延边黄牛FABP4基因组织表达及基因多态性分析

为了解FABP4基因在延边黄牛各组织中的表达特征,深入探讨FABP4基因在肌内脂肪沉积中的作用以及该基因是否可以作为延边黄牛肉质性状的候选基因。本研究运用实时荧光定量PCR方法检测延边黄牛不同组织FABP4基因的表达水平及其与肌内脂肪沉积的相关性;同时运用直接测序和PCR-RFLP技术对FABP4基因的SNPs位点进行检测,并与延边黄牛肉质性状进行相关性分析。结果显示FABP4基因在延边黄牛肾脏、肺脏、心脏、脾脏、肝脏、后腿肌及背最长肌中均有表达,其中心脏中的表达量最高,肾脏中的表达量最低。在心脏中的表达量极显著高于脾脏、后腿肌、肺脏、肝脏、肾脏组织(P0.01)。背最长肌中FABP4基因表达量与肌内脂肪(IMF)含量呈极显著正相关(P0.01),相关系数为0.994。后腿肌组织中FABP4基因表达量与IMF含量呈显著正相关(P0.05),相关系数为0.952。在FABP4基因中存在呈现中度多态的g.3691 GA位点,该位点GG基因型的水分含量显著高于GA和AA基因型,GA基因型的脂肪含量显著高于GG和AA基因型,GG和AA基因型的蛋白含量显著高于GA基因型。研究结果提示,FABP4基因参与延边黄牛肌内脂肪沉积调控,可以作为延边黄牛肉质性状的候选基因。     

新疆也木勒白羊MSTN基因在不同组织中的表达定量研究

通过实时荧光定量也木勒白羊MSTN基因在不同组织(心、肝、脾、肺、肠、肾、尾脂、半膜、半键、股二、股三、背最长肌)表达量的多少,分析MSTN基因在不同组织的表达规律,为也木勒白羊肌肉生长性状的选育提供遗传学资料。结果表明:也木勒白羊MSTN基因在肌肉半膜、半键、股二、股三的表达量显著高于其他各组织(P0.05),背最长肌表达量显著高于各内脏组织和尾脂(P0.05),尾脂、肝、脾、肠、肾中表达量显著低于其他各组织(P0.05),内脏组织中肺的表达量最高,心居于第二,其余各内脏组织表达量均差异不显著(P0.05)。说明MSTN基因在12种组织中均有表达,但在内脏和尾脂中的表达量低于肌肉组织。     

不同发育阶段延边黄牛阉牛背最长肌差异表达基因的筛选

应用引物退火控制技术(ACP)筛选8月龄和30月龄延边黄牛阉牛背最长肌差异表达基因,寻找与延边黄牛生长发育相关的候选基因。相同饲养条件下,分别检测3头8月龄和30月龄延边黄牛阉牛背最长肌组织的m RNA表达水平变化。利用20对随机引物差异显示扩增,共获得9条ESTs。对Telethonin、MYH7、MSTN、Camk2d和SPP1基因进行荧光定量PCR检测。结果表明:MYH7、MSTN和SPP1基因在8月龄阉牛组背最长肌中的表达量显著高于30月龄(P0.05);Telethonin和Camk2d在30月龄阉牛背最长肌中的表达量显著高于8月龄(P0.05)。结果提示,这些基因可能是影响延边黄牛生长及肉质性状的重要调控基因。     

山羊FTO基因克隆及其表达谱

本研究旨在阐明山羊FTO基因的表达特性,并分析其表达与肌内脂肪沉积的相关性。以简州大耳羊为试验动物,采用RT-PCR方法克隆FTO基因,利用实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测其组织表达差异,同时检测该基因在不同发育阶段不同部位山羊肌肉组织中的表达水平,并与IMF含量进行相关分析。结果表明,山羊FTO基因CDS区为1 518bp,编码505个氨基酸,为无跨膜结构的非分泌蛋白。FTO mRNA在山羊的脂肪、脾和肺中表达水平较高(P0.01),在背最长肌中表达最低;FTO蛋白在背最长肌和脾中表达较高(P0.01),脂肪组织中表达次之。同时结果显示,FTO mRNA在24月龄山羊背最长肌和股二头肌中表达水平显著高于1~3和8~10月龄的表达水平(P0.05)。FTO mRNA表达量与背最长肌IMF含量呈显著负相关(P0.05),与股二头肌及臂三头肌IMF含量呈不同程度的正相关。本研究指出,FTO基因表达与IMF含量存在相关性,推测可作为IMF沉积的候选基因。     

不同月龄红河黄牛抗病基因组织mRNA表达量分析

为了解天然抗性相关巨噬细胞蛋白1基因(SLC11A1)、Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)、γ-干扰素基因(BoIFN-γ)、α-干扰素基因(BoIFN-α)和主要组织相容性复合物Ⅱ类基因DRB3(BoLA-DRB3)6种抗病相关基因,在红河黄牛不同组织的表达分布情况,根据GenBank收录的基因序列设计特异性引物,以β-actin基因为内部参照基因,应用RT-qPCR技术测定12、36、60月龄公牛不同组织的mRNA表达量。结果表明,SLC11A1、TLR2、TLR4、BoIFN-γ、BoIFN-α和BoLA-DRB3基因在心、肝、脾、肺、肾、淋巴结和背最长肌组织中表达量存在月龄组间差异(P0.05),TLR2基因在肾组织表达量为36月龄最高,但在其他各组织表达量均为60月龄最高;TLR4基因在各组织中表达量均为36月龄最高;SLC11A1基因在36月龄黄牛心、肝、脾和淋巴结表达量最高,在肺、肾和背最长肌组织表达量60月龄最高;BoLA-DRB3基因在淋巴结组织表达量36月龄和60月龄均较高;BoIFN-α基因的组织表达模式类似SLC11A1;BoIFN-γ基因在肾和淋巴结表达量36月龄和60月龄最高。由此可见,6种基因在不同组织最高表达量出现于36～60月龄。     

PCK1基因在延黄牛不同部位脂肪组织和内脏中的表达分析

试验旨在阐明延黄牛PCK1基因在不同脂肪组织与内脏器官的表达水平,探讨PCK1基因表达与脂肪沉积的关系。以延黄牛皮下脂肪和背最长肌及其他内脏器官为材料,采用实时荧光定量PCR和Western blot方法,对PCK1mRNA和蛋白质水平在延黄牛脂肪组织和内脏器官中的分布规律进行分析。实时荧光定量PCR结果表明,PCK1基因在肾脏、皮下脂肪和腹部脂肪中的表达量均显著高于背最长肌和其他内脏器官(P0.05),在肾脏中的表达量显著高于皮下脂肪和腹部脂肪(P0.05),在腹部脂肪中的表达量显著高于皮下脂肪(P0.05);而在背最长肌、肺、心脏、小肠和肝脏中表达差异不显著。Western blot结果表明,在腹部脂肪中PCK1蛋白的表达量显著高于皮下脂肪(P0.05)。研究结果可为进一步探讨脂肪沉积机制及优化延黄牛肉品品质奠定基础。     

延边黄牛PRKAG3基因的表达量与肉质性状的相关性分析

实验选取100头6月龄延边黄牛,采用RT-PCR方法检测延边黄牛PRKAG3基因在不同部位肌肉和不同器官中的表达量差异,进行PRKAG3基因表达量与肉质性状的相关性分析。结果表明:PRKAG3基因在背最长肌的表达量最高,且表达量随着体重的增加而增加,在600 kg时的表达量显著高于300、400、500 kg时的表达量(P0.05);PRKAG3基因在心脏中的表达量显著高于肝、脾、肺、肾中的表达量(P0.05);与胴体性状间的相关性分析显示,PRKAG3基因的表达量与屠宰率呈负相关,与眼肌面积和大理石花纹呈正相关,与背膘厚相关性不大;与肉质性状间的相关性分析显示,PRKAG3基因的表达量与pH、亮度、红色度、黄色度呈负相关,与系水力、嫩度、蒸煮损失、彩色度、色相角呈正相关。由此可见,PRKAG3基因可以作为提高肉质性状的候选基因。     

SCD和PPAR_γ基因在延边黄牛血液中的表达及其与IMF及TG含量的关系

为了研究脂肪代谢相关基因表达在不同肉质性状延边黄牛血液中的差异,试验选择20头延边黄牛按照高档牛肉生产模式统一饲养管理,根据它们的大理石花纹等级高低分为H组和L组。应用RT-PCR方法测定延边黄牛血液中硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)和过氧化氢酶体激活增殖受体γ(PPARγ)基因的表达丰度,另外分析了背最长肌肌内脂肪(IMF)和三酰甘油(TG)含量。结果表明:H组IMF和TG含量极显著和显著高于L组(P0.01和P0.05),H组个体血液中SCD和PPARγ表达丰度呈现出高于L组的趋势。IMF和TG含量随着大理石花纹等级的增加呈现上升趋势,SCD和PPARγ基因均可在血液中表达,并且延边黄牛血液中SCD和PPARγ基因表达水平随背最长肌IMF和TG含量的升高呈现增加的趋势。     

荧光定量RT-PCR检测滩羊H-FABP基因表达规律及与肌内脂肪相关性研究

为了研究心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)基因在滩羊不同时期不同部位表达量,分析其与肌内脂肪(IMF)含量的关系,试验建立了检测滩羊H-FABP mRNA表达水平的实时荧光定量RT-PCR方法,并采用该方法对2,4,6,9,12月龄滩羊(各20只,雌雄各半)的背最长肌、腰大肌和股二头肌的肌肉组织H-FABP mRNA表达水平进行了检测,还测定了三个部位肌肉组织IMF的含量。结果表明:性别与活重、胴体重、IMF、H-FABP mRNA背部肌肉表达量和股部肌肉表达量差异均不显著(P≥0.05)。不同月龄、不同部位H-FABP基因的表达水平总体上呈上升-下降-上升的趋势,且2月龄表达量最高(P0.01)。三个部位IMF沉积规律基本相同,在生长前期随着月龄的增长其IMF含量呈上升趋势,6月龄左右上升明显,表达量为腰大肌﹥股二头肌﹥背最长肌。月龄与活重、胴体重和股部表达量差异极显著(P≤0.01),但与IMF、背部和腰部表达量差异不显著(P≥0.05)。2月龄滩羊背最长肌中H-FABP基因表达量与IMF含量相关系数为0.104(P=0.327),呈正相关;股二头肌H-FABP基因表达量与IMF相关系数为0.773(P0.01),呈强度正相关;腰大肌2~12月龄期间HFABP基因表达量与IMF含量呈正相关,相关系数为0.125。说明H-FABP基因在不同组织中表达量不同,股二头肌中的表达量最高,腰大肌次之,再次为背最长肌,且腰大肌的表达量仅次于股二头肌。     

贵州黑山羊不同肌肉组织FASN基因表达与肌内脂肪含量相关性分析

为探究FASN基因在贵州黑山羊不同肌肉组织中调控脂肪沉积的作用，采集12月龄公、母贵州黑山羊胸肌、背最长肌、肱三头肌、臂股二头肌，运用实时荧光定量PCR法（qPCR）检测FASN基因表达量，酸水解法测定肌内脂肪（IMF）含量，并通过Pearson分析FASN基因表达量与IMF含量相关性。结果显示，FASN基因在公、母羊不同组织中表达量均为臂股二头肌>胸肌>肱三头肌>背最长肌，其中公羊臂股二头肌显著高于背最长肌，母羊臂股二头肌极显著高于背最长肌；相同组织比较，母羊胸肌、肱三头肌、臂股二头肌表达量均高于公羊，背最长肌表达量低于公羊，但均未达到差异显著水平。IMF含量测定发现，公、母羊4个组织中IMF含量均为臂股二头肌>胸肌>肱三头肌≥背最长肌，同性别各组织之间比较差异不显著；相同组织比较，母羊4个组织中IMF含量均高于公羊。FASN基因表达量与IMF含量相关性分析表明，公、母羊FASN基因表达量与胸肌IMF含量呈正相关，与背最长肌、肱三头肌、臂股二头肌IMF含量呈负相关。     

山羊CCRL2基因的分子克隆和表达分析

本研究旨在克隆山羊趋化因子(C-C基序)受体2(chemokine(C C motif)receptor-like 2,CCRL2)基因序列,并研究其组织和时序表达谱。以简州大耳羊为试验材料,应用RT-PCR方法克隆CCRL2基因并进行生物信息学分析,qPCR方法构建该基因在山羊不同组织表达谱和不同月龄背最长肌、股二头肌和臂三头肌中的表达水平,并将基因表达与IMF含量进行相关分析。结果显示:克隆得到山羊CCRL2基因(GenBank登录号:KT165378)长度为1 143bp,编码区长度为1 047bp;qPCR分析表明,CCRL2mRNA在24月龄山羊心、肝、脾、肺、肾、脂肪、背最长肌、股二头肌和臂三头肌中均有不同程度的表达,其中脾表达量最高(P<0.01);时序表达中,CCRL2基因在股二头肌和臂三头肌中的表达量均在8~10月龄极显著高于1~3和24月龄(P<0.01),在背最长肌中则为24月龄极显著高于1~3和8~10月龄(P<0.01);相关分析显示,股二头肌中CCRL2基因mRNA表达量与IMF含量呈极显著负相关(P<0.01)。CCRL2基因可能参与山羊IMF沉积作用。     

急性冷应激对绵羊免疫功能和不同组织热休克蛋白70家族基因表达的影响

旨在研究急性冷应激对绵羊免疫功能和不同组织热休克蛋白70(HSP70)家族基因表达的影响。本研究选取8只健康、体况接近的(12±0.5)月龄小尾寒羊×湖羊杂交F_1母羊,单笼饲养于保温舍内(风寒温度(-7.14±2.53)℃),适应7 d。第8天将母羊移置舍外(风寒温度(-27.40±3.12)℃)急性冷应激12 h,采集冷应激前后试验个体血样和组织样。利用ELISA法测定血清免疫指标(细胞因子和免疫球蛋白G含量),通过实时荧光定量PCR法测定不同组织(肝、肾、脾、心、背最长肌和十二指肠)HSP70家族基因(HSPA1A、HSPA6和HSPA8)和热休克转录因子1基因(HSF1)的表达量。结果显示:1)与冷应激前相比,冷应激后试验羊血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-2(IL-2)和白细胞介素-6(IL-6)浓度显著升高(P0.05);血清白细胞介素-4(IL-4)和免疫球蛋白G(IgG)浓度显著下降(P0.05)。2)冷应激后,试验羊HSPA1A mRNA表达量在肝、肾、心和背最长肌中显著升高(P0.05);HSPA6 mRNA表达量在心和背最长肌中显著升高(P0.05);HSPA8 mRNA表达量在背最长肌中显著升高(P0.05),在脾和十二指肠中显著下降(P0.05);HSF1 mRNA表达量在肝、心和背最长肌中显著升高(P0.05),在脾和十二指肠中显著下降(P0.05)。在本试验条件下,急性冷应激能抑制绵羊的免疫功能;HSP70家族基因(HSPA1A、HSPA6和HSPA8)在各组织中的表达水平不同,其中HSPA1A对温度更敏感,宜作为绵羊冷应激的生物标记物;肝、心和背最长肌等组织中HSP70家族基因表达量升高可能与其保护组织细胞维持正常产热有关。     

HSL和PPARγ基因在湘西黄牛不同组织中的发育性表达

比较分析HSL和PPARγ基因在湘西黄牛不同组织中的发育性表达规律,以探讨HSL和PPARγ基因与湘西黄牛脂肪酸代谢的关系。利用实时荧光定量PCR技术检测HSL和PPARγ基因在6,18,30月龄湘西黄牛的肝脏、肌肉组织(背最长肌)、脂肪组织(皮下脂肪和腹腔脂肪)中mRNA的相对表达量。结果表明:HSL基因在湘西黄牛肝脏、背最长肌、皮下脂肪和腹腔脂肪的4个部位中的表达量随月龄增长依次极显著减少(P0.01),而PPARγ基因正好相反。6月龄时,肝脏中HSL基因的表达量显著高于其他3个组织(P0.05),PPARγ基因皮下脂肪表达量显著高于肝脏(P0.05); 18月龄时,HSL基因在4个组织中的表达量按大小关系依次为肝脏≈背最长肌皮下脂肪腹腔脂肪; PPARγ基因在4个组织中的表达量按大小关系依次为皮下脂肪肝脏≈腹腔脂肪背最长肌; 30月龄时,HSL基因在4个组织中的表达量按大小关系依次为肝脏背最长肌皮下脂肪≈腹腔脂肪; PPARγ基因在4个组织间的表达呈现两两差异显著(P0.05),其表达量依次为肝脏皮下脂肪腹腔脂肪背最长肌。30月龄的粗脂肪(EE)含量和饱和脂肪酸(SFA)含量显著高于6月龄和18月龄的(P0.05),18月龄和30月龄湘西黄牛肉多不饱和脂肪酸(PUFA)含量显著高于6月龄的(P0.05); 30月龄时单不饱和脂肪酸(MUFA)的含量较高,但显著低于18月龄的(P0.05)。由此可见,HSL和PPARγ基因在湘西黄牛不同部位脂肪组织和肌肉组织中均有表达且随月龄与部位的不同表达不同,存在月龄和组织差异性,且二者的表达规律呈负相关。在动物生产应用中,建议湘西黄牛在30月龄左右再屠宰食用,口感及营养价值更好。     

IGF-1基因在滩羊不同部位肌肉组织中表达研究

本研究利用实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)分析IGF-1基因在滩羊不同部位肌肉组织样本(背最长肌、后腿肌、尾脂)中的表达水平.结果表明,滩羊背最长肌、尾脂的IGF-1基因表达量显著高于后腿肌(P＜0.05),背最长肌与尾脂间的IGF-1基因表达量差异不显著(P＞...     

绵羊FAM134B、PPARγ、HSL和FAS基因表达量及与肌内脂肪含量的关系

旨在探究FAM134B、PPARγ、FAS和HSL基因在绵羊肌肉发育过程中的组织表达规律及其与肌内脂肪(Intramuscular fat,IMF)含量的关系,以期为研究绵羊IMF沉积的分子调控机制奠定理论基础。试验选取2、4、5、6和12月龄敖汉细毛羊公羊各5只,屠宰,采集背最长肌和股二头肌测定其IMF含量,应用实时荧光定量PCR技术检测PPARγ、FAM134B、FAS和HSL基因在肌肉不同发育时期的mRNA表达量,并对基因表达量之间及表达量与IMF含量的关系进行分析。结果表明:(1)2~5月龄时,背最长肌和股二头肌的IMF含量均随着月龄的增加而增加;而5~12月龄时则基本保持不变;同月龄背最长肌IMF含量极显著高于股二头肌(P0.01)。(2)背最长肌中FAM134B表达量呈上升-下降趋势,6月龄最高(P0.01);股二头肌中FAM134B表达量呈先上升后稳定趋势。FAS基因在两部位肌肉中表达量均呈上升趋势。PPARγ基因在两部位肌肉中表达量均呈下降-上升趋势。HSL基因在两部位肌肉中表达量均呈下降-上升-下降趋势。同月龄目的基因表达量在两部位肌肉中均表现出明显的差异。(3)关联分析显示,两部位肌肉中FAM134B与FAS表达量均呈显著正相关(P0.05),与PPARγ、HSL表达量呈不同程度负相关。背最长肌中,FAM134B、FAS表达量与IMF含量呈极显著或显著正相关(P0.01,P0.05),PPARγ表达量与IMF含量显著负相关(P0.05);股二头肌中,FAM134B表达量与IMF含量显著正相关(P0.05)。综上,FAM134B、FAS可能会促进IMF的沉积,而PPARγ、HSL对IMF的沉积可能具有抑制作用;FAM134B可能通过刺激脂肪合成基因的表达,而抑制脂肪分解基因的表达来调控IMF的含量。结果可为进一步解析相关基因的功能和调控IMF沉积的分子机制提供参考。     

猪脂肪沉积相关酶基因表达与胴体及肉质性状的相关性研究

为系统筛选对贵州地方猪脂肪沉积具有影响的相关酶基因,本实验以雄性野猪和雌性柯乐猪的F₁代杂交猪作为研究对象,采用qRT-PCR方法检测猪背最长肌和皮下脂肪组织PPARγ、LPL、ACC、ATGL基因的mRNA表达水平,并通过Pearson方法分析背最长肌和皮下脂肪组织4个基因mRNA表达水平与胴体及肉质性状间的相关性。结果表明:在背最长肌和皮下脂肪组织中相对表达量最高的为ACC和PPARγ基因。关联分析得出,背最长肌组织中LPL与PPARγ、ACC基因表达量呈显著正相关,皮下脂肪组织中PPARγ与ACC基因间呈显著正相关;在野柯F₁代猪背最长肌组织中PPARγ、LPL基因表达量均与肌肉水分呈显著负相关;在皮下脂肪组织中LPL基因表达量与皮厚间呈显著负相关。本研究结果可进一步印证脂肪沉积相关酶基因LPL在柯乐猪×野猪F₁代脂肪沉积过程中发挥着重要作用。     

LYRM1与LYRM2基因在白洗猪及其杜白杂交一代不同组织中的表达研究

为探究LYRM1与LYRM2基因在白洗猪及其杂交一代(杜洛克与白洗猪的杂交一代,DBF1)不同组织中的表达水平,寻找白洗猪和DBF1猪脂肪沉积候选基因。本实验以10月龄白洗猪和DBF1猪为研究对象,采用实时荧光定量PCR法对白洗猪和DBF1猪心、肝、脾、肺、肾、胃、皮下脂肪、背最长肌的2个基因相对表达水平进行检测。结果表明:LYRM1与LYRM2基因在白洗猪和DBF1猪的8个组织中均有表达,且表达趋势趋于一致;LYRM1、LYRM2基因在白洗猪与DBF1猪皮下脂肪组织中高表达,在背最长肌低表达;LYRM1基因在白洗猪皮下脂肪组织中的表达高于DBF1猪,LYRM2基因在白洗猪皮下脂肪组织中的表达量显著高于DBF1猪(P0.05)。综上所述,推测LYRM1与LYRM2基因可能为白洗猪和DBF1猪脂肪沉积的候选基因。     

延边黄牛SREBP1和SCD1基因表达的发育性变化及与肌间脂肪含量的关联分析

文章旨在研究延边黄牛不同生长阶段固醇调节元件结合蛋白1(Sterol regulatory ele-ment binding factor 1,SREBP1)和硬脂酰辅酶A去饱和酶1(Stearoyl Co A desaturease 1,SCD1)基因表达的发育性变化与IMF含量的相关性以及这两个基因表达水平的关联性。试验选取12月龄的延边黄牛公牛(去势)8头,利用微量微创活体采样枪(韩国忠北大学提供),分别在12月龄,16月龄,20月龄,采集肌肉组织(臀肌);利用实时荧光定量PCR方法分析SREBP1和SCD1基因在延边黄牛不同生长阶段肌肉组织中的m RNA发育性变化。结果表明:1延边黄牛SREBP1基因相对表达水平在12、16、20月龄具有极其显著差异(P0.01),其中20月龄时SREBP1基因表达量相对最高;SCD1基因相对表达水平在12、16、20月龄具有显著差异(P0.05),其中20月龄时SCD1基因表达量相对最高。2肌肉组织中SREBP1基因的表达量在12~20月龄期间与IMF含量具有正向相关性,相关系数为0.910(P0.05);SCD1基因的表达量在12~20月龄期间与IMF含量具有正向相关性,相关系数为0.934(P0.05)。结果表明,SREBP1和SCD1基因在延边黄牛不同生长阶段存在显著或极显著差异,SREBP1和SCD1基因的协同表达对延边黄牛不同生长阶段肌内脂肪的沉积有一定的正向调控作用。