冰藏过程中罗非鱼鱼片肌肉蛋白质变化

为研究冰藏过程中罗非鱼(Oreochromis niloticus)肌肉蛋白质的变化,提取了冰藏罗非鱼鱼片肌肉中的不同溶解性蛋白质与不同结构蛋白质,并分析其在贮藏期间含量的变化,对总可溶性、水溶性、高盐溶性和低盐溶性蛋白质分别进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),考察蛋白质的降解情况。结果表明,冰藏期间高盐溶性蛋白质质量分数由84.99 mg·g-1下降至49.47 mg·g-1,降低了41.79%;水溶性蛋白质质量分数由72.27 mg·g-1下降至18.37 mg·g-1,降低了74.58%;低盐溶性蛋白质质量分数分数由11.15 mg·g-1下降至3.39 mg·g-1,降低了69.60%。3种不同结构蛋白质中,肌原纤维蛋白质量分数下降最为明显(由122.10 mg·g-1下降至48.65 mg·g-1,P0.05),肌浆蛋白质量分数也持续降低(由37.79 mg·g-1下降至26.57 mg·g-1,P0.05),肌基质蛋白质量分数无明显变化(P0.05)。SDS-PAGE图谱显示,肌球蛋白重链、肌动蛋白、原肌球蛋白及其他一些蛋白质条带逐渐减弱,在贮藏末期还出现了一些新的条带。     

外源性17-β雌二醇对养殖中华鲟血液若干生化指标的影响

通过对12尾雌性中华鲟(Acipenser sinensis)背部肌肉注射不同浓度(0、0.1、0.2、0.4 mg/kg·BW)17-β雌二醇(estradiol),并在0、60、120和180 d尾部静脉采血,测定血清中钙(Ca2+)、雌二醇(E2)、睾酮(T)、白蛋白(ALB)、卵黄蛋白原(VTG)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)以及胆碱酯酶(CHE)的含量。结果显示,注射雌二醇后,Ca2+和VTG含量均先上升后下降,E2和ALP含量不断上升,T和CHE则含量不断下降。ALT和ALB含量上下波动。此结果表明,雌二醇对养殖中华鲟卵巢发育具有一定的促进作用,但浓度过高会对其肝脏造成损伤,0.1 mg/kg·BW是较为适宜的浓度。     

氟苯尼考在欧洲鳗鲡体内的药物代谢动力学的研究

应用反相高效液相色谱法对口灌和肌肉注射氟苯尼考在欧洲鳗鲡(Anguilla anguilla)体内的代谢规律进行了研究.按100 mg·kg-1口灌给药后血浆、肌肉、肝脏、肾脏中氟苯尼考浓度的达峰时间分别为2h、6h、0.5h、1h,以后开始缓慢下降,给药2d后血浆、肌肉、肝脏、肾脏中的氟苯尼考浓度分别为4.209μg·mL-1、0.792μg·g-1、0.493μg·g-1、1.448μg·g-1,给药3d后血浆中的氟苯尼考浓度分别为0.0836μg·mL-1,肌肉、肝脏、肾脏中的氟苯尼考浓度均未检出;按100mg·kg-1肌肉注射给药后血浆中氟苯尼考浓度达峰时间为0.5h,以后开始缓慢下降,给药5d后血浆中的氟苯尼考浓度为0.1151μg·mL-1,给药10d后血浆中的氟苯尼考浓度未检出.口灌氟苯尼考在欧洲鳗鲡体内血浆、肌肉、肝脏、肾脏中分布可用开放性二室模型来描述,口灌给药的血浆、肌肉、肝脏、肾脏中的消除半衰期(T1/2β)分别为27.939h、18.844h、11.83h、36.87h;肌肉注射氟苯尼考在欧洲鳗鲡体内血浆、肌肉、肝脏、肾脏中分布可用开放性一室模型来描述,肌肉注射给药的血浆中的消除半衰期(T1/2β)为37.52h.     

正常和早熟雄性河蟹副性腺蛋白和血淋巴中17β-雌二醇及睾酮浓度的比较

采用常规生物技术方法,比较分析和测定正常(体质量20~30g)和早熟(95~130g)雄性河蟹Eriocheir sinensis的副性腺蛋白和血淋巴中17β-雌二醇和睾酮浓度的差异。结果表明,正常雄性河蟹和早熟雄性河蟹的副性腺中蛋白质的种类无明显差异,但是,早熟雄性河蟹副性腺中分子量在66.4~97.2k Da的蛋白表达量明显少于正常雄性河蟹。早熟雄性河蟹血淋巴中睾酮和17β-雌二醇的浓度显著低于正常雄性河蟹。分子量在66.4~97.2kDa间的河蟹副性腺蛋白质、睾酮及17β-雌二醇含量低可能是雄性河蟹性早熟的重要原因之一。     

中华绒螯蟹血淋巴中20-羟基蜕皮酮、17β-雌二醇和睾酮含量的变动

河蟹在蜕壳前,血淋巴中 20-羟基蜕皮酮(20-HE)含量达到最高峰——116.16±32.96ng/ml;蜕壳时降入低谷——7.09±1.39ng/ml;蜕壳后仍然很低。血淋巴中20-HE 调控着河蟹的蜕壳周期。雌性河蟹卵母细胞进入大生长期,9月份血淋巴中 17β-雌二醇(17β-E_2)出现峰值——3.62±1.11ng/ml,促进了卵母细胞的卵黄积累。雄性河蟹10月份血淋巴中睾酮(T)含量开始上升,至12月份达到 2.15±0.28ng/ml,诱导精巢发育成熟。雌性河蟹血淋巴中 20-HE 含量在5月和8月各出现一个峰值,分别为 13.15±6.99和 15.80±7.40ng/ml;雄性河蟹则在6月和9月各出现一个峰值,分别为 20.25±13.58和 14.00±9.48ng/ml。雌、雄河蟹同在2月份为全年最低值,分别为3.75±3.38 和3.68±1.78ng/ml。实验结果阐明了雌、雄河蟹 5、6月份血淋巴中 20-HE 出现的峰值与生长有关;8、9 月份出现的峰值与青春蜕壳、早期性腺发育相联系。     

香鱼性成熟期间血浆中固醇类激素水平的变化

由放射性免疫测定法测定雌鱼性成熟的各时期中雌二醇——17β、17α——羟孕酮和17α、20β——二羟——4—pregnen——3——酮(170、20β——diOHprog)的血浆水平。在卵黄生成期间雌二醇——17β增加,而在次级卵母细胞成熟以前迅速减少,继之在排卵和产卵期间出现第二次增长。雌二醇——17β的第二次增长可能同残留的卵黄卵母细胞有联系。卵巢成熟的多数时期中血浆17α——羟孕酮曲线和17α、20β——diOHproy的曲线相同。这两种类固醇在卵黄原阶段始终很低,然而在排卵和产卵期间却急剧升高,之后又很快降至基础水平。17α——羟孕酮的显著增加在采最终成熟雌鱼的血浆中十分明显。然而直至排卵时17α、20β——diOHprog也无显著增加。由此想列17α——羟孕酮可作为17α、20β——diOHprog的一个预兆。这一结果为17α、20β——dioHprog是香鱼体内天然的催熟类固醇进一步提供了依据。     

虹鳟排卵前后血清中性类固醇激素浓度变化的研究

对虹鳟(Salmo gairdneri)排卵前后血清17β-雌二醇(17β-E_2),睾酮(T)和17α-羟-20β-双氢孕酮(17α20βP)的含量进行了测定。17β-E_2从排卵前15天的18.1ng/ml急骤下降到排卵前3—6天的2ng/ml,并继续下降,至排卵时仅为0.9ng/ml。睾酮在虹鳟雌鱼血清中的含量很高,血清浓度从排卵前9天的峰值水平143.3ng/ml缓慢下降,排卵时为24.3ng/ml。17α20βP的血清浓度变化明显,排卵前15天,该激素浓度接近于基线水平或甚至低得不能被检测,排卵前9天开始迅速上升,到排卵前3天达到峰值350.6ng/ml,排卵时为302.2ng/ml。本研究进一步证实了17α20βP在鲑鳟鱼类卵母细胞最后成熟过程中的生理作用,是一种诱发卵母细胞成熟的类固醇激素。临排卵前,血清17β-E_2浓度的下降,可能调节了17α20βP大量分泌的时间;17α20βP的大量分泌是卵母细胞达到最后成熟和排卵不可缺少的一环。注射合成的大麻哈鱼(Oncorhynchus keta)促性腺激素释放激素(s-GnRH)及其类似物(s-GnRH-A),诱发虹鳟血清类固醇激素17β-E_2,睾酮和17α20βP的变化趋势与自然排卵时的变化相类似。经注射药物诱发排卵的鱼,较对照组提早一周排卵,而且排卵较同步和集中。     

大阪鲫卵黄蛋白原和钙离子关系的初步研究

注射苯甲酸雌二醇诱导雄性大阪鲫产生雌性特异血清蛋白(卵黄蛋白原),随着诱导天数的增加,血清中的钙离子浓度升高,同时血清中的卵黄蛋白原的含量也相应增加。在此过程中肝细胞的细胞质中存在大量的钙离子,并进行着旺盛的蛋白合成。雌鱼和被诱导的雄鱼一样在肝细胞内也存在大量的钙离子。正常雄鱼的肝细胞不合成卵黄蛋白原,只有很少的钙离子存在。腹腔注射氯化钙使卵母细胞的卵径增大(实验组为 1.08±0.14mm;对照组为 1.04±0.14mm),并使卵母细胞的蛋白含量升高,同时卵泡膜上毛细血管的分布更为稠密,这表明钙离子可促进卵母细胞的发育和蛋白的吸收。     

鲤鱼血清中促性腺激素、17β雌二醇含量的周年变化

应用放射免疫测定法,对雌、雄鲤血清中促性腺激素(GTH)和17β-雌二醇(17β-E_2)的含量进行周年测定。GTH的常年分泌量,雌鲤平均为8.94±5.94ng/ml(12月份含量最低,峰值在1月份);雄鲤常年平均为8.72±5.20ng/ml(10月份含量最低,峰值在11月份)。17β-E_2的含量,雌鲤1-4月份较高,平均为2019.48±754.49pg/ml(全年峰值在2月份)。产卵季节后,卵巢开始退化,17β-E_2含量下降。5—8月平均为454.58pg/ml,产卵前后差异性显著。这表明性腺的发育和成熟与血清中17β-E_2含量变化的密切相关性以及雌二醇对GTH分泌的反馈抑制作用。     

雌二醇对日本沼虾肝胰腺的脂肪酸含量及组织结构的影响

日本沼虾(Macrobrachium nipponense)肝胰腺为卵巢发育提供脂类等营养,日本沼虾肝胰腺中含有与卵巢发育有关的雌二醇,日本沼虾卵巢发育过程中,肝胰腺中脂肪酸的含量及组织结构会发生相应的变化,本文研究雌二醇对日本沼虾肝胰腺中脂肪酸的含量及组织结构的影响。实验设3个试验组和1个对照组,试验组日本沼虾肌肉分别注射5、0.5和0.05μg·g-1体重的雌二醇,对照组注射生理盐水,5 d注射1次,共注射2次,10 d后测定肝胰腺中脂肪酸的含量及其组织结构的变化,从而研究雌二醇对日本沼虾肝胰腺中脂肪酸含量及组织结构的影响。测定结果表明,日本沼虾肝胰腺中主要脂肪酸为C16∶0、C18∶1n9和C18∶12n6(亚油酸),且单不饱和脂肪酸(MUFA)和多不饱和脂肪酸(PUFA)含量较高,分别为39.05%±1.16%和42.71%±2.56%。注射雌二醇主要影响肝胰腺中C18∶10、C18∶1n9、C18∶1n7、C18∶12n6、C18∶13n6、C18∶14n、C20∶14n6、C20∶15n3、C22∶14n6和C22∶15n3的含量,注射5μg·g-1和0.05μg·g-1雌二醇显著降低肝胰腺PUFA总含量(P0.05),其中对C18∶14n、C20∶15n3、C22∶14n6和C22∶15n3降低作用显著(P0.05);注射0.5μg·g-1雌二醇显著降低肝胰腺MUFA总含量(P0.05),其中对C18∶1n9、C18∶1n7和C20∶12n降低作用显著(P0.05);注射0.5μg·g-1雌二醇显著提高肝胰腺中PUFA总含量(P0.05),其中对C18∶13n6、C18∶14n、C20∶14n6、C20∶15n3(EPA)、C22∶14n6、C22∶15n3提高作用显著(P0.05),但是对C18∶12n-6和C20∶12n却有显著地降低作用(P0.05)。注射雌二醇会促使肝胰腺B细胞的体积增大和数量增加,其中0.5μg·g-1作用最明显。     

人工诱导花鳗鲡成熟过程中卵巢内6种性类固醇激素的含量及变化

本文采用超高效液相色谱—串联质谱(UPLC/MS/MS)方法,分析比较了成年花鳗鲡(Anguilla marmorata)经多次注射鲤鱼脑垂体(carp pituitary extract,CPE,20mg/kg.周)和人绒毛膜促性腺激素(hCG,300IU/kg.周)后,卵巢发育成熟过程中6种性类固醇激素的含量及变化。结果发现,睾酮(testosterone,T)、孕酮(progesterone,P)、雌二醇(estradiol-17β,E2)、雌三醇(estriol,E3)、17α,20β-二羟基-4-孕烯-3-酮(17α,20β-dihydroxy-4-pregnen-3-one,DHP)、17α-羟基孕酮(17α-hydroxyprogesterone,17α-OHP)在xBridge C18色谱柱上得到良好分离,在0～200ng/ml的范围内线性相关系数均大于0.99,检测限为0.1~0.2ng/g,回收率超过了89％,相对标准差均小于7.3%;注射激素后,6种类固类醇激素在花鳗鲡卵巢中的含量变化情况如下：第2次注射后,T, P, E2, E3, DHP, 17α-OHP的含量分别为0.27±0.05, 0.64±0.05, 0, 1.17±0.19, 0, 0ng/g; 第9次注射后,T, P, E2, E3, DHP, 17α-OHP的含量分别为0.73±0.13, 1.28±0.38, 1.27±0.27, 0.83±0.14, 1.50±0.59, 0.43±0.25ng/g; 第16次注射后,T, P, E2, E3, DHP, 17α-OHP的含量分别为1.17±0.14, 2.23±0.51, 5.59±0.96, 2.46±0.70, 2.29±0.65, 4.56±0.74 ng/g。结果表明,随着外源激素注射次数的增加,花鳗鲡卵巢中6种类固类醇激素的含量整体呈逐步增加的趋势,UPLC/MS/MS法能同时定量测定这6种性类固醇激素,具有灵敏、高回收率、稳定的优势。     

药浴给药恩诺沙星及其代谢产物在欧洲鳗鲡体内的药代动力学研究

应用反相高效液相色谱法,研究药浴给药条件下,恩诺沙星及其代谢产物环丙沙星在欧洲鳗鲡体内的药代动力学.按10mg·L-1药浴给药后,恩诺沙星在欧洲鳗体内各组织器官中分布可用开放性二室模型来描述.血浆、肌肉、肝脏和肾脏中恩诺沙星达峰时间分别为44.27h、42.74h、50.69h、95.80h,以后开始缓慢下降,血浆、肌肉、肝脏和肾脏中代谢产物环丙沙星达峰时间分别为48.89h、55.34h、54.64h、100.0h.给药3个月后血浆、肌肉、肝脏和肾脏中的恩诺沙星浓度分别为0.0844μg·mL-1、0.09959μg·g-1、0.01242μg·g-1、3.7164u·g-1;恩诺沙星在血浆、肌肉、肝脏和肾脏中的消除半衰期(T1/2β)分别为908.07h、901.24h、59.32h、767.81h.鉴于恩诺沙星和其代谢产物环丙沙星在欧洲鳗鲡体内消除较慢,建议养成阶段不使用此药.     

17-β雌二醇对西伯利亚鲟卵黄蛋白原的诱导及检测

以17β雌二醇(E2)诱导西伯利亚鲟幼鱼,取其血清样品后利用凝胶过滤层析进行分析,诱导组鱼血清中较对照组的多出一蛋白峰;收集浓缩该峰后经离子交换两步层析法进行分离,成功分离出西伯利亚鲟卵黄蛋白原(Vtg)。分离出的Vtg于7.5%的Native-PAGE凝胶电泳分析,得出其分子量为390 KDa;对Vtg氨基酸组成检测结果显示,谷氨酸、丙氨酸、赖氨酸、天冬氨酸和亮氨酸含量较高,分别为12.25%、10.15%、8.43%、8.37%和8.11%,但甲硫氨酸和组氨酸含量相比较低,分别为1.56%和2.42%。     

福建漳江口水产品中六六六和滴滴涕的残留及其人体健康风险

采用气相色谱(GC-ECD)方法分析了漳江口水产品中六六六(HCHs)、滴滴涕(DDTs)的残留量,并对其残留水平、组成特征和人体健康风险进行了探讨与评价。结果表明:鱼类、虾类和贝类中HCHs残留量(以湿重计)分别为0.842 ng·g-1(未检出~1.42ng·g-1)、0.374 ng·g-1(未检出~0.762 ng·g-1)、1.04 ng·g-1(未检出~1.59 ng·g-1);DDTs残留量分别为96.3 ng·g-1(3.40~432 ng·g-1)、6.79 ng·g-1(1.53~12.1ng·g-1)、37.0 ng·g-1(9.02~78.0 ng·g-1)。水产品中DDTs残留量鱼类贝类虾类,且其残留量均高于HCHs的残留量。与其它地区相比,漳江口水产品中HCHs、DDTs含量属于中等水平。组成特征显示研究区域近期无HCHs污染源输入,但局部区域近期有新DDT的输入,可能与三氯杀螨醇的使用有关。所采集的水产品中HCHs、DDTs残留量尚低于我国食品安全国家标准—食品中农药再残留限量(GB2763-2014),亦低于日本、欧盟等发达国家和地区相关的最大残留限量,HCHs、DDTs通过膳食的暴露暂时不会对该地区的人体健康产生危害。     

超高效液相色谱法测定鱼体组织中培氟沙星的含量

建立了测定鱼血浆、肌肉、肝胰脏、肾脏中培氟沙星含量的超高液相色谱一紫外法。将组织样品剪碎后用磷酸二氢钾溶液提取,固相萃取柱净化,0．1％甲酸水溶液：LN（V：V=90：10）流动相洗脱。该方法血浆的检出限为0．01μg·mL-1,肌肉、肝胰脏、肾脏的检出限均为0．02μg·g-1,线性范围为0．01-10μg·mL-1,平均回收率为70．2-95．1％。本方法的前处理过程操作简便,避免使用有机溶剂,减少对环境的污染和人体健康的伤害。     

17β-雌二醇对双齿围沙蚕幼虫SOD、CAT和GST活性的影响

将双齿围沙蚕（Perinereis aibuhitensis）幼虫暴露于不同质量浓度的17β-雌二醇（0.1μg·L^-1、1μg·L^-1、10μg·L^-1、100μg·L^-1和1 000μg·L^-1）中,于第2、第4、第6和第8天取样,分别测定抗氧化酶[超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽硫转移酶（GST）]活性。结果表明,第2天时10μg·L^-1浓度组显著诱导双齿围沙蚕CAT、SOD和GST活性,1 000μg·L^-1浓度组显著抑制其SOD和GST活性。第4天时各浓度组SOD和GST活性均被不同程度诱导。第6天时低浓度组（0.1μg·L^-1和1μg·L^-1）显著抑制双齿围沙蚕CAT活性,高浓度组（100μg·L^-1和1 000μg·L^-1）则抑制其SOD活性。第8天时,除1 000μg·L^-1浓度组外,其余各组CAT活性均被不同程度诱导（P〉0.05）,而SOD活性则受到抑制,10μg·L^-1浓度组显著抑制其GST活性。试验结果显示,外源性17β-雌二醇对双齿围沙蚕幼虫产生氧化胁迫,沙蚕幼虫SOD、CAT、GST对17β-雌二醇的响应与其暴露浓度及时间有关。     

中国毛虾ACE抑制肽的初步研究

对以中国毛虾为原料酶法制备具有抑制血管紧张素转换酶(ACE)活性的酶解产物的方法作了探讨。以体外活性(ACE抑制率)为指标,通过正交试验确定胃蛋白酶的最佳酶解条件为pH2.4、温度41℃、酶量900U·g-1底物、底物浓度8%;酶解产物的IC50为0.65mg·mL-1,再分别利用SephadexG 25和SephadexG 15对其进行进一步分离提纯,IC50降至0.084mg·mL-1和0.046mg·mL-1,活性组分中的疏水性氨基酸含量增高,最终活性产物的分子量分布在700～1900。     

刺参肠、性腺酶解多肽体外抗氧化作用研究

刺参（Apostichopus japonicus）肠和性腺是刺参加工过程中的副产物,为丰富其高值化利用的基础理论,研究了刺参肠、性腺酶解过程中可溶性蛋白和氨基酸态氮质量浓度变化,分析了酶解多肽对11-二苯基苦基苯肼（DPPH·）、羟基自由基（·OH）和超氧阴离子自由基（O2^-·）的体外清除效果。结果显示,刺参肠和性腺经生物酶水解后,水解度分别为53.63%和63.40%,酶解液中可溶性蛋白质量浓度分别为4.62 mg·mL-1和5.01 mg·mL-1,氨基酸态氮质量浓度分别为0.43 mg·mL-1和0.56 mg·mL-1。刺参肠和刺参性腺酶解多肽清除DPPH·的半抑制质量浓度（IC50）分别为3.31 mg·mL-1和0.88 mg·mL-1,清除·OH的IC50分别为9.53 mg·mL-1和8.81 mg·mL-1,清除O-2·的IC50分别为6.42 mg·mL-1和3.22 mg·mL-1。刺参肠和刺参性腺酶解多肽具有一定的体外抗氧化效果,应用前景广阔。     

外源性雌二醇对异育银鲫脑垂体-甲状腺轴的影响

运用SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法和放射免疫方法(RIA)分析了外源性雌二醇(estradiol-17β,E2)对异育银鲫脑垂体-甲状腺轴的影响。实验设计时间为10周,实验组每2周注射一次0.5mg.kg-1体重的E2(用57%酒精溶解),对照组注射同剂量的57%酒精。实验期间没有投喂饲料。在实验条件下,SYBR Green I荧光定量RT-PCR分析结果显示,注射3和5次外源性E2后,促甲状腺激素β亚基mRNA的表达水平与对照组相比均未有显著变化,但随着注射次数的增加,总体呈现升高的趋势。另一方面,RIA结果显示,注射3次外源性E2后,血清中甲状腺激素T3和T4含量水平与对照组相比均显著升高(P<0.05);注射5次后,与对照群相比差异极显著(P<0.01)。以上结果提示,外源性E2影响异育银鲫的正常生理状态。     

马氏珠母贝蛋白的分离及分子量分布研究

试验结果表明,马氏珠母贝全脏器各分离蛋白组分占总蛋白含量分别为:非蛋白氮1.48%,肌浆蛋白33.20%,肌原纤维蛋白13.14%,碱溶性蛋白21.54%,基质蛋白30.65%;贝肌肉各分离蛋白组分占总蛋白含量分别为:非蛋白氮0.83%,肌浆蛋白26.56%,肌原纤维蛋白18.48%,碱溶性蛋白30.34%,基质蛋白23.79%;马氏珠母贝蛋白氨基酸组成均衡,呈味氨基酸及支链氨基酸含量高,但在各蛋白组分中的含量存在一定差异性.利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定的分子量分布结果显示,2种原料蛋白的肌浆蛋白分子量分布范围较宽,集中在200～19 kDa,肌原纤维蛋白分子量分布集中在200～45 kDa,碱溶性蛋白集中分布在41～3 kDa.