梨园土壤中梨火疫病菌存活时间研究

为探究发病梨园土壤中是否存在梨火疫病菌Erwinia amylovora以及在土壤中的存活时间，2020—2021年，在新疆库尔勒市梨园采集土壤，利用划线分离法，采用Zeller选择性培养基从中分离病原细菌，并结合形态鉴定、PCR检测和致病性测试结果确认梨火疫病菌E.amylovora,并对自然土壤中的E.amylovora持续分离。结果表明，发病梨园土壤中存在梨火疫病菌。梨火疫病菌在土壤中存活时间可长达550 d,且分离菌株仍具有明显的致病性。该试验对库尔勒市梨园土壤中E.amylovora的是否存在和存活时间进行研究，其结果对土壤作为E.amylovora传播源的风险性评估具有重要理论意义，为梨火疫病的有效防控提供科学依据。     

4种梨砧木对梨火疫病的抗病性评价

通过离体和活体接种的方式分析梨资源对于梨火疫病的抗病水平，为进行优异梨砧木资源选育及梨火疫病的合理防治奠定理论基础。选取秋子梨、豆梨、杜梨、川梨4种梨砧木类型，采用室内离体叶片、室内离体枝条和室外活体嫩梢人工接种的方式，初步评价不同梨砧木种质接种梨火疫病菌(Erwinia amylovora菌株)后的发病率、发病程度，病斑蔓延的程度及病原菌在侵染过程的差异，并对3种人工接种的鉴定方法结果进行相关性分析。结果表明，接种梨火疫病菌后4种梨砧木类型均有发病现象；结合离体叶片、离体枝条和活体嫩梢的抗病分级结果得出，不同梨砧木类型对梨火疫病抗性强弱依次为秋子梨>豆梨>川梨>杜梨。     

膜上免疫分离法的建立及在种传细菌检疫中的初步应用

首次利用混合纤维素膜作固相材料,以梨火疫病菌及其抗血清为模式系统,建立了膜上免疫分离法(Immuno-Isolation on Membranes,IIM),成功地对梨火疫病菌进行了分离与检测,灵敏度与常规免疫分离法相近,达5×10~1cfu/mL,具有操作方便,成本低,灵敏度和准确性高的优点。利用该方法从人工接种X.o.pv.oryzae 和 pv.oryzicola 的稻种和自然病叶中分离到相应的病原菌,在种传细菌检测中有广阔的应用前景。     

梨火疫病检测技术研究与推广应用

梨火疫病作为世界性的植物检疫性有害生物病害,是国家重要检疫对象。该文主要介绍了梨火疫病检测的3种技术,即传统检测技术、分子检测技术与多光谱遥感技术,并简单介绍一种快速检测梨火疫病菌活菌的方法及其应用,加强对该病的防控。     

致病疫霉拮抗菌梨黑斑病菌发酵条件的优化

为提高梨黑斑病菌(Alternaria kikuchiana)102菌株发酵产物对致病疫霉(Phytophthora infestans)Z182菌株生长的抑制效率,本研究利用涂布法和滤纸片法、采用单因素试验设计方法,在静置培养条件下,对梨黑斑病菌的最佳发酵条件进行了优化。结果显示,该菌株在28℃、自然pH、80 mL/250 mL装液量、6%接种量、黑暗培养8 d,所得发酵液对致病疫霉有较强的抑制作用,抑菌率可达85.7%。该菌株的抑制率优化后比优化前高出约15%,表明利用该菌株在抑制致病疫霉生长方面有进一步研究和利用的潜力。     

双重PCR法同步检测菜豆晕疫病菌和萎蔫病菌

为建立同步检测菜豆晕疫病菌和细菌性萎蔫病菌的双重PCR方法,根据Gen Bank上公布的菜豆晕疫病菌arg K基因特异性序列设计1对特异性引物PSPF1/PSPR2,将设计的引物与已发表的检测菜豆细菌性萎蔫病菌特异性引物Cff F1/CffR2结合,经过条件优化,建立了双重PCR反应体系,并进行特异性和灵敏度验证。结果显示,采用双重PCR体系,能从菜豆晕疫病菌和细菌性萎蔫病菌基因组DNA以及人工模拟带菌大豆种子样品中扩增到特异性条带,表明本研究所建立的双重PCR检测方法能同时检测出菜豆晕疫病菌和细菌性萎蔫病菌,可用于口岸进口大豆中2种检疫性细菌的检测。     

梨火疫病菌在中国的潜在分布及入侵风险分析

 【目的】细菌性梨火疫病最早发生在北美洲，随着水果贸易等人为因素向世界其它地区传播。对当地的生物多样性和经济带来了极其严重的威胁，亟需对其在中国的适生区进行预测。【方法】苹果开花期的温度和降水量是影响梨火疫病菌适生分布的关键气候因子，本研究根据这一生物学特性及生态环境因子，应用地理信息系统分析得出了梨火疫病在中国两个苹果优势产区的潜在定殖区域。【结果】用该方法对梨火疫病在欧洲的发生情况的预测结果与其历史分布记录相符，使用相同的空间建模方法对梨火疫病在渤海湾和黄土高原两个苹果优势栽培产区的潜在定殖区域进行风险评估，结果表明这两大苹果产区中优先扶持的县大多处于梨火疫病发生的高风险范围。【结论】梨火疫病在中国的大部分地区适生，在有适宜寄主分布的地区，就可能严重发生。     

苎麻疫霉生长速率菌落形态同宗配合性状的遗传研究

测定了引起中国棉花疫病病菌──苎麻疫霉（同宗配合种）菌株ＥＣＳＺＩ－８的生长速率、菌落形态、同宗配合等生物学性状在游动孢子和卵孢子后代的遗传。结果表明上述性状在无性和有性后代均可稳定地遗传，认为苎麻疫霉ＥＣＳＺＩ－８菌株控制上述生物学性状的遗传因子是纯合的。     

多羟基双萘醛的抑菌活性及对寄主酶活性的影响

在培养皿内测定结果表明500倍多羟基双萘醛液对小麦雪霉叶枯病菌、小麦全蚀病菌、梨黑星病菌、番茄早疫病菌、辣椒疫霉病菌、黄瓜炭疽和黄瓜枯萎病菌生长无明显抑制作用,对小麦赤霉、小麦根腐和小麦纹枯菌菌丝生长有一定的促生作用。500倍多羟基双萘醛可以防治黄瓜霜霉病,预防作用明显好于多菌灵。     

梨火疫病抑菌制剂的室内筛选

【目的】筛选抑制梨火疫菌(Erwinia amylovora)的药剂,为防控梨火疫病提供参考与依据。【方法】采用最低抑制浓度和抑菌圈比较的方法,对30种抑菌制剂进行筛选。【结果】内吸性抑菌制剂1.8%辛菌胺醋酸盐,有机类抑菌制剂3%噻霉酮(ME)、3%噻霉酮(WP)和30%壬菌铜,植物源类型制剂80%乙蒜素以及微生物制剂荧光假单胞杆菌3 000,是室内试验对梨火疫菌抑菌效果较好的制剂。【结论】不同药剂之间、同一种药剂不同剂型之间抑菌效果差异较大,研究筛选得到的6种抑菌制剂可为梨火疫的防治提供参考。     

Potential Distribution of Alien Invasive Species and Risk Assessment： a Case Study of Erwinia amylovora in China

Alien invasive species represent a severe risk to biodiversity and economy, as in the case of fire blight （Erwinia amylovora）, a bacterial disease that originated in North America, which may be released into new locations by means of fruit trade. On the basis of the knowledge of Erwinia amylovora＇s biophysical characteristics and environmental data, the geographic information system （GIS） has been applied to determine areas where Erwinia amylovora can potentially invade China. Temperature and precipitation, during the blossoming period, are considered to be two critical factors affecting the Erwinia amylovora＇s suitable climatic zones. This spatial modeling approach was validated from a case study in Europe, where the occurrence of Erwinia amylovora has been proven. The model prediction agreed with the occurrence of the bacteria recorded in Europe, and the same procedure has been applied to produce a potential establishment area in China＇s two preferential apple cultivation regions, Bohai Bay region and Huangtu Altiplano region. It has been found that areas belonging to the high-risk category are more or less the main apple producing areas, accounting for their great economic importance in China. This methodology provides an initial baseline for assessment, prevention, and management of alien species that may become invasive under certain environmental conditions. In addition, this modeling approach provides a tool for policy makers to use, in making decisions on management practices where alien species are involved.     

梨火疫病病原菌（Erwinia amylovora）三型分泌系统的鉴别及Erwinia spp. HrpA的分析

 【目的】明确梨火疫病病原菌（Erwinia amylovora ）三型分泌系统（type Ⅲ secretion system,TTSS）的所在区域、相关基因及Erwinia spp.的HrpA（hypersensitive response and pathogenicity gene A）选择压水平。【方法】利用生物信息学方法,通过BLAST程序对梨火疫病菌基因组的核苷酸数据库进行同源比对,同时对Erwinia spp.与宿主互作的表面蛋白HrpA进行选择压分析。【结果】TTSS分析结果显示在40 kb大小的毒力岛上有27个TTSS相关基因。通过与看家基因及毒力岛上的致病性相关的重要基因HrpN的比较、选择压分析、多序列比较,发现HrpA基因处于较强的选择压作用下,且HrpA蛋白N端主要受正向选择,C端主要受净化选择。NJ法构建的HrpA系统发育树显示Erwinia spp.形成两个明显的分支,表明HrpA基因可能在种间分化后产生了不同的选择压变化。【结论】梨火疫病病原菌基因组3.14－3.18 Mb为其TTSS分布区域。该病原菌通过TTSS侵染寄主植物,在其病原菌表面有一种类鞭毛结构的TTSS蛋白HrpA,HrpA作为传输者起着将效应分子输送到宿主内部的功能,在进化上受到了较强的选择压影响。     

Host-Specific Phytotoxic Polysaccharide from Apple Tissue Infected by Erwinia amylovora

A toxin isolated from apple fruit tissue infected by Erwinia amylovora is 98 percent galactose in polymeric form, 0.375 percent protein, and has an average molecular weight of approximately 165,000. Young shoots of rosaceous, but not nonrosaceous, species wilt in a manner characteristic of the disease when placed in toxin solutions with concentrations as low as 10 micrograms per milliliter. Varieties of apple and pear susceptible to Erwinia amylovora wilt in 1 to 3 hours, whereas resistant varieties display symptoms 12 to 24 hours after treatment.     

苹果组培苗和温室盆栽苗对火疫病的感病性研究

不同品种的苹果对梨火疫病（Erwinia amylovora）菌的敏感性不同，用盆栽苗与体外组培苗所得的结果一致，感病快的品种体内所含的病菌数高于感病慢的品种；外植体的生理状态对病害的发生有影响。     

Fire blight disease,a fast-approaching threat to apple and pear production in China

Fire blight, caused by Erwinia amylovora, is a devastating disease of apples and pears, causing enormous economic losses around the world. The disease is indigenous to North America and has spread to more than 50 countries since its discovery in 1870s. Recent reports of the disease in China's neighboring countries, including South Korea, Kyrgyzstan, and Kazakhstan, pose great threat to the world's leading producer of apples and pears. This mini-review intends to provide an update on the disease, pathogen biology, epidemiology, and control. It will also provide some perspectives and suggestions for the apple and pear industry and growers in China, which will face the imminent threat of this devastating disease.     

HrpN_(Ea)蛋白的结构与功能分析

Harpins是由革兰氏阴性植物病原细菌产生的一类蛋白激发子,对蛋白酶敏感,在非寄主植物叶片上可以诱导hypersensitive response（HR）或hypersensitive cell death（HCD）。HrpNEa是Harpins蛋白的一种,是从梨火疫病菌（Erwinia amylovora）中分离得到的。大量试验证明,HrpNEa蛋白在引起植物过敏反应的同时,能诱导植物获得性系统抗性及刺激植物生长发育。从分子生物学角度,利用国际互联网上的相关生物信息学分析软件NPSA、Swiss-Model、SAPS、InterPro Scan等对HrpNEa蛋白进行了结构和功能的预测分析。HrpNEa蛋白由403个氨基酸组成,有较多的β折叠和无规卷曲结构;HrpNEa蛋白无N端信号肽,不形成跨膜结构,定位于细胞质中。     

Wun1启动子Me13''''非转录区的克隆及Hrp基因植物表达载体的构建

采用PCR技术,分别从马铃薯、金花菊基因组DNA中扩增到了马铃薯损伤诱导启动子Wun 1,和对启动子活性有显著增强作用的Me1 3 非转录区。经序列同源性分析表明,马铃薯损伤诱导启动子Wun 1与已知序列的同源性为96.86 %,Me1 3 非转录区的同源性达99 %。得到的Wun 1克隆与原序列有一定的差异,尤其在735～768处差异较大,为一新颖的启动子,现已注册到分子生物学GenBank数据库(GenBank, gi: AY485646)。利用来自欧文氏梨火疫病菌的Hrp基因与克隆的Wun 1启动子和Me1 3 非转录区构建了Wun 1-Hrp-Me1 3 植物表达载体pBI WHM,同时构建了CaMV 35S-Hrp-Me1 3 植物表达载体pBI HM,为下一步鉴定Wun 1启动子和Me1 3 增强子对Hrp基因表达活性的影响及通过遗传转化培育植物抗病品种奠定了基础。     

水稻生育后期谷粒变色病病原菌的分离鉴定

近年来,水稻谷粒变色病日趋严重。采用常规方法,对成都和重庆两地区的变色谷粒病原菌进行分离,纯化及其致病性测定,获得具致病作用的镛孢力等若干菌株。其中欧氏杆菌,镛孢霉菌为优势种群,各占４５．５％,２７．３％。     

鸡新城疫牛源血清的试制及效力试验

利用鸡新城疫弱毒在牛体制成鸡新城疫牛源血清,经鸡体效力试验证明对鸡新城疫的强毒攻击具有保护作用,临床初步试用证明对出现病状的鸡具有治疗作用,对同窝未发病鸡具有预防作用。本血清制法简便,可就地生产。就地使用。