高剂量高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒TJM-F92疫苗株对低剂量猪瘟兔化弱毒株的免疫干扰研究

为研究高剂量高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJM-F92疫苗株对低剂量猪瘟病毒(CSFV)C株是否存在免疫干扰作用,本研究对不同方式免疫动物从体液免疫水平、免疫攻毒保护水平及病理学变化等方面进行免疫干扰评价。结果表明,高剂量PRRSV TJM-F92疫苗株与低剂量CSFV C株联合免疫组CSFV抗体水平与低剂量CSFV C株单独免疫对照组CSFV抗体水平无显著差异,联合免疫组中高剂量PRRSV TJM-F92株未抑制低剂量CSFV C株抗体生成;攻击CSFV石门血毒后,联合免疫组与低剂量CSFV C株单独免疫对照组均未出现猪瘟临床症状,组织器官病理变化轻微,两组免疫组均可对CSFV石门系血毒攻击产生良好的保护效果。阴性对照组实验动物均表现出猪瘟明显临床症状并全部死亡。本研究表明,高剂量PRRSV TJM-F92株对低剂量CSFV C株无免疫干扰作用。本研究为PRRSV免疫防制措施的制定提供了实验依据。     

高剂量高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒TJM-F92疫苗株对低剂量伪狂犬病毒Bartha-K61疫苗株的免疫干扰研究

为研究高剂量高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)TJM-F92疫苗株对低剂量伪狂犬病毒(PRV)Bartha-K61疫苗株是否存在免疫干扰作用,本研究对其从体液免疫水平、免疫攻毒保护水平及病理学变化等方面进行评价。结果表明,二联免疫组抗体消长规律与低剂量PRV Bartha-K61株免疫对照组抗体消长规律相一致,二联免疫组中高剂量PRRSV TJM-F92株未抑制低剂量PRV Bartha-K61株抗体生成;二联免疫组与低剂量PRV Bartha-K61免疫对照组对PRV JL1株强毒攻击保护率均为5/5;免疫病理学研究结果表明,两组免疫组攻击PRV JL1株强毒后各组织器官病理变化轻微;二联免疫组与低剂量PRV Bartha-K61免疫对照组均可对PRV强毒攻击产生良好的保护效果。综上,高剂量PRRSV TJM-F92株对低剂量PRV Bartha-K61株无免疫干扰作用。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株、高致病性株与疫苗株TJM-F92RT-PCR鉴别方法的建立

根据GenBank公布的猪繁殖与呼吸综合征病毒经典株（LP-PRRSV CH-1a）、高致病性株（HPPRRSV TJ）及疫苗株（HP-PRRSV TJM-F92）的Nsp2基因核苷酸序列,设计2对特异性引物1st和2nd,建立鉴别LP-PRRSV、HP-PRRSV与HP-PRRSV TJM-F92的RT-PCR检测方法。用引物1st对LPPRRSV、HP-PRRSV与HP-PRRSV TJM-F92进行RT-PCR扩增,分别扩增587、497和497 bp的特异性片段;用引物2nd对HP-PRRSV与HP-PRRSV TJM-F92进行RT-PCR扩增,分别扩增1 004和644 bp的特异性片段,结合两步RT-PCR扩增结果可达到区分3者的目的;对RT-PCR的特异性、敏感性、重复性进行评价。结果表明,建立的RT-PCR检测方法具有特异性强、敏感性高、重复性好的特点,可用于LP-PRRSV、HP-PRRSV与HP-PRRSV TJM-F92的鉴别诊断。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗(TJM-F92株)安全性调查及有效性和干扰性试验

为了解我国高致病性猪繁殖与呼吸综合征弱毒疫苗(TJM-F92株)的安全性、有效性,以便进一步优化免疫程序,利用ELISA抗体检测与现场跟踪调查的方法,进行了弱毒疫苗(TJM-F92株)安全性调查及有效性和干扰性试验。结果显示:弱毒疫苗(TJM-F92株)对母猪的采食量、体温、返情率及死胎与木乃伊胎数量均无影响,免疫后各阶段猪群的免疫抗体均达到了合格水平;弱毒疫苗(TJM-F92株)与猪瘟疫苗(脾苗)同时免疫,两种疫病的抗体水平均表现正常,与分开免疫无明显差异。结果表明,弱毒疫苗(TJM-F92株)具有良好的安全性和有效性,普免不会使母猪出现不良反应,对各阶段猪群都有良好的保护性,同时可与猪瘟脾苗联合免疫。因此,猪场可以按程序对各阶段猪群开展弱毒疫苗(TJM-F92株)免疫,同时可以尝试与猪瘟疫苗同时免疫,以优化猪场免疫程序,节省人力,减少应激。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(TJM-F92株)临床免疫效果的研究

为评价高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(TJM-F92株)的临床免疫效果,分别选择PRRS阴性猪场、PRRS免疫阳性猪场和PRRS野毒感染猪场进行免疫接种研究,接种剂量分别为1头份和2头份,接种后观察猪群临床症状,监测抗体水平并抽取部分仔猪进行攻毒试验。结果表明:PRRS阴性猪场和PRRS免疫阳性猪场接种TJM-F92株疫苗后,仔猪保育阶段成活率、育肥阶段成活率、出栏率及母猪窝产健活仔数与未免疫猪比较无明显差异,仔猪免疫后第28天攻毒保护率均为80%。PRRS野毒感染猪场接种疫苗后仔猪保育阶段成活率、育肥阶段成活率、出栏率及母猪窝产健活仔数均明显提高。说明高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(TJM-F92株)具有较好的临床保护效果。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(TJM-F92株)微载体悬浮培养疫苗比较研究

为了改进高致病性猪繁殖与呼吸综合征(HP-PRRS)疫苗培养工艺,对HP-PRRSV微载体悬浮培养(TJM-F92株)活疫苗的抗原生产工艺、疫苗的安全性及免疫效力等方面进行研究,并与转瓶培养工艺进行比较。结果表明:微载体悬浮培养工艺生产HP-PRRSV(TJM-F92株)优于转瓶培养工艺,其病毒含量比转瓶培养工艺高约10倍,且批间差异小;HP-PRRSV微载体悬浮工艺活疫苗(TJM-F92株)安全性与转瓶培养工艺活疫苗相比无显著差异,均安全;4批活疫苗细菌、支原体、外源病毒检测合格,病毒含量、真空度和剩余水分均符合标准,但免疫效力明显优于转瓶培养工艺活疫苗。说明从疫苗工业化生产及产品质量控制方面来衡量,微载体悬浮培养工艺比转瓶培养工艺更具有优势。     

TJM-F92株弱毒疫苗免疫效果评估

<正>猪高致病性蓝耳病是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在编码Nsp2的基因上发生缺失的变异毒株引起的一种急性、高致死性传染病,病毒致病力强,传播速度快,猪群发病率和死亡率高。母猪感染后发生流产、死胎、弱胎等,流产率可达30%以上;仔猪感染后表现为呼吸困难、败血症等症状,发病率可达100%,死亡率可达50%以上。该病在临床上较难控制,对养猪业危害极大。近几年,针对高致病性蓝耳病的控制方法,国内外专家各持己见,但     

高致病性猪蓝耳病TJM-F92株弱毒疫苗对猪瘟、口蹄疫免疫抗体水平的影响

为探讨高致病性猪蓝耳病弱毒疫苗是否干扰猪瘟、口蹄疫疫苗的免疫效果,优化猪瘟、高致病性猪蓝耳病、口蹄疫免疫程序,科学指导动物疫病防控工作,笔者于2014年10月8日—11月12日在河南省正阳县某种猪场进行了高致病性猪蓝耳病TJM-F92株弱毒疫苗对猪瘟、口蹄疫免疫抗体水平的影响试验。结果表明:高致病性猪蓝耳病(TJM-F92株)弱毒疫苗对猪瘟兔化弱毒疫苗(ST传代细胞苗)、猪口蹄疫O型灭活疫苗(OZK/93株)免疫抗体水平无显著影响,三种疫苗单独或联合免疫效果都较确实。     

一株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒变异毒株的基因组特征

为了监测我国近年来流行的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的变异情况,采用RT-PCR分段扩增,对2009年从山东发病猪场分离到的1株PRRSV SD0901的全基因组进行了序列测定和分析.结果表明,不包括Poly(A)尾,该毒株的基因组全长为15 320 nt;与高致病性PRRSV毒株间的全基因组核苷酸相似性为98.6％～98.7％;该毒株基因组的Nsp2编码区除存在与高致病性毒株相同的30个氨基酸的不连续缺失外,还存在468位的氨基酸缺失和在585-586位间插入1个氨基酸,同时,该毒株的结构蛋白GP2、GP3、GP4和M编码区分别存在1个氨基酸的突变.演化分析表明,该毒株尽管与高致病性毒株属于同一亚群,但形成一个独立的小分支.由此表明,该毒株为高致病性PRRSV的变异毒株,说明我国的高致病性PRRSV在流行过程中已出现变异.笔者的研究结果为监测和分析我国的高致病性PRRSV的变异与演化提供了有价值的基因组信息数据.     

2株猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株对仔猪致病性的比较

为了比较最新分离的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异分离株SY0608和传统毒株S1对仔猪的致病性,本研究选择9头30日龄商品仔猪,随机分为2组,分别接种2株病毒,即S1株感染组(n=5头),SY0608株感染组(n=4头),接种后隔离饲养观察2周。经临床症状观察、病理学、病原学和血常规学检查,结果:SY0608毒株感染组仔猪表现明显临床症状,接种3 d后体温急剧升高至41.8℃;白细胞数急剧减少(降低了45%);病理学变化严重,肺泡膈增宽,大部分肺组织肺泡不张;而S1株感染组仔猪仅出现轻微临床症状和病理变化。SY0608毒株感染组仔猪病毒血症持续时间较S1毒株感染组长,病毒在脏器中的分布更为广泛。SY0608株感染组血清ELISA抗体水平明显高于S1株感染组。结果表明,SY0608毒株对仔猪致病作用明显强于S1毒株。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒弱毒疫苗株作为外源基因表达活病毒载体的研究

利用反向遗传操作技术,猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）也可以被用作外源基因表达的活载体。前期研究将猪瘟病毒E2蛋白的编码基因插入了高致病性PRRSV弱毒疫苗株HuN4-F112的非结构蛋白和结构蛋白编码间区,所拯救的重组病毒rPRRSV-E2能够在体外和体内高效表达E2蛋白。能够为猪瘟和HP-PRRS的感染提供100%的免疫保护。本研究利用rPRRSV-E2的全长感染性克隆平台,在PRRSV基因组ORF7和3’非翻译区之间插入了转录调控序列6(TRS6)和绿色荧光蛋白的编码基因,构建并拯救了重组病毒rPRRSV-E2-EGFP,该病毒感染MARC-145细胞后,可以同时表达猪瘟E2蛋白和EGFP。外源序列在载体中能够保持遗传稳定。本研究为开发PRRSV作为病毒活载体疫苗提供了一个新的外源基因插入位点和构建策略,对今后多价疫苗的研发有重要意义。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒四川变异株致病性分析

为探究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)四川变异株SC2012和SC2012-2人工感染仔猪的病理学特征及其在组织内的分布情况,本研究将HP-PRRSV SC2012和SC2012-2株接种健康断奶仔猪,观察不同发病阶段仔猪的临床症状;感染后第14 d剖检仔猪观察其器官病变情况、组织切片的病理学变化,通过免疫组化方法(IHC)和RT-PCR方法检测PRRSV在组织中的分布情况。结果显示,两组仔猪感染后均未出现显著的呼吸症状,并于感染后3 d~5 d出现轻微腹泻;体温测定结果显示,两组仔猪均出现轻度发热、病毒血症,但SC2012-2组较SC2012组仔猪出现时间提前、病毒滴度高、维持时间长;两组仔猪均能够通过唾液、粪便、鼻分泌物排毒;剖检仔猪肺脏均出现不同程度的间质性肺炎,肝脏表现为肝淤血,其它多个器官均有不同程度的炎性细胞浸润;临床症状和病理损伤等结果表明,SC2012较SC2012-2株毒力弱。组织内病毒分布结果显示,两株病毒均在多个器官中分布,但结合组织病理变化分析显示病毒的分布并不一定导致组织损伤,HP-PRRSV四川变异株的突变对其毒力产生了一定的影响。本研究为进一步对HP-PRRSV SC2012和SC2012-2的研究提供必需参数。     

建立快速区分猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株、高致病性毒株、天津疫苗株RT-PCR方法的研究

为了快速区分猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)经典毒株、高致病性毒株和天津疫苗株,试验通过建立的RT-PCR方法获得电泳条带大小不同的PCR产物,以此区分猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株、高致病性毒株和天津疫苗株,并用RT-PCR方法检测实验室保存的12份临床阳性样品。结果表明:可以通过RT-PCR方法区分经典毒株、高致病性毒株、天津疫苗株,并且与猪瘟病毒、猪圆环病毒2型等猪常见病毒无交叉反应;临床样品检测试验显示,1份为经典毒株、5份为高致病性毒株、5份为天津疫苗株,与测序结果相符。说明试验成功建立了同时区分猪繁殖与呼吸综合征病毒经典毒株、高致病性毒株和天津疫苗株的RT-PCR方法,且特异性强、灵敏度较高、重复性好、操作简单。     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒HuN4株致弱毒株特异性抗原表位的鉴定

通过对高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（Highly Pathogenic Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virtls,Hp-PRRSV）HuN4株亲本毒及其不同代次传代毒株Nsp2（Nonstnduralprotein2）蛋白氨基酸序列比较分析,发现不同代次的Nsp2蛋白存在4处氨基酸点突变,针对每个突变点分别人工合成编码短肽的核苷酸序列,经原核表达后进行Western blot分析。结果表明表达的融合蛋白F65-11（^749KGEPvsdqpak^759）能够特异性的与HuN4-F40、HuN4-F65和HuN4-F112感染猪的血清发生反应,而与HuN4 F5感染猪的阳性血清和CH-1a株阳性血清不发生反应,证实第4个氨基酸点突变（S754）处存在一个免疫优势抗原表位。将该表位肽段由N端和C端逐步缩短继续鉴定,当N端缩短到第5个氨基酸（^754SDQPAK^759）C端缩短到第3个氨基酸（^749KGEPVSDQ^757）时,表达的融合蛋白不能与PRRSV阳性血清反应,最终推测该抗原表位必需氨基酸为^753VSDQ^756。选取GenBank中提交的部分高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的Nsp2氨基酸序列,对该表位氨基酸所在位置进行序列比较,分析结果显示位于Nsp2蛋白749→759位氨基酸序列高度保守,F65—11变异位点C^754→7^754为HuN4株系列传代毒株所特有。本研究结果证实抗原表位F65—11可以作为鉴别HuN4-F112弱毒疫苗所诱导产生的特异性抗体的候选抗原。     

天津株(TJM-F92)高致病性猪繁殖与呼吸综合征活疫苗免疫后病毒血症和抗体消长规律的试验报告

<正>高致病性猪繁殖与呼吸综合征(HP-PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒变异株引起的一种急性高致死性疫病。发病主要特征为怀孕母猪流产、早产、木乃伊胎等,母猪流产率可达30%以上;仔猪出现严重的呼吸道症状,感染率可达100%,死亡率在50%以上[2-3]。目前我国使用的高致病性猪繁殖与呼吸综合征疫苗均为活疫苗,据报道活疫苗免疫后可在动物体内复制并持续存在。为摸清高致     

2株高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒分子特征分析

为进一步掌握黔西南州猪繁殖与呼吸综合征病毒（porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV）流行变异趋势,对2株高致病性PRRSV（HR-PRRSV）贵州分离株GZLPS、GZSB进行Nsp2与GP5基因克隆和测序,并分析毒株分子变异特征。结果显示,2株分离株Nsp2基因有90个核苷酸不连续缺失,不同位置的36个核苷酸发生突变;GP5基因存在不同位点置换。同源性比对与系统进化树分析显示,2株分离株Nsp2与GP5基因与HP-PRRSV JXA1株及贵州省2011年以前流行毒株的核苷酸同源性在96%以上,氨基酸同源性在95%以上,但在分子变异上存在差异。结果表明黔西南州PRRSV变异方式已呈多样性。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒分离株的致病性研究

为了解PRRSV安徽分离株的致病性,用从安徽省某发病猪场的病死仔猪组织中分离到的SCH07毒株接种40日龄健康仔猪,对其进行临床症状、病理剖检、病理组织学观察及抗体检测,结果表明：该毒株能引起仔猪高热、呼吸困难等明显临床症状和肺脏、淋巴结肿大、出血等剖检变化,病理组织学观察可见显著的间质性肺炎等病变,攻毒后第7天试验组仔猪血清中首次检测到抗体,并有一头在第15天死亡,证实安徽省已经出现临床高致病性PRRSV毒株。     

新疆阿克苏地区猪繁殖与呼吸综合征病毒毒株致病性分析

本文选择新疆阿克苏地区猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）发病猪为研究对象,对分离株进行病毒分离、基因序列分析等工作,对8个PRRSV毒株NSP2基因序列的测定和比较,找出病毒的变异区。研究结果显示：XJNJ-1-1、XJNJ-1-3、XJNJ-6-2和XJNJ-6-3毒株为PRRS高致病性毒株,XJNJ-7-1、XJNJ-7-2、XJNJ-10-2和XJNJ-15-3毒株为低致病性毒株。说明新疆阿克苏既存在PRRS高致病性毒株,也存在PRRS低致病性毒株。     

猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(TJM-F92株)临床安全性试验报告

为安全有效地控制高致病性猪蓝耳病,由北京健翔和牧生物科技有限公司研发生产的猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(TJM-F92株),经过小试,中试阶段,效果良好.为确保疫苗的安全性,公司委托湖南省畜牧水产局组织实施的猪繁殖与呼吸综合征活疫苗(TJM-F92株)临床安全性试验由我县承担,经过长达一年时间的试验,结果显示,该疫苗有较强...     

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒F株的分离鉴定

2012年2月,潍坊某猪场疑似发生高致病性猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)。病猪主要表现为呼吸困难,耳朵发绀,皮肤有弥漫性出血点;剖检发现淋巴结、肺脏出血严重。从病死仔猪脾、肺、淋巴结和脑组织中分离得到病毒。将该毒株在Marc-145细胞上盲传3代出现典型细胞病变,F3代病毒滴度为106.5TCID50/mL。RT-PCR检测结果显示,猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性。用F3代毒株进行动物回归试验,结果符合高致病性PRRSV致病特征。上述结果证明该猪场发生的传染病为高致病性PRRS,并且利用Marc-145细胞成功分离到高致病性PRRSV,命名为F株。本研究为高致病性PRRSV致病特点及其疫苗研制提供物质基础。