牛卵巢黄体状况与腔前卵泡采集数量的关系

根据牛离体卵巢黄体的不同状况，将31枚卵巢分为5种类型，并采用机构方法分离腔前卵泡，观察不同黄体状况卵巢与腔前卵泡采集数量的关系，结果表明，火山口型，圆锥型和蘑菇型3种大黄体的卵巢腔前卵泡采集量多，扁平片状和表面无黄体型卵巢腔前卵泡采集量较少，具有黄体状况的卵巢初级卵泡（Pm)采集数量多于无黄体类型卵巢，原始卵泡（Pf) 以3种黄体较大的卵巢采集数量最多，次级卵泡（Sc)则以黄体为火山口型卵巢为最多，说明卵巢黄体状况不同，其腔前卵泡采集数量有所不同。     

影响牛腔前卵泡机械分离效率的因素

哺乳动物卵巢皮质中有大量的腔前卵泡，这是体外生产胚胎的一个潜在的卵母细胞来源。通过腔前卵泡体外培养获得成熟卵母细胞，以最大限度地发挥优良母畜的遗传和繁殖潜力。然而腔前卵泡分离效率一直制约着有关研究工作的开展。牛卵巢组织结构致密，纤维化程度高，机械分离牛腔前卵泡技术上有很大难度。许多研究者尝试酶消化分离腔前卵泡。虽然能分离到相对较多的腔前卵泡，但酶处理不但费用昂贵，处理时间长．而且酶处理及酶的残留都会降低卵泡活力。有人用显     

牛腔前卵泡的简易机械分离方法

采用两种机械法分离牛腔前卵泡。方法一 (M -1) ,皮肤移植刀切割、剪碎、过滤镜下直接捡卵法。方法二 (M -2 ) ,皮质片剪碎、离心、悬浮、过滤镜下捡卵法。M -1平均每卵巢采卵数为 46 9个± 18 2个 ,M -2为 6 8 4个± 12 5个 ;处理时间M -1为 2 5 4min± 6 7min ,M -2为 46 3min± 16 8min ,两种方法采集腔前卵泡数量及处理时间均存在显著差异。平均每小时采集卵泡数分别为 99 5和 87 2个 ,M -1多于M -2。两种方法获得腔前卵泡大小分布规律也有明显差异 ,M -1采集腔前卵泡直径为 6 0～ 15 0 μm ,绝大部分是次级卵泡 ,而M -2获取腔前卵泡则偏小。总的看来 ,M -1处理时间短 ,回收效率高 ,方法简便 ,且分离卵泡直径较大 ,适于体外培养 ,是机械分离牛腔前卵泡的一种理想方法。     

猪腔前卵泡机械分离研究

本研究以分离到的卵泡数量、分离时间和卵泡在体外培养3 d后的存活率为指标比较了两种机械方法分离猪腔前卵泡的效果。结果表明:用针刮法分离猪腔前卵泡的数量(Φ<50μm:203600±59000;50μm≤Φ≤150μm:29.40±10.34;Φ>150μm:9.30±3.29)极显著(P<0.01)高于剪碎法(Φ<50μm:18900±12000;50μm≤Φ≤150μm:13.95±3.70;Φ>150μm:4.95±1.61),而且针刮法16.16±1.43 min分离时间比剪碎法(20.30±1.48)min短,(P<0.01)。体外培养3 d后,腔前卵泡存活率在两种方法之间没有明显差异。说明应用针刮法分离猪腔前卵泡能有效保护卵母细胞和颗粒细胞的正常形态以及基膜的完整性,从而使分离到的猪腔前卵泡维持正常的生理活性。     

绵羊卵巢腔前卵泡体外机械分离与采集的一种新方法

这是一种新的机械分离卡拉库尔羊卵巢腔前卵泡的方法:将Ф3mm带有钢丝的电线一端去掉胶皮,暴露内部钢丝并将其压成扁形,常规灭菌处理。用带胶套的镊子将卵巢夹住,用钢丝刮擦其表面后用PBS溶液冲洗两次,然后收集冲洗液;将刮过的卵巢置于培养液中用组织剪剪成不同大小的碎片,用网筛过滤,收集滤液,滤液和冲洗液在37℃培养箱中静置15分钟后,在90倍以上体视显微镜下镜检检卵。这种方法有效地提高了检卵率,每小时可达57.11枚±4.32枚(n=5小时)。     

牛腔前卵泡的体外培养

通过在α- MEM和 D- MEM/ F1 2 基础液中添加不同比例的 ITS、丙酮酸钠、谷氨酰胺、次黄嘌呤和血清 ,观察了不同基础液对牛腔前卵泡体外生长发育的影响 ,从而筛选出较好的组别。在筛选出的基础液组别中添加 3个水平的FSH、L H、E2 ,观察了其对牛腔前卵泡体外生长发育的影响。结果表明 ,α- MEM和 D- MEM/ F1 2 2种基础液中以α-MEM为好 ,不同的基础培养液组合对牛腔前卵泡的体外培养有一定的影响。添加不同水平的激素对牛腔前卵泡体外培养也有显著影响。试验初步筛选出最佳的培养液成分为α- MEM ITS(I- 5 m g/ L ,T- 5 mg/ L ,S- 5μg/ L ) 丙酮酸钠(0 .2 3mmol/ L) 谷氨酰胺 (1.5 m mol/ L) 次黄嘌呤 (2 m mol/ L) 血清 (7.5 % ) FSH(0 .2 5 mg/ L) L H(5 IU/m L ) E2 (0 .5 mg/ L )。     

无血清培养液对牛腔前卵泡体外发育的影响

本文研究了基础培养液中不添加犊牛血清(FCS)及添加不同比例FCS对牛腔前卵泡体外发育和激素分泌的影响。结果显示:添加FCS对腔前卵泡体外生长无明显促进作用,对腔前卵泡的体外发育、存活及激素分泌也影响不大。腔前卵泡在无血清条件下可持续生长、分泌性腺激素。     

牛腔前卵泡在体外无血清培养中发育为有腔卵泡

用无血清培养系统研究了牛腔前卵泡的体外培养。直径为100－200μm的牛腔前卵泡在添加L－谷氨酰胺、BSA、睾酮、转铁蛋白和硒的McCoy′s 5a培养液中培养，卵泡保持正常的形态结构并持续生长，培养10d左右形成贸泡腔，成腔率约50％。培养液中添加胰岛素对卵泡直径的增长和卵泡腔的形成有明显的促进作用，但添加FSH对腔前卵泡的生长未表现促进作用。     

卵巢大小及发育状况与牛腔前卵泡采集数量的关系

用简单机械分离法处理了 12 7枚成年牛卵巢。结果显示 ,在外观正常的卵巢中 ,腔前卵泡的采集数量与卵巢的大小成正相关关系 ,而有无黄体与腔前卵泡的采集数量无明显关系 ;卵巢上不同大小的可见卵泡的数量和分布与腔前卵泡的采集量有关。卵巢上可见卵泡分布均衡 ,大、中、小卵泡均有分布 ,小卵泡不过多以及无大卵泡 ,但中、小卵泡较多的 ,无论是否有黄体存在 ,均可获得较多腔前卵泡。而卵巢表面脂肪化、卵巢充血、有弥散性片状黄体及幼稚卵巢的 ,则腔前卵泡分离很少或几乎分离不到     

维生素对牛腔前卵泡体外培养的影响

用改良的McCoy’s 5a无血清培养液 (含 3mML -谷氨酰胺、0 1%BSA、2 0ng/ml睾酮、2 5 μg/ml转铁蛋白、10 0ng/ml胰岛素和 4ng/ml硒 ) ,在 96孔培养板中 ,每孔 2 5 0 μl培养液的条件下 ,研究了维生素C和维生素E对腔前卵泡体外发育的影响。结果表明 :在培养液中添加 90 μM的维生素C有利于维持腔前卵泡体外生长时结构的完整性 ,显著提高牛腔前卵泡体外培养 10天的存活率 (P <0 0 5 ) ,但并没有发现对腔前卵泡的生长、发育和成腔有促进作用 (P >0 0 5 ) ;在培养液中添加3 0 μM的维生素E对Φ >13 0 μm的腔前卵泡及其卵母细胞有促进发育和促进卵泡腔形成的趋势 (P >0 0 5 ) ;在培养液中联合添加 12 μM维生素E和 96μM维生素C ,能显著提高牛腔前卵泡体外培养 10天的存活率 (P <0 0 5 ) ,并对牛腔前卵泡的生长和发育有一定的促进作用 ,但差异不显著 (P >0 0 5 )。     

猪腔前卵泡的分离及培养试验

试验建立了两种猪腔前卵泡的分离方法.方法Ⅰ采用将卵巢剪成碎块(约2 mm左右),通过孔径180 μm网筛挤压过滤,其滤液用孔径40 μm网筛过滤,检卵.方法Ⅱ是将剪碎的卵巢碎块用胶原酶消化1 h,然后用孔径180 μm网筛挤压过滤,滤液用孔径40 μm网筛过滤,检卵.通过对猪卵巢腔前卵泡的分离及培养,发现方法I分离的总体效果要优于方法II.另外,还发现猪龄越大,腔前卵泡的回收率越低.不同的胶原酶浓度,其分离的效果也不一样,浓度越高越不利于培养.     

牛腔前卵泡体外培养前后质量评定

采用台盼蓝染色、相差显微镜观察以及透射电镜方法对体外培养前后牛腔前卵泡活力进行评定。结果表明,台盼蓝染色和相差显微镜观察检测卵泡活力有一定的误检率,超微结构检测能够客观、真实地反映腔前卵泡健康状况,可作为评定腔前卵泡培养系统优劣的一个可靠手段。在实际应用中,相差显微镜观察与超微结构评定相结合可发挥良好作用。     

哺乳动物腔前卵泡的分离与培养

哺乳动物卵巢中绝大多数卵母细胞以无腔形式存在，有腔卵泡所占比例很少。通过建立腔前卵泡的培养体系，获取大量的具有成熟和受精能力的卵母细胞，将极大地促进体外受精、核移植等胚胎工程技术的发展，并有利于研究卵泡和卵母细胞的发育规律。     

哺乳动物腔前卵泡的分离与培养

哺乳动物卵巢中绝大多数卵母细胞以无腔形式存在，有腔卵泡所占比例很少。通过建立腔前卵泡的培养体系，获取大量的具有成熟和受精能力的卵母细胞，将极大地促进体外受精、核移植等胚胎工程技术的发展，并有利于研究卵泡和卵母细胞的发育规律。     

胶原酶对水牛腔前卵泡的分离及培养的影响

研究旨在找出一种水牛腔前卵泡的有效分离方法。采用酶消化结合机械法来分离水牛的腔前卵泡 ,并分别进行培养。来自屠宰场的水牛卵巢 ,先用剪刀去掉髓质部 ,用眼科手术剪刀将其剪碎 ,然后分别用浓度为 0 (CK )、0 0 2 %、0 0 4%、0 0 8%的胶原酶消化 2 0分钟 ,采集腔前卵泡 ,每个卵巢分别获得 3 3 5 6± 6 1 5、40 3 8±6 1 2、47 75± 6 84和 5 2 69± 6 1 5个腔前卵泡 ,试验组的数量明显多于对照组 ( p <0 0 5 )。体外培养 72h后的腔前卵泡存活率分别为 5 0 86%、43 5 5 %、43 0 6%和 2 7 3 1 % ,用 0 0 8%胶原酶消化的存活数显著低于其它组 ( p <0 0 1 )。用胶原酶分离水牛的腔前卵泡 ,适宜的浓度为 0 0 4%。     

哺乳动物腔前卵泡卵母细胞的体外培养

阐明哺乳动物卵泡体内发生的一般模式，回顾腔前卵泡体外培养的研究历史，着重论述腔前卵泡的获取及鉴定标准，常用的培养体系和影响腔前卵泡体外发育的多种因素。     

哺乳动物腔前卵泡的研究进展

哺乳动物的卵巢中,含有数万个卵泡．其中绝大部分为原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡等腔前卵泡。然而能发育到成熟并排卵的卵泡为数甚少,约99．9％的卵泡在腔前卵泡阶段闭锁、退化,这无疑是动物遗传和育种资源的极大损失。目前,卵母细咆是休外受精胚胎移植、性别控制、胚胎分割、动物克隆和转基凶等胚胎生物技术研究和开发必不可少的材料,卵母细胞来源匮乏成为制约这些技术研究进展的主要因素,因此卵巢腔前卵泡的开发无疑是解决这一难题的有效途径。本文介绍了腔前卵泡研究的历史和现状以及最新的研究情况．目的是为有关的研究工作提供有益的启示和参考。     

小鼠腔前卵泡体外培养研究进展

哺乳动物卵巢中有数量丰富的腔前卵泡,小鼠腔前卵泡卵母细胞从开始尝试分离至今已经获得试管后代,为在动物生产中的应用奠定了良好的理论基础和技术路线。文章简要地综述了小鼠腔前卵泡体外培养的方法,主要讨论了血清、生殖激素等培养液添加成分对小鼠腔前卵泡培养的影响及小鼠腔前卵泡体外培养技术的发展前景。