植物透射电镜样品制备技术Improvement and comparison with different resins of madding ultrathin section for the transmission electron microscope specimen-making的改进及不同树脂选择比较

针对植物细胞壁组织坚硬,透射电镜样品制备难度大的问题,笔者对样品制备程序化进行了探讨;同时,在样品制备过程中对不同树脂配方进行了选择和比较,结果表明：在经优化的样品处理下,不同树脂均能观察到植物样品的超微结构,结构清晰,且环氧树脂618包埋的样品受环境影响较小。In view of the hard plant cell wall, there is some problem during the transmission electron microscope (TEM) sample preparation. The authors probed into procedural sample preparation, at the same time, different resins were selected and compared. The results showed that ultra-microstructure were observed distinctly using different kinds of resin under the same conditions, the epoxy resin 618 is less affected by the environment in the process of embedding.     

透射电镜样品制备技术改良研究

透射电镜样品制备技术改良研究结果表明,通过延长锇酸固定时间和包埋剂梯度渗透时间,避免了细胞器的降解,有利于细胞组织保存和超微结构的观察,并且减少了包埋块切割过程中的破损现象和刻痕,提高了切割质量,此方法能提高生物样品制备质量。     

土壤样品的采集与制备技术

根据测土配方施肥的需要 ,介绍土壤样品采集与制备的一般方法和特殊土样的采集技术。     

色谱样品的制备方法

本文根据色谱样品制备技术的发展趋势,通过对色谱样品制备方法的简要介绍,提出了色谱样品制备的注意事项,从而达到更好地完成色谱分析工作的目标。     

植物蛋白质双向电泳样品制备研究进展

蛋白质双向电泳是蛋白质组学的支撑技术,在微生物和动物蛋白质分析上取得较大进展,但在植物蛋白质分析上却进展不大,究其原因在于难以制备到适于双向电泳的植物蛋白质样品。笔者综述了植物蛋白质双向电泳样品制备的方法,分析各种方法的优缺点,并提出今后植物蛋白质样品制备的研究重点。     

植物样品采集·制备·储存及消解过程中存在问题分析

结合目前单位所承接的植物样品检测任务的实际情况,分析了植物样品的野外采集、加工制备及消解过程中会遇到的几个问题,为准确测定植物样品中重金属元素以及客观评价植物重金属污染提供了保障。     

土壤样品的采集与制备

通过多年的实践经验并查阅了相关资料,本文着重从3个方面详细系统地阐述了土壤样品的采集和制备,以供广大科技人员参考。     

卵母细胞扫描电镜和透射电镜样本的制作

[目的]探讨卵母细胞扫描电镜和透射电镜的制作方法,为相关研究提供技术支持。[方法]以猪GV期和体外成熟MII期卵母细胞为研究对象,分别制作扫描电镜样本和透射样本,并观察其超微结构变化。[结果]所用方法需样本量少,电镜下细胞形态结构完好,超微结构清晰。[结论]证实该方法适用于卵母细胞超微结构观察的制样。     

卵母细胞扫描电镜和透射电镜样本的制作

[目的]探讨卵母细胞扫描电镜和透射电镜的制作方法,为相关研究提供技术支持。[方法]以猪GV期和体外成熟MⅡ期卵母细胞（抽吸法采集）为研究对象。①扫描电镜样本制备：供试GV期和MⅡ期卵母细胞于PBS（pH值7．4）中清洗后,部分转入0．1％透明质酸酶中,38．5℃孵育15min,微吸管吹打去除卵丘细胞（CC）,即获得无卵丘细胞的卵母细胞,用以观察卵母细胞外透明带（ZP）结构;取去除卵丘细胞的部分卵母细胞,经PBS液洗后,再置于0．5％链霉蛋白酶中,在实体显微镜下观察,待透明带溶解时,小心地将卵母细胞转入PBS中,即获得了无透明带的卵母细胞,用以观察卵母细胞膜表面的微绒毛（Mv）。未去除卵丘细胞的卵母细胞、去除卵丘细胞的卵母细胞及去除透明带的卵母细胞分别经PBS洗2～4次后,于2．5％戊二醛中4℃固定6h,再经PBS清洗3次,每次30min;再于1％锇酸中固定1．5h,然后再经PBS清洗3次,每次30min;之后,用乙醇逐级（30％、50％、70％、90％、100％、100％）脱水,每级20min;样品脱水后,用乙酸异戊脂置换;置换后的样品直接移到样品台上,再放入临界点干燥仪干燥,粘台,IB-5离子溅射仪喷金,置于扫描电子显微镜下观察、拍照。②透射电镜样本制备：供试卵母细胞也经PBS清洗,戊二醛固定,琼脂包埋后锇酸固定,乙醇脱水,步骤基本同上,只是最后用环氧丙烷置换。脱水后的样品于Epon-812树脂和丙酮等体积混合液中渗透4h,再在纯Epon-812中渗透过夜;然后将样品包埋,放入聚合器中聚合（35℃,24h;45℃,24h;60℃,48h）;聚合后的样品在实体显微镜下修块,半薄切片定位,重新包埋,LKB—V超薄切片机切片;超薄切片用醋酸双氧铀-柠檬酸铅双重染色,样品自然干燥后在透射电子显微镜下观察、拍照。[结果]电镜下观察到的细胞形态结构完好,超微结构清晰。扫描电镜下,GV期卵母细胞的卯丘细胞紧密包围在卯母细胞外,微绒毛呈致密状垂直于卵膜表面,透明带呈不规则的蜂窝状,有小梁突起。在体外成熟MⅡ期卵母细胞中,卵丘细胞变得松散,卵母细胞表面的微绒毛结构显得更光滑,透明带呈不规则的蜂窝样,但蜂窝状结构增多,且小梁突起更明显。透射电镜下,GV期卵母细胞的卵丘细胞在透明带周围紧密排布,并有大量突起伸人透明带中;卵母细胞微绒毛数量较多、相对较长,且也伸人透明带中;线粒体呈圆形,多为横嵴并清晰,成簇分布于皮质区;脂滴以两种不同形式存在于大部分细胞质内,一种呈均质状,另一种不均质且有透亮条纹,两种形式的脂滴常相邻存在,并以均质脂滴居多。脂滴外包有不连续的滑面内质网;高尔基体发达,由多层扁平囊泡及大小泡组成;在MⅡ期卵母细胞中,卵丘细胞间缝隙连接增大,出现了明显的卵周隙;与培养前卵母细胞相比,微绒毛相对较短、较粗,且从ZP内撤回;线粒体体积增大,仍成簇伴随着脂滴分布;脂滴仍以两种不同形式存在,但以不均质脂滴居多;不均质脂滴呈球状,且上透亮条纹增多,电子密度更高;皮质颗粒位于卵质膜下,呈单层排列。[结论]证实该方法适用于卵母细胞超微结构观察的制样,另外,此法也适用于休积小、数量少、游离细胞的电镜样本制备。     

家蚕胚胎培养细胞的扫描电镜和透射电镜观察

用扫描电镜和透射电镜对家蚕胚胎培养细胞（ＢｍＮ＿４细胞株）进行形态学和组织学观察，细胞为圆球形，表面凹凸不平，细胞质中含有大型的颗粒。     

不同浓度的海水处理对库拉索芦荟叶绿素含量及其超微结构的影响

采用透射电镜技术 ,比较了不同浓度的海水处理对库拉索芦荟叶绿素含量及其超微结构的影响。结果表明 :10 %(体积分数 ,以下同 )海水处理对芦荟的叶绿体、线粒体超微结构伤害不大 ;而 30 %的海水处理使芦荟的叶绿体膨胀 ,线粒体膜模糊。与对照相比 ,10 %海水处理的芦荟 ,其叶绿素a和b的含量无显著性差异 ,而 30 %海水处理的显著下降     

淀粉-碱木素改性酚醛树脂的粘接性能及固化动力学研究

利用淀粉和碱木素改性酚醛树脂, 讨论了各种因素对该胶黏剂所压制的胶合板的胶合强度、甲醛释放量的影响;并采用差示扫描量热(DSC)法探讨了淀粉-碱木素改性酚醛树脂的固化反应过程,运用Kissinger和Ozawa法进行了动力学研究,得到其固化反应活化能,并通过Crane法得到了反应级数。结果表明:该胶所压制的胶合板的胶合强度达到国家一类胶标准要求,甲醛释放量达到国家E1级标准要求; 当碱木素用量为质量分数18.00%、羟甲基化产物加入量为质量分数12.00%时,所压制的胶合板的胶合强度最大(其值为1.22 MPa);而当碱木素用量为质量分数18.00%,羟甲基化产物加入量为质量分数9.00%时,胶合板的甲醛释放量最小(其值为0.32 mg·L-1)。2种方法计算得到活化能的大小顺序是一致的,高质量分数羟甲基的改性酚醛树脂在固化过程中具有的活化能比低质量分数羟甲基的酚醛树脂的要高,意味着高质量分数羟甲基的改性酚醛树脂固化时需要较多热量,所以不宜添加过多羟甲基化产物。反应级数为小数(0.69~0.86),说明淀粉-碱木素改性酚醛树脂的固化反应是一个复杂反应。     

用树脂法提取龙葵果紫红色素的研究

以龙葵果为原料,研究了不同树脂对龙葵果紫红色素的吸附率和解吸效果,及不同洗脱剂的洗脱效果,确定了用树脂法提取龙葵果紫红色素的工艺,并对用该工艺提取的龙葵果紫红色素的性质进行了检测。结果表明,AB-8树脂对龙葵果色素的吸附和解吸效果较好,用体积分数50%乙醇洗脱100 m in得到的产品质量较好,树脂法提取的龙葵果紫红色素色价为35,产品收率为12.6 g/kg;AB-8树脂重复使用20次后吸附率仅降低1.45%;树脂法提取的色素水溶性好,在酸性条件下具有较好的稳定性,有一定的耐光性,在80℃以下热稳定性较好,且对低浓度的常用食品添加剂比较稳定;N a+,K+,C a2+,M g2+和Zn2+对色素液无影响,但C a2+,A l3+对色素液有增色作用,F e3+对色素液具有变色作用;氧化剂H2O2和还原剂N a2SO3.7H2O均会加速色素的降解。     

大孔树脂对紫甘薯色素的静态吸附参数研究

选取4种大孔树脂（AB-8、S-8、NAK-Ⅱ及NKA-9）吸附紫甘薯色素，研究了大孔树脂吸附过程中的静态吸附动力学和AB-8大孔树脂的静态吸附热力学。结果表明：AB-8大孔树脂是较理想的吸附树脂，其吸附平衡速率常数为每分钟0．0246，吸附过程和Freundlich经验公式拟合较好；当溶液的色素含量为0．992（以A535表示）、吸附温度为40℃、吸附时间为30min时具有最佳的吸附效果。     

不同产地白术根茎解剖比较

为鉴定白术Atractylodes macrocephala道地性药材,采用滑走切片法制作永久制片,在显微水平上比较了不同产地白术的解剖特征。试验表明,木质部宽、树皮宽、木皮比（木质部与韧皮部宽度比）、导管密度、油室直径和油室密度等参数在不同产地间均存在着极显著的差异（P〈0．01）,反映了不同产地的白术根茎在解剖构造上的不一致性;但差异的表现却不尽相同,错综复杂,引起差异的遗传和环境上的因素在解剖构造上是一个综合表现。油室面积比例可作为衡量有效成分的一个较好的指标。表7参16     

Identifying the ploidy of ginkgo pollen using laser scanning confocai and scanning electron microscope.

以经秋水仙碱诱导获得的银杏大花粉为材料,以未经处理的正常银杏花粉为对照,利用扫描电子显微镜和激光扫描共聚焦显微镜分别观察2种花粉表面形态,并分析对比其细胞内的DNA相对荧光量与银杏大花粉核内染色体倍性关系,为正确检出银杏二倍体花粉奠定重要工作基础。研究结果表明,此方法用于花粉粒的倍性鉴定科学准确,所需试验样本少,实用性强,在植物花粉倍性鉴定中有着较好的应用前景。     

应用LSCM和SEM鉴定银杏花粉的倍性

以经秋水仙碱诱导获得的银杏大花粉为材料,以未经处理的正常银杏花粉为对照,利用扫描电子显微镜和激光扫描共聚焦显微镜分别观察2种花粉表面形态,并分析对比其细胞内的DNA相对荧光量与银杏大花粉核内染色体倍性关系,为正确检出银杏二倍体花粉奠定重要工作基础。研究结果表明,此方法用于花粉粒的倍性鉴定科学准确,所需试验样本少,实用性强,在植物花粉倍性鉴定中有着较好的应用前景。      

大豆疫霉根腐病菌毒素对抗感不同大豆品种根部超微结构的影响

用不同浓度的毒素处理抗感不同的大豆品种的根部,研究毒素对大豆细胞根部超微结构的影响。结果表明,较高浓度大豆疫霉根腐病菌毒素(稀释50倍,浓度为0.1794mg·mL-1)处理抗感不同大豆品种的根部后,抗病品种和感病品种根部细胞内部结构均遭到了明显的破坏。适宜浓度的毒素(稀释100倍,浓度为0.0897mg·mL-1)处理抗感品种根部后,抗病品种细胞内部结构基本上比较完整,而感病品种细胞内部结构已经发生了较大的变化,线粒体绝大多数都出现了空泡化。这说明只有在适宜浓度毒素处理下,才能在细胞超微结构上区分出抗感品种在抗性上的差异。本研究为揭示毒素在细胞水平的致病机理及寄主抗毒素的机理奠定了一定的理论基础。