旬出现第二次生理落果,5月中旬出现落果高峰期,不同年份落果持续时间有别;落蕾落花数量超过生理落花落果总数的60%,第一次生理落果所占比例也较高,第二次生理落果所占比例最小,稳定在3.0%左右;夏金脐橙着果率1.65%,脐黄率29.4%,裂果率2.4%。