甘蓝型油菜小孢子培养的胚诱导和加倍效率的研究

以大田甘蓝型油菜为材料，对小孢子培养不同取样时间和不同开花时期接种的胚状体诱导频率和不同加倍方法的加倍效率进行了研究，结果表明：大田甘蓝型油菜小孢子培养最佳取样时间是上午7：00时，此时取样出胚率达4．31枚／蕾；接种最佳开花时期是单株开第一朵花后6～20d的2周时间，此开花时期接种出胚率为4．08～4．34枚／蕾。在不同加倍方法中，以50mg／L秋水仙碱处理游离小孢子48h为最佳，并且能够获得76．47％最高加倍效率。     

春性甘蓝型油菜小孢子培养技术初探

通过小孢子培养，获得了了青油３３１的单位体植株。对甘蓝型油菜小孢子培养的初步研究表明，不同材料间小孢子的产胚量存在显著差异，春性材料的产胚量高于冬性材料。     

甘蓝型油菜小孢子培养技术优化

为了优化甘蓝型油菜小孢子培养技术,提高胚诱导率及成苗率,以油菜N14009为试验材料进行小孢子培养,研究变温预处理、活性炭浓度、培养基类型和琼脂浓度及秋水仙碱浓度对小孢子培养的影响。结果表明：4℃、32.5℃变温预处理各1 d的处理效果较好,胚诱导率为4.23胚/蕾;活性炭质量浓度为0.5 g/L时,胚诱导率达到4.23胚/蕾,效果最好; MS、B5培养基中琼脂质量浓度为12 g/L时,成苗率均最高,分别达51.16%、46.67%;把再生植株转到含有不同质量浓度秋水碱的MS培养基上培养,质量浓度为80 mg/L时,N14009的加倍率最高,为43.47%,并且成苗率达到76.67%。     

甘蓝型油菜游离小孢子培养技术研究

利用小孢子培养技术对 78个甘蓝型油菜材料进行了离体小孢子培养 ,其中 5个材料获得了再生植株 ;再生植株自然加倍率只有 1 6 .1 %左右 ,而人工加倍率可达 6 0 %以上。获得遗传稳定的纯合材料 47个 ,并对其进行了农艺性状鉴定及杂交转育和组合配制工作     

甘蓝型油菜基因型对离体小孢子染色体加倍的反应

采用秋水仙碱处理甘蓝型油菜不同基因型的离体小孢子,研究了小孢子再生植株的染色体加倍特性 及其与基因型的关系。将发育到单核晚期一双核早期的小孢子分别接种于含10、20、50、100 mg／L秋水仙碱的 NLN液体培养基中处理24 h或48 h进行染色体加倍,然后将处理过的小孢子转接于不含秋水仙碱的相同培 养基中诱导胚状体。21种基因型小孢子再生植株中双单倍体比率为23．94％～99．42％。方差分析的结果表 明,基因型相似的品系和杂种之间染色体加倍率差异不显著,基因型不同的一些品系和杂种间差异显著。由 此说明,基因型对秋水仙碱处理离体小孢子诱导染色体加倍的反应不同。     

长江下游甘蓝型油菜小孢子的培养体系

自从德国学者首次报道甘蓝型油菜小孢子培养技术成功以来[1],该项技术已被迅速采用.小孢子培养能够得到基因型纯合的甘蓝型油菜株系(双单倍体,Double haploid),利用该技术可以迅速纯合保持系和恢复系[2],避免性状分离;也可以对远缘杂交后代通过加倍来稳定外缘染色体[3];还可以结合诱变技术进行油菜种质资源创新,目前已经获得品质和抗性性状非常优良的株系[4,5].     

春性甘蓝型油菜小孢子培养技术研究

对一批春性甘蓝型油菜(Brassica napus)杂种F1及其亲本进行小孢子培养的结果表明,不同组合(基因型)出胚率差异比较大,2006年22份材料(基因型)中有21份出胚,其中40.91%的材料每蕾出胚数在5个以上,31.82%的材料每蕾出胚数在10个以上;杂交组合的出胚率大部分高于其亲本,主枝的产胚率绝大部分都高于其分枝;秋水仙碱不同处理中以0.6 g/L浓度处理5.0 h和3.4 g/L浓度处理1.5 h,植株成活率和加倍率最高;经秋水仙碱加倍后可育的植株大部分花粉活力较高,结实指数较高;而半可育的植株花粉活力低,并有50%的植株结实指数低于1。     

甘蓝型油菜小孢子植株加倍方法及对植株农艺性状的影响研究

以甘蓝型油菜９５Ｚ１９２的组培小孢子植株为供试材料,以移栽前在试管培养过程中加倍、移栽时浸根中倍、移栽后花期滴腋中倍共３种方法的１４个处理进行油菜小孢子植株 另倍试验。结果显示：移霜时浸根加倍效果最好,植株成活率和加倍率最高。其中０．０５％秋水仙碱＋１．５％二甲基亚砚液浸根４ｄ的处理植成活率９１．３０％、加倍率９３．６５％,效果最好;浸根２ｄ的处理植株成活率９５．４５％,加倍率８０．９５％,效果闪     

高含油量甘蓝型油菜小孢子培养体系探究

以8个高含油量甘蓝型油菜品系的杂交F1为试验材料,观察小孢子各发育时期的形态,探讨花蕾长度与小孢子发育时期对应关系,培养基中添加不同植物激素及质量浓度配比等因素对小孢子培养出胚量及再生胚生长的影响。结果表明,小孢子不同发育时期的形状差异较大,小孢子单核晚期对应的花蕾长度主要集中在2.5～3.0mm;只有少数膨大细胞最终发育成为胚状体;不同材料出胚量差异较大,有5个材料获得再生胚,其中2003×HZ出胚量最高,为每蕾8.1胚,另3个材料未获得再生胚;不同材料小孢子对激素种类和质量浓度的反应不同,在NLN中添加0.1mg/L 2,4-D+0.05mg/L(或0.1mg/L)6-BA利于2003×HZ、1517×HZ、1485×HZ出胚,而在NLN中添加0.05mg/L NAA+0.05mg/L 6-BA利于1438×HZ、1479×HZ出胚;在B5固体培养基中添加0.1mg/L 2,4-D+0.1mg/L 6-BA利于胚状体迅速生长。     

转基因甘蓝型油菜的小孢子培养及转基因的遗传分析

[目的]研究甘蓝型油菜转查尔酮异构酶反义基因T1代植株及其小孢子成苗的遗传表达,为甘蓝型油菜的转基因和种质资源创新研究提供参考。[方法]以甘蓝油菜转查尔酮异构酶反义基因T1代5个独立转基因植株为材料进行小孢子培养,通过GUS报告基因的组织化学染色鉴定对外源转基因在花粉植株中的遗传进行了分析。[结果]5个独立转基因植株均获得了胚状体和花粉植株;转基因在花粉培养后代和有性自交后代中遗传行为一致;在每个独立转基因植株的花粉植株中GUS阳性和阴性的分离比均为3∶1,符合孟德尔遗传规律,表明有2个转基因拷贝整合到受体2条非同源染色体上;3个独立转基因植株自交后代中GUS阳性和阴性的分离比符合15∶1,同样表明有2个转基因拷贝整合到受体2条非同源染色体上。[结论]通过转基因油菜的小孢子培养快速获得转基因纯系是可行的。     

油菜小孢子培养以有效产生纯合两倍体植株

SincehaploidembryoidswerefirstobtainedfrommicrosporecultureofBrassicanapustherehasbeenarapidprogressintheapplicationofthistechniqueingeneticstudiesandbreedingutilizationofrapeseed.Therelativesimplicityofthecultureprotocolandhigh-frequencyrecoveryofdoubledhap-loidplantsmakesmicrosporecultureapotentiallypowerfultechniqueforvarietaldevelopment.Never-theless,therearestillsomeobstaclesintheefficientuseofthistechniquesuchasrecalcitrantgeno-types,secondaryembryogenesisofembryoids,andthelackofefficien…     

甘蓝型油菜小孢子培养研究

1材料与方法 1．1材料与培养基以甘蓝型油菜NER为试材,分别于2006年9月、2007年9月、2008年9月种植于四川省农科院郫县农场。提取液（B5）：B5大量（KN032500mg／L＋MgSq250mg／L＋CaCl2·2H2O150mg／L＋NaH2PO4·H2O150mg／L）＋B5微量Ⅰ＋B5微量Ⅱ＋KI1000mg／L＋B5有机＋Fe—Salt肌醇100mg／L＋蔗糖130g／L（高压灭菌,置4℃冰箱中备用）。诱导基本培养基（NLN·13）：NLN-13大量＋MS微量Ⅰ＋NLN-13微量Ⅱ＋Fe—EDTA40．0mg／L＋甘氨酸2．0mg／L＋烟酸5．0mg／L＋VB60．5mg／L＋VB．0．5mg／L＋肌醇100．0mg／L＋生物素0．5mg／L＋叶酸0．5mg／L＋L-丝氨酸100．0mg／L＋谷氨酰胺800．0mg／L＋谷胱甘肽30．0mg／L＋蔗糖13％＋NAA0．5mg／L＋6-BA0．05mg／L。分化培养基MS：MS＋蔗糖2％＋琼脂粉6g／L。     

甘蓝型油菜小孢子再生体系的优化研究*

 以甘蓝型油菜花油3号、湘油15号为材料，优化了甘蓝型油菜小孢子再生胚状体的条件，建立起甘蓝型油菜小孢子的高效再生体系。在主花序第一朵花开后第4d从主花序上取4.0～4.5mm花蕾，每毫升NLN培养基接种1个花蕾的小孢子，在32℃起始热激培养36h，胚状体再生频率最高，花油3号达24.80个胚状体/花蕾，湘油15号达16.50个胚状体/花蕾。胚状体再生植株的频率为80.25%。     

甘蓝型油菜小孢子秋水仙碱处理提高双单倍体频率研究

 以 2个对小孢子培养反应较好的甘蓝型冬油菜F1杂种为供体材料 ,研究了 3种不同时期秋水仙碱处理对小孢子胚胎发生、成苗与加倍率的影响。对分离小孢子直接进行 15h以及 0、5 0、5 0 0和 10 0 0mg/L秋水仙碱处理 ,在液体NLN培养基中胚胎发生好 ,培养 5周后获得大量正常胚体。将这些发育优异的胚体移入固体MS培养基、经过 10d低温 (2℃ )诱发 ,常温 (2 4℃ )下培养能很好地萌发 ,并迅速长成完全正常的再生植株。 5 0 0mg/L秋水仙碱处理 15h获得了 83%～ 92 %的高染色体加倍率 ,并且嵌合体和多倍体数很少。对正常胚体在移入固体培养基前用 0、2 5、5 0、2 5 0、5 0 0和 10 0 0mg/L秋水仙碱 15和 30h进行染色体加倍处理 ,或对再生植株在幼苗期进行 12 5mg/L秋水仙碱 2 0h浸根处理 ,其加倍效果均不及采用分离小孢子直接进行秋水仙碱处理 ,且其嵌合体的发生频率也较高 ;后者还产生大量待特殊处置的秋水仙碱废液 ,并推迟再生株的生育进程。因此 ,利用分离小孢子直接进行秋水仙碱加倍染色体更为安全、快速和有效     

甘蓝型油菜花药培养技术研究

[目的]筛选甘蓝型油菜愈伤组织的最佳分化培养基,探讨甘蓝型油菜花药培养技术。[方法]在油菜始花期,取其主茎顶端蕾盘的中圈花蕾,将花药接种于B5+2,4 D 1.0mg/L+KT 1.5mg/L的培养基进行诱导,将诱导出的愈伤组织接种于不同配方的12种培养基进行分化培养。[结果]甘蓝型油菜花药培养取花粉处于单核后期至双核初期,对应于外部特征是蕾盘中圈10～15个花蕾,所产生的愈伤组织百分率最高(16%);12种不同配方的培养基中以B5+KT 2.0mg/L+BA 2.0mg/L+IAA 0.1mg/L或MS+KT 2.0mg/L+BA 2.0mg/L+IAA 0.1mg/L培养基上分化成苗最好,分化率分别为75%和70%,将分化的小苗置于1/2MS培养基上诱导生根,可长成完整幼苗。[结论]花药培养可以加速油菜育种进程。     

芸薹属蔬菜游离小孢子培养研究进展

芸薹属蔬菜种质资源丰富,是中国蔬菜产业的重要组成部分。游离小孢子培养是创造单倍体和双单倍体的重要途径,对提高芸薹属蔬菜的育种效率具有重要意义。为了研究芸薹属蔬菜游离小孢子的高效培养体系,归纳了植物材料、预处理方式、培养基成分、培养密度、高温热激、植株再生、植株的倍性鉴定与加倍等多个因素对小孢子培养的影响,提出了可通过优化培养体系、遗传转化和共培养等方式提高芸薹属蔬菜小孢子培养效率的观点。