刺玫果化学成分的研究

采用硅胶柱色谱和薄层色谱等方法对吉林产刺玫果化学成分进行了分离、纯化,运用现代波谱分析技术和理化性质对照等方法对其进行结构鉴定。共分离得到7个化合物,分别为α-D-(6-O-白芥子酰基)-吡喃葡萄糖基-β-D-(3-O-白芥子酰基)-呋喃果糖(1)、木犀草素-7-O-芸香糖苷(2)、金丝桃苷(3)、槲皮素(4)、异甘草素(5)、β-胡萝卜苷(6)、β-谷甾醇(7)。其中化合物1、2、5为首次从刺玫果中分离得到。     

HPLC法测定乌韭的荭草苷和牡荆素含量

建立乌韭地上部分荭草苷和牡荆素含量的测定方法,检测不同产地乌韭中两种黄酮苷的含量,对乌韭资源进行评价.用超声波提取法提取,反相高效液相色谱法(RP-HPLC)测定,GeminiC18色谱柱,乙腈/1%磷酸溶液(体积比15∶85)为流动相,流速1 mL/min,检测波长340nm.荭草苷在0.025～0.148μg范围内有良好的线性关系,加样回收率为100.61%,相对标准偏差(RSD)2.18%;牡荆素在0.035～0.207 μg范围内有良好的线性关系,加样回收率为99.77%,RSD 2.37%.云南丘北所产乌韭的荭草苷和牡荆素质量分数都是最高,分别达到0.116 6%和0.145 7%,移栽到南京地区1年后荭草苷含量下降,牡荆素含量增高.以荭草苷和牡荆素含量为指标,云南丘北所产乌韭是较好的种源.     

刺玫果提取物中总三萜酸的定性定量分析研究

建立刺玫果提取物中总三萜酸的定性定量分析方法。采用TLC法对刺玫果提取物总三萜酸中的熊果酸进行定性分析;采用UV法对刺玫果提取物中的总三萜酸进行了定量分析;采用HPLC法对刺玫果提取物总三萜酸中的齐墩果酸、熊果酸进行了定量分析。结果表明,UV法中齐墩果酸在1.75~15.75 mg/L范围内与吸光度有良好的线性关系(r=0.999 1),平均加样回收率为101.60%(RSD1.23%);HPLC法中齐墩果酸、熊果酸在0.1~1.1μg(r=0.999 7)、0.024~0.768μg(r=0.999 9)线性关系良好,平均加样回收率分别为100.24%(RSD 1.44%)、100.54%(RSD 0.45%)。3批刺玫果提取物中总三萜酸平均为8.62%,齐墩果酸平均为0.273%,熊果酸平均为0.534%。结果表明,所建立的刺玫果提取物中总三萜酸的定性分析和定量分析方法可用于该提取物的质量控制。     

HPLC法同时测定凤尾草中5种黄酮类成分的含量

建立高效液相色谱法,同时测定10个不同产地凤尾草中5种黄酮类成分:新西兰牡荆苷、忍冬苷、野漆树苷、木犀草素和芹菜素的含量.使用Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-0.1％甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱(0～10 min,15∶85;20～30 min,25∶75;35～40 min,50∶ 50),流速1.0 mL/min,检测波长350 nm,柱温25℃.结果新西兰牡荆苷、忍冬苷、野漆树苷、木犀草素和芹菜素5个黄酮类化合物在测定的范围内峰面积与浓度之间均表现出良好的线性(r≥0.999,n=5),加样回收率分别为97.18％ ～ 105.20％(RSD为1.72％～3.20％)、95.02％～104.92％(RSD为1.96％～2.93％)、98.45％～ 103.70％(RSD为1.66％～2.70％)、96.41％ ～ 104.73％(RSD为1.03％～3.46％)、95.82％～99.34％(RSD为1.85％～ 3.95％).结果表明凤尾草中5种黄酮含量的地区差异性不大,各地区凤尾草中5种黄酮类化合物总含量在0.5 ～2.2 mg/g范围内.     

毛竹叶黄酮碳苷C-糖基化途径及C-糖基转移酶的分析

【目的】毛竹叶中含有大量具有很强生物活性的黄酮碳苷,C-糖基转移酶(CGT)是黄酮碳苷生物合成代谢途径中C-糖基化的关键酶。本研究从毛竹叶中分离纯化CGT,研究毛竹叶黄酮碳苷的C-糖基化途径以及CGT的酶学性质和一级结构氨基酸序列特征,为后续深入研究毛竹叶中的CGT奠定良好的基础。【方法】通过硫酸铵分层沉淀、透析、葡聚糖凝胶过滤、阴离子交换层析、超滤脱盐等方法纯化CGT,使用SDS-PAGE进行检测。分别用圣草素查尔酮、圣草素、木犀草素作为底物,根据已建立的CGT催化的C-糖基化反应体系,进行可能的C-糖基化途径验证。运用Q-TOF检测分析和数据库搜索比对等方法,确认毛竹CGT的基因序列和一级结构氨基酸序列。【结果】毛竹叶黄酮碳苷CGT的分子量大约是50 kDa,酶反应体系最佳的反应时间是40 min,最佳反应温度是28℃,缓冲盐的最佳pH8.1,底物木犀草素的最佳浓度是31.76μmol·L~(-1)。底物为木犀草素的反应体系在CGT催化下大量转化生成了异荭草苷,底物为圣草素查尔酮和圣草素的反应体系在CGT催化下大量转化生成了未知产物,只有少量转化生成异荭草苷。根据蛋白质质谱裂解规律和蛋白质碎片离子,解析出4个CGT肽段,并均可与毛竹基因(PH01000603G0510)编码的蛋白质氨基酸序列匹配,经数据搜索匹配,毛竹基因(PH01000603G0510)与水稻CGT基因(FM179712)匹配率为81%。【结论】通过对毛竹叶黄酮碳苷C-糖基转移酶提取、分离纯化及质谱鉴定得到可能的毛竹叶黄酮碳苷CGT基因序列(PH01000603G0510)。确定毛竹叶黄酮碳苷C-糖基化途径,主要途径是CGT催化木犀草素和UDP-葡萄糖直接合成异荭草苷,次要途径是CGT催化圣草素查尔酮和UDP-葡萄糖,或圣草素和UDP-葡萄糖间接合成异荭草苷。毛竹叶CGT极易催化生成C-6黄酮苷(异荭草苷),而极少催化生成C-8黄酮苷(荭草苷)。     

刺玫果总黄酮的双水相萃取工艺及其抗氧化能力

为探索刺玫果总黄酮的乙醇-硫酸铵双水相(添加氯化钠)萃取工艺及其体外抗氧化性。采用单因素和正交试验法对刺玫果总黄酮的双水相萃取工艺进行了优化;并通过测试刺玫果总黄酮提取液对二苯基苦基肼自由基(DPPH·)、羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O-2·)、亚硝酸盐、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵自由基阳离子(·ABTS+)的清除率和还原力,评价其抗氧化活性。结果表明:在乙醇体积分数27%、硫酸铵质量浓度0.21 g/m L、刺玫果提取液体积分数22%、氯化钠加入量为2.0 g的最佳工艺条件下刺玫果总黄酮平均萃取率为91.81%。刺玫果总黄酮提取液对·ABTS+、·OH和O-2·具有显著的清除能力,当总黄酮质量浓度分别为0.12、0.30和0.60 g/L时,对·ABTS+、·OH和O-2·的清除率分别为90.27、89.60%和96.73%,其清除能力均强于Vc;对DPPH·、亚硝酸盐具有一定的清除能力,但弱于Vc;刺玫果总黄酮提取液具有一定的还原能力。     

簕竹属竹叶中黄酮类成分分析及其抗氧化活性

为探索簕竹属主要竹种竹叶提取物中黄酮类成分的开发利用,以簕竹属10个竹种的竹叶为原料,提取、分离和纯化后得到竹叶提取物,建立了测定竹叶提取物中5种黄酮类成分的HPLC方法,采用DPPH法和ABTS法对竹叶提取物的抗氧化活性进行评价。竹叶中5种黄酮类成分异荭草苷、荭草苷、牡荆苷、异牡荆苷和木犀草苷的HPLC方法为：采用YMC-Pack ODS-A色谱柱(250 mm×4.6 mm, 5μm),以0.5%乙酸/水溶液(A)和乙腈(B)为流动相,14%B等梯度洗脱40 min,进样量10μL,流速1 mL/min,柱温30℃,检测波长340 nm。此条件下,5种黄酮类成分在40 min内实现完全分离,分离度均大于1.2,其质量浓度与峰面积具有良好的线性相关性,相关系数R²>0.999,加标回收率在94.36%～105.37%之间,相对标准偏差(RSD)在0.98%～3.48%之间,表明该方法稳定可靠。测得的10种簕竹属竹叶提取物中5种黄酮类成分的总量为62.30～223.24 mg/g,其中凤尾竹竹叶提取物中的质量分数最高,为223.24 mg/g。10种簕竹属竹...     

响应曲面法优化钩藤叶中钩藤碱和异钩藤碱的提取条件

以钩藤叶为材料,在干燥温度、提取时间和提取剂浓度3个单因素试验的基础上,采用Box-Behnken中心组合进行3因素3水平试验设计,建立回归方程,优化出钩藤叶中钩藤碱和异钩藤碱的最佳提取条件。模拟得到钩藤叶干燥温度为54.95℃时,钩藤碱和异钩藤碱的最优提取条件为超声时间60 min、甲醇浓度73.35%。在此条件下,钩藤碱的最高提取率为133.342μg·g~(-1),异钩藤碱的最高提取率为429.746μg·g~(-1)。为了方便实际操作,校正条件为干燥温度55℃、超声提取60 min、甲醇浓度73%。通过验证试验得到钩藤碱平均提取率为130.8μg·g~(-1),异钩藤碱平均提取率为425.6μg·g~(-1),与模型预测值较为接近。因此响应曲面法可以对钩藤叶中钩藤碱和异钩藤碱的提取条件进行优化。     

沉香叶中芒果苷的提取工艺

以沉香叶为原料,采用单因素试验和正交试验,探讨乙醇浓度、液固比、提取时间和提取温度对芒果苷提取率的影响,并以提取率为评价指标,优化提取工艺。试验结果表明,沉香叶中芒果苷的最佳提取工艺为:采用体积分数70%的乙醇,液固比20,提取温度90℃,回流提取2次,每次1h。在此优化工艺条件下,芒果苷得率达3.31%。     

正交试验法优化超声波提取苦楝果实中川楝素

在单因素试验基础上,选取甲醇浓度、提取时间、料液比、超声波功率等4个主要因素,采用L16(45)无重复试验正交设计和方差分析优化超声波提取苦楝果实中川楝素的工艺条件,研究各因素交互作用对苦楝果实中的川楝素提取率的影响。结果表明,甲醇浓度和料液比2个因素对川楝素提取率有显著影响。苦楝果实中川楝素的超声法提取最佳工艺参数分别为,甲醇浓度70%、提取时间20 min、料液比1 g︰30 m L、超声波功率200 W,在此条件下,川楝素的提取率达到了0.32%。超声提取法提取苦楝果实中川楝素的精密度、稳定性、重复性、加标回收率均良好。     

酶法提取黑加仑果渣花色苷的研究

通过单因素和正交试验,确定了黑加仑果渣花色苷酶法提取的最佳工艺条件为:釆用纤维素酶酶解,温度50℃,时间100min,果渣与酶解液的比1:9(g:mL),酶用量为原料质量的1%,pH值5.0,黑加仑花色苷提取率86.63%.釆用果胶酶酶解,温度50℃,时间120min,果渣与酶解液的比为1:8(g:mL),酶用量为原料质量的1.4%,pH值3.5,黑加仑花色苷提取率91.09%.并确定了使用果胶酶的提取效果好于纤维素酶.     

印楝素A无细胞合成体系构建及其合成前体

【目的】印楝素是一种植物源杀虫剂,印楝素A是印楝素的主要活性成分。本研究通过对印楝素A无细胞合成体系制备条件和反应条件的优化,以及印楝素A合成前体的筛选,探讨印楝素A的离体生物合成途径,以为指导构建印楝素异源生物合成平台,实现印楝素的异源生物合成奠定基础。【方法】通过对缓冲液类型、浓度、起始pH、提取时间及料液比进行单因素试验及正交试验优化,构建印楝素A无细胞合成体系;从反应终止试剂及稳定剂、反应温度、反应时间、底物浓度以及辅助因子5个方面优化无细胞合成体系的反应条件。利用印楝素A无细胞合成体系分别以2,3-环氧鲨烯、羊毛甾醇、大戟二烯醇、丁酰鲸鱼醇、nimbin、茄碱苷和脱乙酰茄碱苷为底物,以印楝素A相对产量为评价标准,探讨印楝素A合成前体。【结果】印楝素A无细胞合成体系的构建:以pH7.0的200 mmol·L~(-1) Tris-HCl缓冲液,按1∶20(g·mL~(-1))料液比加入印楝叶片,提取1 h。优化的印楝素A无细胞合成条件为:反应总体积800μL,其中含印楝无细胞提取物300μL(相当于印楝叶0.015 g),100μL 250μmol·L~(-1)的底物(鲨烯)和400μL含有1 mmol·L~(-1) Mg~(2+)、1 mmol·L~(-1) Mn~(2+)、0.1 mmol·L~(-1) ATP、0.1 mmol·L~(-1) NADPH~+和5 mmol·L~(-1)抗坏血酸的缓冲液,在30℃下反应60 min,迅速加入200μL乙酸终止反应。分别以2,3-环氧鲨烯、丁酰鲸鱼醇、大戟二烯醇、nimbin、茄碱苷和脱乙酰茄碱苷为底物,反应完成后,印楝素A含量均有不同程度的增加;羊毛甾醇抑制体系中印楝素A的合成。【结论】羊毛甾醇不是印楝素A的合成前体,2,3-环氧鲨烯和丁酰鲸鱼醇是印楝素A的前体,nimbin、大戟二烯醇、脱乙酰茄碱苷和茄碱苷极可能是印楝素A的合成前体,且茄碱苷位于合成途径较下游的位置。     

HPLC法测定木豆中牡荆苷和异牡荆苷含量

建立了测定木豆叶、茎、根中牡荆苷和异牡荆苷含量的高效液相色谱分析方法.色谱柱为HIQ Sil C18V(250 mm × 4.6 mm,5 μm);流动相为甲醇-水-甲酸(体积比35:64.74:0.26); 检测波长330 nm;流速1 mL/min;进样量10 μL; 柱温30 ℃.在2～200 mg/L 牡荆苷、异牡荆苷质量浓度与色谱峰面积线性关系良好; 牡荆苷峰面积精密度的相对标准偏差(RSD)最大为2.93 %,重复性RSD为2.91 %,加样回收率为97.38 %; 异牡荆苷峰面积精密度的RSD最大为2.69 %,重复性RSD为3.37 %,加样回收率为98.63 %.木豆叶、茎、根中牡荆苷、异牡荆苷的质量分数分别为0.768、 0.066、 0.183 mg/g 和0.799、 0.139、 0.013 mg/g.叶中牡荆苷和异牡荆苷含量明显高于茎、根中的含量,可以作为大规模获得牡荆苷、异牡荆苷的资源.     

狭叶虎皮楠黄酮类物质的分离、鉴定及抗氧化活性研究

研究了狭叶虎皮楠中的黄酮类化合物,利用硅胶柱、Sephadex LH-20和制备型液相色谱(pre-HPLC)从中分离得到4个黄酮类单体,利用质谱及核磁共振进行分析鉴定,得出化合物分别为:芹菜素(Ⅰ)、木犀草素(Ⅱ)、柚皮苷(Ⅲ)和葛根素(Ⅳ) ,并对它们的抗氧化活性进行了比较,经检索这4种化合物均为首次从狭叶虎皮楠中提取分离得到.     

沉香叶抗肿瘤活性化学成分研究

在抗肿瘤活性部位筛选的基础上,利用多种柱色谱方法对沉香属白木香叶中的化学成分进行了分离,通过理化常数和波谱分析鉴定其中所分得化合物的结构.从该植物中共分得10个化合物,结构分别鉴定为:洋芹素-7,4'-二甲醚(1)、木犀草素-7,3',4'-三甲醚(2)、木犀草素-7,4'-二甲醚(3)、芫花素(4)、木犀草素(5)、羟基芫花素(6)、2-O-α-L-鼠李糖-4,6,4'-三羟基二苯甲酮(7)、对羟基苯甲酸(8)、β-胡萝卜苷(9)、7α-羟基-β-谷甾醇(10).化合物7为新化合物,化合物1～6及8、10为首次从该植物中分到.     

软枣猕猴桃“龙成2号”果实中多糖提取及纯化工艺优化

采用水提醇沉法和微波法提取"龙成2号"软枣猕猴桃果实多糖,用单因素分析法比较提取效果,获得最优提取工艺;采用DEAE-52纤维素阴离子交换柱层析法对粗提物进行分离纯化,绘制洗脱图谱,用单因素分析法比较纯化效果,获得最优纯化工艺。经透析、浓缩及冷冻干燥获得纯化多糖,保存备用。水提醇沉法提取多糖最优工艺条件:水浴及醇沉时间均为4 h,无水乙醇量为4倍样品体积,多糖提取率9.29%。微波法提取多糖最优工艺条件:料液比1︰30 g·m L-1,功率400 W,多糖提取率4.35%。且水提醇沉法提取效果优于微波法。DEAE-52纤维素阴离子交换柱层析法纯化多糖最优工艺条件:上样量10 m L、4 m L/管收集。经蒸馏水,0.1、0.2、0.3 mol·L-1Na Cl洗脱后得率分别为16.1%、7.2%、4.5%、2.3%。     

西伯利亚杏SRAP-PCR反应体系的优化研究

以西伯利亚杏为试验材料,进行基因组DNA的提取、扩增及电泳试验。通过L16(45)正交试验,确定西伯利亚杏SRAP-PCR优化反应体系(反应体系总体积20μL):Mg2+2.0 mmol·L-1、dNTPs0.25 mmol·L-1、引物浓度1.2μmol·L-1、Taq聚合酶1.0 U、DNA模板20 ng。采用SRAP引物组合ME5/EM10,对优化的SRAP-PCR反应体系进行初步验证,24个西伯利亚杏无性系SRAP分子标记试验共扩增出谱带431条,引物扩增出23条谱带,其中338条为多态性谱带,多态百分率为78.42%。     

HPLC法测定赤芍、返魂草、黄芪、丹参和苍术不同部位的含量

目的:测定赤芍、返魂草、黄芪、丹参和苍术不同部位的含量。方法:采用HPLC法,色谱柱为AGILENT ZORBAX SB-C18(250mm×4.6mm,5μm)。检测芍药苷的流动相为甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(40:65),波长为230 nm;检测金丝桃苷的流动相为乙腈-0.2%醋酸溶液(18:82),波长为360 nm;检测毛蕊异黄酮葡萄糖苷的流动相为乙腈-水溶液(30:70);波长为260 nm;检测黄芪甲苷的流动相为乙腈-水溶液(32:68),蒸发光检测法;检测丹参酮IIA的流动相为甲醇-水溶液(75:25),波长为270 mn;检测丹酚酸B的流动相为甲醇-乙腈-甲酸-水(30:10:1:59),波长为286nm;检测苍术素的流动相为甲醇-水(79:21),波长为340nm。结果:赤芍中芍药苷的含量符合标准,为合格品;返魂草叶中金丝桃苷比返魂草茎杆含量大,阿多尼弗林碱含量均符合标准,返魂草叶为合格品;黄芪根中毛蕊异黄酮葡萄糖苷和黄芪甲苷含量均符合标准,为合格品,黄芪叶与茎均不合格;丹参中丹参酮IIA与丹酚酸B含量均符合标准,为合格品;苍术中苍术素含量没有达到药典规定的最低含量。结论:本文采用HPLC检测法是常规、简便的检测方法,测定数据准确,为5种中药材的规范化种植及采摘部位奠定了基础。     

HPLC法同时检测刚竹属竹叶中4种黄酮碳苷的含量

建立了HPLC同时检测竹叶中4种黄酮碳苷(异荭草苷、荭草苷、牡荆苷和异牡荆苷)的方法,并测定了这4种常见的黄酮碳苷在24种刚竹属竹叶的含量,以及早园竹4个季度中黄酮碳苷的含量。采用Inertsil ODS-3色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈/0.5%磷酸水溶液(体积比15∶85)为流动相进行等度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长340 nm。实验结果表明:4种黄酮碳苷的质量浓度在1～300 mg/L范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数均在99%以上,加标回收率(n=3)分别为97.14%、100.53%、93.60%和95.66%,RSD值分别为1.11%、1.45%、1.96%和1.43%;24种刚竹属竹叶中黄酮碳苷含量差异显著,4种黄酮碳苷质量分数的总和在286.14～3 838.79 mg/kg之间,毛金竹最高,为3 838.79 mg/kg;早园竹中4种黄酮碳苷的含量随时间变化差异明显,质量分数的总和在1 371.15～4 367.01 mg/kg之间,其中1月份采摘时总质量分数最高,为4 367.01 mg/kg。HPLC法准确度高,适用于竹叶黄酮碳苷的测定。     

苦竹叶化学成分对细菌及3种肿瘤细胞的抑制活性

【目的】评价苦竹叶提取物及其化学成分对细菌和3种肿瘤细胞的离体抑制生长活性,为竹叶化学成分的开发利用奠定基础。【方法】采用95%乙醇提取和柱色谱分离,从苦竹叶中获得提取物流分及单体化合物;以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌及枯草芽孢杆菌为研究对象,采用抑菌圈法评价苦竹叶提取物各流分及单体化合物的离体抑菌活性;采用 MTT法和小鼠 H22肝癌细胞腹水瘤模型,评价木犀草素－6－C －洋地黄毒糖苷－4'－O －葡萄糖苷的体内外抗肿瘤活性。【结果】苦竹叶乙醇提取物萃取流分中,乙酸乙酯相的离体抑菌作用整体强于石油醚相和正丁醇相,水相抑菌作用不明显。乙酸乙酯相8个流分中 Fr．3的离体抑菌作用最强,在25 mg·mL －1浓度下,对枯草芽孢杆菌的离体抑菌作用最强,24 h抑菌圈直径为21.05 mm。25 mg·mL －1浓度下,单体化合物中从组分 Fr．4中分得的反式香豆酸对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的离体抑菌作用最强,24 h 的抑菌圈直径分别为20.23 mm及18.35 mm。离体试验表明,木犀草素－6－C－洋地黄毒糖苷－4'－O －葡萄糖苷对子宫颈癌 HeLa 细胞、肝癌 HepG2细胞及结肠癌 HT-29细胞具有明显的抑制增殖作用,IC50值分别为592,2058,1712 mg·L －1。5 mg·kg －1和10 mg·kg －1的木犀草素－6－C－洋地黄毒糖苷－4'－O －葡萄糖苷对 H22荷瘤鼠肝肿瘤有体内抑制作用,抑制率分别为2.9%和20.0%。【结论】苦竹叶化学成分具有一定的抑菌及抑制肿瘤增殖活性,在植物源农药及药物的开发利用方面具有一定的潜力。本研究为推进苦竹叶化学成分基础研究和促进苦竹叶资源的综合利用提供了依据。