不带抗药性基因的nifA质粒的构建

本研究克隆了萤光假单胞菌ＡＳ１．５５（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓＡＳ１．５５）的亮氨酸基因（ｌｅｕ＾＋）ＥｃｏＲＩ片段（－６．６ｋｂ）,并获得含有该片段的重组质粒ｐＢＲ３２２－ＬＥＵ。从ｐＢＲ３２２－ＬＥＵ质粒中分离出ｌｅｕ＾＋ＥｃｏＲＩ片段,将其插入到ｎｉｆＡ质ｐＭＣ７１Ａ的ＥｃｏＲⅠ位点使氯霉素抗性基因失活,从而构建了不带抗药性基因ｎｉｆＡ质粒ｐＭＣ７１Ａ－ＬＥＵ。     

固氮粪产碱菌（Alcaligenes faecalis）exoC基因的克隆及其特性

应用Ａ．ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ ｓｐ７的ｅｘｏＣ基因为探针，发现Ａ．ｆａｅｃａｌｉｓ Ａ１５０１具有与Ａ．ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ Ｓｐ７ ｅｘｏＣ基因同源的基因。Ａ．ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ ｅｘｏＣ基因能恢复Ａ．ｆａｅｃａｌｉｓ ＥＰＳ缺陷型（ＥＰＳ＾－）突变，表明粪产碱菌ＥＰＳ的产量为ｅｘｏＣ基因产物所调控。本工作已获得类似Ａ．ｂｒａｓｉｌｅｎｓｅ Ｓｐ７的ｅｘｏＣ－ｌｉｋｅ基因的克隆     

互补野油菜黄单胞菌野油菜致病型T113突变体胞外多糖产生的DNA片段的克隆

以从野油菜黄单胞菌野油菜致病型（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓｃａｍｐｅｓｔｒｉｓｐｖ．ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）胞外多糖突变体Ｔ１１３中克隆的含转座子Ｔｎ５ｇｕｓＡ５及其两侧相邻序列的１２．３ｋｂＥｃｏＲＩＤＮＡ片段为探针,从野生型菌株８００４中克隆到与突变位点相对应的６．５ｋｂＥｃｏＲＩ片段,克隆于载体ｐＬＡＦＲ３上的该片段能反式互补突变株Ｔ１１３的胞外多糖产生,说明该片段上含有至少一个与胞外多糖产生有关的基因。     

与黄原胶生物合成相关的"1.9" kb EcoRI DNA片段的序列测定分析

对Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓｃａｍｐｅｓｔｒｉｓｐｖ．ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ（下称Ｘｃｃ）８００４菌株染色体基因组中９．４ｋｂＨｉｎｄⅢＤＮＡ的“１．９”ｋｂＥｃｏＲＩ酶切片段的测序分析结果表明,该ＥｃｏＲＩＤＮＡ片段的实际长度为１．８８ｋｂ。在核苷酸水平上与Ｘｃｃ的ｇｕｍ基因有９８％的一致性;这一ＥｃｏＲＩ片段上有两个有意义的ＯＲＦ：ＯＲＦ１和ＯＲＦ２。ＯＲＦ１是一个不完整的ＯＲＦ;在氨基酸水平上,ＯＲＦ１和ＯＲＦ２的推断性编码产物蛋白分别与ｇｕｍＡ基因编码的ＧｕｍＡ及ｇｕｍＢ基因编码的ＧｕｍＢ蛋白有１００％的一致性。因此在１．８８ｋｂＥｃｏＲＩ片段上存在一完整的ｇｕｍＢ基因。     

油菜(B.napus)属种间杂种后代的遗传研究

本研究通过油菜与萝卜属间杂种（ＡＣＲ）为亲本材料,分别与芸苔Ｂｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ和甘蓝Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ杂交,属种间杂种（ＡＡＣＲ,ＡＣＣＲ）再与甘蓝型油菜品种杂交,以获得稳定的转基因属种间杂种材料。结果指出,属间杂种与芸苔Ｂ．ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ杂交比与及甘蓝Ｂ．ｏｌｅｒａｃｅａ杂交更易获得后代。这些杂种后代分别与甘蓝型油菜回交也表现了这种趋势。细胞学分析指出,属种间杂交由于异源染体的存在     

应用gfp对盐单胞菌C6可能转座酶A基因启动区的鉴定

盐单胞菌（Ｈａｌｏｍｏｎａｓ ｓｐ．）Ｃ６与耐盐有关的可能转座酶Ａ基因长１７０７ｂｐ,编码５６８个氨基酸,其上游１￣１７１ｂｐ ＤＮＡ区域内含有核糖体结合位点ＧＡＧＧ和类似于大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ｐｒｏＵ、ｐｒｏＰ和ｇａｌｐＩ、枯草牙胞杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）白基因ｇｆｐ为报告基因,启动子探针载体ｐＨＮ１２７为载体质粒,通过亚克隆,在ｐＨＮ１２７无启动子的ｇｆｐ基因上游插入了包     

互补野油菜黄单胞菌野油菜致病型T113突变体胞外多糖产生的DNA …

以从野油菜黄单包菌野油菜致病型（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓｃａｍｐｅｓｔｒｉｓｐｖ．ｃａｍｐｓｔｒｉｓ）胞外多糖突变体Ｔ１１３中克隆的含转座子Ｔｎ５ｇｕｓＡ５及共两侧相邻序列的１２．３ｋｂＥｃｏＲＩＤＮＡ片段为探针,从野生型菌株８００４中克隆以与突变位点的相对应的６．５ｋｂＥｃｏＲＩ片段,克隆于载体ｐＬＡＦＲ３上的该片段能反式互补突变株Ｔ１１３的胞外多糖产生,说明该片段上有含有至少一个与胞外多糖产生的     

人胎肝cDNA中EPO基因的克隆

从人胎肝中提取得总ｍＲＮＡ，然后通过ＲＴａｓｅ反转录得到ｃＤＮＡ，利用ＰＣＲ技术克隆到ＥＰＯ基因（全长为５２７ｂＰ），经过计算机分析已知ＥＰＯ基因保守区段的限制性内切酶位点，选择ＢｇｌⅠ和ＨｉｎｃⅡ进行酶解，确认所获得ＤＮＡ片段为ＥＰＯ基因。     

含与不含前导序列的乙肝病毒表面抗原在转基因番茄中表达的研究

将携带有乙型肝炎病毒（ａｄｗ亚型）表面抗原（ＨＢｓＡｇ）基因和ＨＢｓＡｇ及其前导序列（ＨＢｓＡｇ＋ｐｒｅＳ１＋ｐｒｅＳ２）基因的植物表达载体ｐＲＯＫＩＩ，分别导入农杆菌ＬＢＡ４４０４中，通过叶盘转化法得到转基因番茄及其后代。Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交证明现任中外源基因已插入到植物染色体中。ＥＬＩＳＡ检测结果表明用ＨＢｓＡｇ基因转化的番茄叶片和果实中都能表达ＨＢｓＡｇ，而用含ｐｒｅＳ的ＨＢｓＡｇ基     

柑桔抗溃疡病品种叶细胞膜脂组分的研究

柑桔溃疡病（ｃｉｔｒｕｓｂａｃｔｅｒｉａｌｃａｎｋｅｒｄｉｓｅａｓｅ，ＣＢＣＤ）是由ＸａｎｔｈｏｍｏｎａｓｃａｍｐｅｓｔｒｉｓＰｖ．ｃｉｔｒｉ（ＸＣＣ）引发的。本研究检测了抗ＣＢＣＤ柑桔品种和对Ｘｃｃ敏感品种叶细胞膜脂组分及含量。抗病品种及敏感品种之叶细胞膜脂种类相似，主要为磷脂酰胆碱（ＰＣ）、磷脂酰乙醇胺（ＰＥ）、磷脂酰甘油（ＰＧ）和磷脂酰肌醇（ＰＩ），其中ＰＣ和ＰＥ占总量的７５％以上，尤以ＰＣ居首。抗病品种ＰＣ、ＰＥ、ＰＧ、ＰＩ总含量（１．２４～１．６５ｍｇ／ｇＦＷ）明显小于敏感品种（２．３２～５．０８ｍｇ／ｇＦＷ）；抗病品种磷脂分子中的不饱和脂肪酸（油酸、亚油酸和亚麻酸）与饱和脂肪酸（软脂酸和硬脂酸）的比率也小于敏感品种。抗ＣＢＣＤ品种和对ＸＣＣ敏感品种的叶细胞膜都含有显量的游离甾醇（０．５９～１．０１ｍｇ／ｇＦＷ）和痕量的甾醇酯。检出的游离甾醇主要有β－谷甾醇、菜油甾醇和羊毛甾醇，其中以β－谷甾醇含量最高，占总甾醇量的６０％以上。抗病品种的游离β－谷甾醇比敏感品种高３０％左右。各抗病品种叶细胞膜脂中的游离甾醇与总磷脂的比率（０．５２～０．７４）均显著高于敏感品种（０．１２～０．２８）。