应用微流路精子分离器优选奶牛性控精子的研究

为奶牛性控精子体外受精提供具有活力的精子,筛选出高效的精子分离方法来提高体外受精效率。将市售的冷冻奶牛性控精液解冻、精子浓度调节为1×107cells/m L后,利用微流路精子分离器(microfluidic sperm sorter,MFSS)分离精子,检测分离后的精液质量并分析精子的线粒体膜电位变化。精液样本通过MFSS分离后,精子活力由35.28%提高到57.24%(P0.05);直线速度由23.91μm/s提高到32.76μm/s(P0.05)。此外,MFSS的C室中精子线粒体相对活性为1.56,显著高于分离前A室(0.28)的(P0.05)。综上结果 ,微流路精子分离器可以分离出既有较高活力又具有高活性的线粒体的奶牛性控精子,精子质量得到较大的改善。     

微流路精子分离器在精子分离及体外受精中的应用原理解析

目前,国外研究者发明一种新的精子分离和体外受精的装置,即MFSS-IVF方法,其解决了常规IVF方法的精子分离时的损伤、多精子入卵、囊胚发育率低等问题。本文从微流路精子分离器(MFSS)结构、分离原理、操作方法和MFSS的应用现状等方面进行综合的概述。     

精子不同筛选处理方法对体外受精效果的影响

为了比较体外受精所用精子的不同筛选及获能处理方法对肉羊体外受精效果的影响,试验采用离心法和上浮法处理精子。结果表明:试验1组、试验2组中,鲜精组受精率分别为(69.6±4.5)%、(68.3±1.7)%,冻精组受精率分别为(68.4±1.9)%、(67.5±2.1)%,均显著高于对照组鲜精组、冻精组受精率[(35.1±1.6)%、(28.3±2.4)%](P0.05)。试验1组、试验2组中,鲜精组卵裂率分别为(65.6±3.5)%、(64.8±4.2)%,冻精组卵裂率分别为(63.6±4.1)%、(62.9±2.8)%,均显著高于对照组鲜精组、冻精组卵裂率[(33.7±4.1)%、(30.1±3.4)%](P0.05)。试验1组、试验2组中,鲜精组囊胚率分别为(36.8±1.6)%、(32.7±3.3)%,冻精组囊胚率分别为(36.1±3.6)%、(31.1±4.2)%,均显著高于对照组鲜精组、冻精组囊胚率[(14.3±2.5)%、(11.6±4.3)%](P0.05)。精子获能诱导剂肝素组体外受精效果显著好于咖啡因组。     

两种不同方法处理牛分离精子对体外受精效果的影响

本试验旨在探讨采用2种不同方法处理牛分离精子对精子活力、浓度及体外受精（IVF）效果的影响。将体外培养成熟卵母细胞随机分为2组,与分别用洗涤法和Percoll法处理牛分离精子进行IVF,并观察处理后各组的精子活率、浓度和IVF后囊胚发育率。结果显示,洗涤法和Percoll法处理后精子活力和IVF后的囊胚发育率均无显著差异,但采用洗涤法处理后分离精子浓度极显著高于Percoll法,可显著提高分离精子利用效率,且方法简便、经济,应优先选择使用。     

精子不同处理方法对牛卵泡卵母细胞体外受精的影响

本研究探讨了不同精子处理方法对南阳黄牛卵泡卵母细胞体外受精效果的影响。试验一,研究三种不同的精子洗涤方法对卵母细胞体外受精的影响,结果表明:上浮法和Percoll密度梯度离心法所得的卵裂率(58.3%,60.6%)均显著高于直接离心洗涤法(47.2%,P<0.05);上浮法所得囊胚发育率(25.9%)显著高于直接离心法(13.3%,P<0.05);上浮法和Percoll法相比,卵裂率和囊胚率均无显著差异。试验二,研究三种受精液对卵母细胞体外受精的影响,结果表明:BO液组和mTyrode’s液组所得的卵裂率(60.1%,59.3%)均显著高于TCM199液组(48.5%,P<0.05);但三组囊胚率(17.8%、19.6%、14.1%)差异不显著(P>0.05)。     

牛体外受精的精子处理方法对受精率和胚胎发育的影响

从屠宰场获得牛的卵巢 ,成熟培养用 TCM1 99 犊牛血清 ;体外受精的精子获能处理 ,以 BO液作为基础液。 BO液 肝素钠为对照组 ,对照组中分别添加 Caffein、Theophelline和 Pentoxifylline3种黄嘌呤诱导体为试验组 ,每组分别处理相同的 3头种公牛冷冻精液。用醋酸 Orcein染色 1 h检查受精精况。结果表明 ,平均受精率试验组均高于对照组 ( P <0 .0 1 ) ;DAY8平均囊胚率 ,Caff、Theo、Pent组分别为 2 0 .4 %、1 9.3 %、2 1 .2 %。 3种黄嘌呤诱导体中以 Pentoxifylline的效果最好     

影响奶牛体外受精胚胎培养效果的胚胎因素

对胚胎因素影响奶牛体外受精胚胎培养效果进行了研究。结果发现,在胚胎因素中,胚胎类型(冻胚和鲜胚)与胚胎发育阶段对胚胎培养效果没有显著影响(P>0.05);冷冻胚胎解冻后停留时间对胚胎培养效果影响极显著(P<0.01);冷冻胚胎解冻后胚胎等级对胚胎培养效果影响显著(P<0.05),解冻后A级胚胎存活率(80%,128/160)、囊胚孵化率(58.75%,94/160)显著高于B级胚胎存活率(59.38%,95/160)和囊胚孵化率(37.5%,60/160)(P<0.05);解冻水浴温度(20℃、30℃)对培养效果有极显著影响(P<0.01)。     

牛体外受精的精子获能方法对受精率和胚胎发育的影响

从屠宰场获得牛卵巢,采取卵母细胞,成熟培养用ＴＣＭ１９９＋犊牛血清;精子获能处理,以ＢＯ液＋肝素钠为基础,三个试验组分别添加咖啡因、蔡碱和已酮可可碱,受精经分别为８１．３％、８３．３％、８８．９％,均显著高于对照组（Ｐ〈０．０１）,三个试验组的囊胚率分别为２０．４％、１９．３％、２１．２％。试验得出以下结论：囊胚率与受经成正比,添加已酮可要碱效果最好。另外组内种公牛成绩也有差异。     

奶牛体外受精效果几种影响因素的研究

文章研究了卵巢的保存温度、保存时间、不同的培养液成分、培养方法等对奶牛体外受精后的卵裂率、囊胚发育率的影响.结果表明①采集的卵巢在37℃保存2h时,卵巢卵母细胞体外受精后的卵裂率(71.3%)和囊胚率(31.4%),与25℃保存组的卵裂率(75%)和囊胚率(30.7%)相比,差异不显著(P＞0.05);但与40℃保存组(55%和15%)和4℃保存组(47.8%和12%)有显著差异(P＜0.05);当卵巢保存6h时,25℃保存组的卵裂率(70.2%)和囊胚率(29.2%)均显著高于37℃保存组(50.9%和13%)(P＜0.05);与40℃保存组(30%和7%)和4℃组(30.1%和8.2%)差异极显著(P＜0.01);但与保存2 h组差异不显著.在25℃温度下,屠宰牛卵巢保存时间达到8h时,卵母细胞的卵裂率和囊胚率显著下降,分别为55%和14%.②作为早期胚胎的培养液,CRlaa的效果好于TCM-199.③50μl微滴组的卵裂率(71%)与微滴100μl组(75%)和500μl组(72%)无显著差异(P＞0.05),但囊胚率(15.8%)显著低于100μl组(32%)(P＜0.05);大体积培养组(2 ml)的卵裂率和囊胚率(55%和14.8%)显著低于100μl组和500μl组(P＜0.05).     

受精液和精子处理方法对水牛卵母细胞体外受精的影响

研究了不同受精液和精子处理方法对沼泽型水牛卵母细胞体外受精卵裂率的影响。结果表明,使用BO液和TALP液对卵裂率没有显著影响（P〉0.05）。Percoll离心法和离心洗涤法对卵母细胞受精卵裂率也没有显著影响（P〉0.05）。     

孕酮对牛精子体外受精及胚胎发育的影响

通过在牛精子获能液中添加不同浓度的孕酮,应用体外培养技术对牛精子体外获能及早期胚胎发育进行了研究。通过对顶体反应、超激活、早期胚胎发育率及其与精子孵育时间对精子活率的观察,筛选出获能液中最适孕酮浓度及其有利于牛早期胚胎发育的最佳浓度。结果表明,单独添加孕酮不能诱导牛精子体外获能;孕酮只能诱导获能精子发生顶体反应,而且有一个剂量依赖关系,以1μg/mL的添加效果最好。当浓度超过1μg/mL、作用时间超过4h时,精子活率下降;获能液中添加孕酮,无论剂量多少,对胚胎体外发育无明显的促进作用。     

获能液及精子密度对牛性控精子体外受精成功率的影响

本实验探讨了不同的精子获能添加物、精子密度、精子获能液对牛性别分离精子体外受精（IVF）的影响。结果表明：受精液中同时添加10μg/mL的肝素与5mmol／L的咖啡因,能促进牛性控精子体外获能与受精。精子密度在1．0×10^6个/mL时其囊胚发育率最高。用BO液和mTyrode’s液对牛性控精子进行获能和受精处理．其受精效果差异不显著（P〉0．05）,但BO液作用时间短对早期胚胎的发育影响较小,比较适合牛性控精子IVF。     

原生质滴对猪精子形态、运动参数及体外受精效果的影响

为研究大白猪精原生质滴精子与正常精子在形态与运动特征上的差异,比较高原生质滴含量精液与正常精液体外受精能力的差异,分析原生质滴精子不可用的原因,本实验随机筛选10份原生质滴含量超过20.00%的大白公猪精液作为高原生质滴含量精液,5份原生质滴含量在5.00%以内的大白公猪精液作为正常精液,高原生质滴含量精液一半用于检测高原生质滴含量精子和正常精子的形态与运动参数,其余用于与正常精液做体外受精效果对比。结果表明：1）在形态特征上,高原生质滴含量精子的头部长度、头部周长以及头部区域都极显著大于正常精子,其中头部周长差异最大;高原生质滴含量精子的尾巴前向性（尾巴STR）显著低于正常精子,而卷尾计数与弯尾计数均显著多于正常精子;在运动参数上,高原生质滴含量精子的曲线路径距离（DCL）与侧摆幅度（ALH）均显著高于正常精子。2）正常精液的受精率为80.00%,卵裂率为71.34%,囊胚率为29.27%,而高原生质滴含量精液的受精率仅有20.00%,卵裂率为9.36%,囊胚率为0.00%。本研究证明原生质滴的滞留会造成精子头部增大、弯卷尾数量增多、尾巴运动前向性下降以及无效运动距离增加,此外还会严重降低精子的受精率、卵裂率以及囊胚率,造成精液的可利用率低。     

不同处理方法对牛卵母细胞体外受精效果的影响

在牛体外受精(IVF)过程中,比较不同浓度的牛卵泡液对其卵母细胞的成熟效果,并将成熟的卵母细胞与不同方法获能的精子进行受精,分析其卵丘细胞在受精前后的脱除对卵裂率及囊胚率的影响。结果表明:添加10%的牛卵泡液(BFF)对卵母细胞的成熟有显著的提高作用(P0.05);卵丘细胞在受精后的脱除效果显著优于受精前的脱除(P0.05);上游法和离心法的精子获能方式对IVF没有显著差异,但离心法略优于上游法。     

绵羊精液不同处理方法对体外受精效果的影响

试验通过开展绵羊低温保存精液和冷冻精液制备精子对体外受精效果影响的研究,旨在探讨制备绵羊IVF优质精液的新方法。结果表明:利用低温保存精液和冷冻精液,分别采用Percoll离心法和上游法制备精子进行体外受精,低温保存精液上游法的卵裂率78.6%显著高于低温保存精液和冷冻精液Percoll离心法和60.2%、62.3%,(P<0.05),极显著高于冷冻精液上游法21.1%,P<0.01;低温保存精液和冷冻精液Percoll离心法组间无显著(P>0.05)差异,但均显著(P<0.05)高于冷冻精液上游法。低温保存绵羊精液可用于制备IVF精子,上游法优于Percoll离心法,可显著提高体外受精效果。     

体外受精不同时间等因素对体外受精效果的影响

本试验对牛体外受精不同时间、不同的培养液成分和培养方法等对奶牛体外受精后的卵裂率、囊胚发育率的影响进行了研究。试验包括:(1)牛体外受精不同时间(8h、20h)对奶牛体外受精后的卵裂率、囊胚发育率的影响;(2)不同的培养液成分对奶牛体外受精早期胚胎发育的影响。研究结果表明:(1)牛体外受精时间20h对奶牛体外受精后的卵裂率(78%)好于体外受精8h组(76%),但囊胚发育率前者不如后者好(20.51%VS23.68%),两者间差异不显著(P0.05)。(2)作为早期胚胎的培养液IVD101、TCM199培养系的卵裂率分别为76%、74%,而囊胚率却分别为22.37%、22.97%,TCM199培养系好于IVD-101,但两者间差异不显著(P0.05)。     

Percoll法处理牛精子对体外受精胚胎发育的影响

牛冷冻精液解冻后,在Ｐｅｒｃｏｌｌ梯度液中４００ｇ离心２４ｍｉｎ有效地获得了５７．８７％±８．０％的精子回收率;对照组上游法精子回收率仅为１５．８７％±１．９％（Ｐ〈０．０５）。Ｐｅｒｃｏｌｌ和上游２种方法分离的精子在受精液中８,１８ｈ后的活率,分别为６０％,１０％和７０％,２０％,２种浓度Ｐｅｒｃｏｌｌ法分离的精子对不同成熟处理的卵母细胞体外受精子（ＩＶＦ）卵裂率的影响,精子最终浓度为２×１０＾     

葡萄糖对牛精子体外获能及体外受精的影响

哺乳动物精子在离开生殖道时,还不具备受精能力,必须在雌性生殖道中经过一段时间的成熟,才获得受精能力,即精子获能,该过程也可在体外适宜的环境中完成,称之为体外获能。在这个过程中,葡萄糖是重要的能源物质,并且获能过程中的葡萄糖对随后的胚胎发育也有很大影响。Francoise U     

钙离子载体对牛精子体外受精及胚胎发育的影响

在牛精子获能液中添加不同浓度的钙离子载体,应用体外培养技术对牛精子体外获能及早期胚胎发育作了研究。通过对顶体反应、超激活、活率和早期胚胎发育率的观察,筛选出获能液中最适的钙离子载体浓度,作用时间及其有利于早期胚胎发育的最佳浓度。结果表明:钙离子载体在诱导牛精子获能上存在一个浓度-时间阈值,其最佳浓度和时间组合是0.1μM处理2min或者0.15μM处理0.5min,此时的囊胚率最高;钙离子载体的添加不能诱导牛精子获能的发生。