TGEV和PEDV多重RT-PCR检测方法的建立

<正>传染性胃肠炎病毒(TGEV)引起的传染性胃肠炎(TGE)是猪的一种急性、高度接触性,以呕吐、严重腹泻、脱水和对2周龄以内仔猪高度致死性为主要特征的肠道传染病[1]。TGEV与猪流行性腹泻病毒(PEDV)同属于套式病毒目冠状病毒科冠状病毒属成员,PEDV可引起猪流行性腹泻。不同年龄和不同品种的猪对该病都易感,研究一种快速、敏感、特异、准确的诊断方法,是控制TGE和PED的关键。本试     

生物信息学软件预测猪氨基肽酶N功能与结构

[目的]研究猪δ冠状病毒(PDCoV)入侵宿主细胞的感染机制,对其特异性受体猪氨基肽酶N基因编码蛋白功能与结构进行分析.[方法]通过多种生物信息学软件对pAPN蛋白的理化特性、亲疏水性、信号肽、跨膜区、糖基化位点、抗原表位、功能结构域及结构特征等进行预测分析.[结果]pAPN基因总长为2892 bp,编码963个氨基酸...     

pAPN和NEU3的敲除对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)侵染的影响

氨基肽酶(pAPN)是猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)侵染的主要受体,为了验证pAPN和唾液酸神经氨酸酶(NEU3)双基因对TGEV入侵机制的影响,应用CRISPR-Cas9基因编辑技术,敲除ST细胞的2个基因pAPN和NEU3。经过病毒感染试验,测定敲除2个目标基因pAPN和NEU3的ST细胞,对病毒的侵染变化以及病毒拷贝数的变化和细胞病变改善,同时监测病毒侵染后纤连蛋白的变化。结果表明,与对照组相比,敲除2个目标基因pAPN和NEU3的ST细胞,明显减轻TGEV侵染引起的细胞病变,TGEV的拷贝数也明显出现下降。此外,同样滴度的TGEV侵染pAPN和NEU3双基因敲除ST细胞后,诱导ST细胞的免疫应答物IFN-β的mRNA水平明显低于野生型ST细胞组。pAPN和NEU3双基因的敲除,明显降低了ST细胞中TGEV的拷贝数,同时也减轻病毒引起的细胞病变,结果证实细胞中的pAPN和NEU3双基因可作为将来养猪生产中抗病毒治疗及抗病品种选育的靶基因。     

猪δ冠状病毒致病机制研究进展

猪δ冠状病毒(PDCoV)是引起猪腹泻性疾病的猪肠道主要病毒之一.PDCoV致病机制相关的研究主要集中于入侵细胞、逃逸宿主细胞天然免疫应答、诱导宿主细胞凋亡,以及影响该病毒复制的其他分子机制.目前对其致病机制的了解较少,尚无有效防治该病毒的疫苗和药物.随着相关研究进一步深入,剖析PDCoV编码蛋白结构及其影响PDCoV...     

猪流行性腹泻病毒细胞受体研究进展

猪流行性腹泻病毒主要引起仔猪腹泻,发病率及病死率极高,严重影响养猪业的发展。而猪流行性腹泻病毒要感染仔猪,必须与宿主细胞表面的受体结合。目前已有研究证实,猪流行性腹泻病毒的细胞表面受体为猪氨基肽酶N(pAPN)。为了能更好的揭示pAPN在病毒感染过程中的机制,学者针对pAPN的结构、功能以及与病毒的感染结合区域进行了系统的研究,并开展了筛选pAPN结合短肽的工作,以此来探索病毒受体的阻断剂。为进一步研究猪流行性腹泻病毒感染机制及其细胞受体的作用提供参考,论文就目前pAPN最新研究进展进行了综述。     

猪流行性腹泻与猪传染性胃肠炎二联油乳剂灭活疫苗的田间免疫试验

猪流行性腹泻(PED)和猪传染性胃肠炎(TGE)是猪常见的两种急性、烈性、病毒性腹泻.PED和TGE在我国流行十分广泛,冬春季节年复一年地在猪群中发生,给养猪业造成重大的经济损失.由于猪流行性腹泻病毒(PEDV)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)在病原学、流行病学、临床症状及病理变化等方面都十分相似,只有依靠实验室诊断技术才能区别.而在流行季节,猪群中PED和TGE可以单独发生,亦可混合感染,混合感染率可达30%.因而在腹泻症流行的地区需同时免疫接种PED和TGE疫苗才能有效控制病毒性腹泻的发生与流行.为此我们进行了PED和TGE二联油乳剂灭活疫苗的研究,并进行了免疫试验,现将疫苗的田间试验结果报告如下.     

猪病毒性腹泻症及其防治对策

猪传染性腹泻是一类与卫生状况及饲养管理密切相关的传染病。在养猪发达国家此类疫病已不再是主要问题,但在我国仍然是危害严重的一类传染病。此类传染病的病原主要包括病毒、细菌以及寄生虫。其中,猪病毒性腹泻的发生与流行在近年呈现持续上升的趋势,已成为造成猪场损失的最为重要的原因之一。而在猪病毒性腹泻中危害最大的是猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻以及猪轮状病毒感染。1猪传染性胃肠炎(TGE)与猪流行性腹泻(PED)1.1病原特性TGE与PED的病原分别是猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV),两病毒均属冠状病毒属,从…     

猪传染性胃肠炎及流行性腹泻比较研究

猪传染性胃肠炎（porcinetransmissiblegastroenteritis,TGE）和猪流行性腹泻（porcineepidemicdiarrhoea,PED）分别是由猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的以猪呕吐、腹泻、脱水为特征的传染病。TGE猪传染性胃肠炎对新生仔猪具有高度致死率,虽然不同年龄的猪对这种病毒均易感,但5周龄以上猪的死亡率则很低。     

猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻疫苗病毒培养条件的优化

猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）和猪流行性腹泻病毒（PEDV）是引起猪病毒性腹泻的主要病原。猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联灭活疫苗应用于预防猪传染性胃肠炎（TGE）及猪流行性腹泻（PED）。在疫苗的生产过程中,要将形成良好单层的细胞进行传代,扩大培养后用TGEV和PEDV两种病毒按5%的接毒量分别感染相对应的ST细胞和Vero细胞单层,37℃条件下培养,繁殖病毒,待细胞病变（CPE）达到80％以上时收获含病毒细胞培养液,病毒液的含毒量应不低于10^7.0TCID50／mL。     

集约化猪场病毒性腹泻防制方案

正引起猪群发生腹泻的病毒有流行性腹泻病毒(PED)、传染性胃肠炎病毒(TGE)、轮状病毒(RV)和新出现的德尔塔冠状病毒(PDCoV),在大生产中,一般将上述几种病毒单独或混合感染引起的腹泻统称为病毒性腹泻。病毒性腹泻一般多发于气候寒冷潮湿的冬春季节,目前尚无特     

稳定表达3种猪腹泻病毒嵌合抗原的CHO细胞系构建与鉴定

为构建稳定表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪胃肠炎病毒(TGEV)和猪Delta冠状病毒(PDCoV)主要抗原的CHO细胞系，为猪病毒性腹泻三联疫苗的研发提供基础材料，本研究将PEDV的S基因的COE区域、TGEV和PDCoV的S基因的受体结合区域(RBD),通过同源重组的方式进行融合，克隆到慢病毒表达质粒pLV-EF1a-IRES-Puro中，包装得到重组慢病毒。使用重组慢病毒感染CHO细胞，经过嘌呤霉素和单克隆细胞筛选，基因水平和蛋白水平表达验证，成功构建了稳定表达3种猪腹泻病毒抗原融合蛋白的CHO细胞系，为进一步研制PEDV-TGEV-PDCoV的亚单位疫苗奠定了基础。     

猪病毒性腹泻的种类与综合防制

1种类猪传染性胃肠炎(TGE)是由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)引起的,TGEV属冠状病毒,仅有1个血清型,有囊膜,耐酸不耐热,对脂溶剂敏感。传染源为亚临床感染猪、病后带毒猪,其他宿主,如狗、猫、狐。暴发性流行一般净区首发,传播迅速,全群感染,临床症状不一;地方性流行一般疫区多发,持续不断,发病率低,症状轻。冬、春季易发,1月为高峰;14日龄以下易发,易与大肠杆菌、流行性腹泻病毒、轮状     

避免猪感染PED的途径

猪流行性腹泻(PED)是由冠状病毒引起的,其临床症状类似于传染性肠胃炎。猪是唯一已知的PED病毒的宿主。该病毒通常通过粪便和口传播。病毒也可通过受污染的人员、设备和其他污染物感染易感猪群。急性暴发时,所有年龄组的主要临床症状是水样腹泻、呕吐、食欲不振。发病率接近100%。临床症状的根本原因是病毒在肠上皮细胞、小肠的绒毛上复制,病毒复制随后引起肠上皮细胞变性和坏死,导致肠道损伤不能充分吸收营养和水分。腹泻之后会导致脱水和电解质的损耗。     

猪传染性胃肠炎和流行性腹泻的防治

猪传染性胃肠炎（TGE）是由猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）引起的以猪呕吐、腹泻及脱水为特征的传染病,不同年龄的猪均易感,对新生仔猪具有高度致死率（通常100%）,但5周龄以上猪的死亡率则很低。猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的一种猪肠道传染病,以水泻、呕吐和脱水为特征,各种年龄的猪均易感,     

猪Delta冠状病毒、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒多重PCR检测方法的建立和应用

旨在建立快速准确检测与猪腹泻相关的猪Delta冠状病毒(PDCoV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PRoV)多重PCR检测方法。针对PDCoV、PEDV、TGEV、PRoV的基因组序列设计了4对特异性引物,分别扩增PDCoV N基因(447 bp)、PEDV M基因(204 bp)、TGEV M基因(612 bp)、PRoV VP6基因(329 bp),经过对反应条件的优化,成功建立了能同时特异性检测PDCoV、PEDV、TGEV、PRoV的多重RT-PCR,且特异性好。应用该检测方法对上海及周边地区养殖场临床猪腹泻病料进行检测,结果检出PEDV阳性样品16份,其中PEDV和TGEV混合感染1份,PDCoV和PRoV均未检出,与单一RT-PCR检测结果完全吻合。该快速检测方法的成功建立,将有助于提高对PDCoV、PEDV、TGEV、PRoV的病原学调查和疾病监测,为生态养殖提供技术储备。     

四重荧光qRT-PCR检测猪腹泻相关病毒方法的建立

为建立同时检测猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪delta冠状病毒(Porcinedeltacoronavirus,PDCoV)和猪捷申病毒(Porcine teschovirus,PTV)的四重荧光qRT-PCR检测方法,本研究以PEDV的N基因、TGEV的S基因、PDCoV的M基因和PTV基因组5'非编码基因为检测对象,建立同时检测4种病毒的荧光RT-PCR方法。结果显示,该方法可以特异扩增4种病毒的基因,不能扩增猪呼吸道冠状病毒、伪狂犬病毒、猪瘟病毒、口蹄疫病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型的基因;PEDV、TGEV、PDCoV和PTV的最低核酸检出量分别为141、68、8和11拷贝数;对100份送检样品进行检测,其中PEDV、TGEV、PDCoV和PTV感染检出率分别为10%、6%、2%和55%。结果表明本研究建立的检测方法具有良好的特异性和敏感性,而且操作快速简便,可用于猪腹泻疫病的临床诊断和流行病学调查。     

猪德尔塔病毒H223株的分离鉴定和持续传代及N基因遗传进化分析

从江西某猪场疑似病毒性腹泻的发病猪采集部分小肠内容物样品,应用RT-PCR检测,在排除猪传染性胃肠炎病毒(PEDV)和猪流行性腹泻病毒(TGEV)感染后,检测结果为猪德尔塔病毒(丁型冠状病毒,PDCoV)阳性,将处理后的肠道组织研磨液在ST细胞上进行连续盲传,传至第9代观察到细胞病变(CPE),且普通PCR检测为阳性,目前已连续传代至65代。针对PDCoV编码的N基因设计一对特异性引物,成功克隆了该病毒的N段基因,序列长度为1 248 bp。使用DNA Star和MEGA 7软件对扩增该片段的测序结果进行遗传进化分析,序列同源性分析确证该毒株属于PDCoV,命名为H223。     

猪传染性胃肠炎及流行性腹泻比较研究

猪传染性胃肠炎(porcine transmissible gastroenteritis,TGE)和猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhoea,PED)分别是由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪流行性腹泻病毒(PEDV)引起的以猪呕吐、腹泻、脱水为特征的传染病。TGE猪传染性胃肠炎对新生仔猪具有高度致死率,虽然不同年龄的猪对这种病毒均易感,但5周龄以上猪的死亡率则很低。1945年,Doyle在美国首次报道发生了本病。我国1956年在广东省首次报道,给养猪业带来严重危害。猪流行性腹泻是一种猪肠道传染病,哺乳仔猪受害最严重。本病主要发生在冬季,夏季也可发生。20世纪70年代初首…     

我国集约化猪场新发猪丁型冠状病毒病的诊断

猪丁型冠状病毒(PDCoV)是一种国外新发现的猪腹泻病原,我国广泛存在猪流行性腹泻,但至今未见猪丁型冠状病毒感染的正式报道。2015年7月,在存栏2 000头基础母猪的华南某集约化猪场5至15日龄乳猪发生传播迅速的严重腹泻,发病率90%、死淘率90%以上。经实验室PCR诊断为猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)和轮状病毒(RV)检测均为阴性。用特异性的PDCoV N基因引物经RT-PCR扩增显示为强阳性。在此基础上,对扩增产物进行了基因测序和遗传变异分析,显示该毒株在PDCoV新的遗传分支上,与其他PDCoV有显著区别。本研究首次报道我国出现了猪丁型冠状病毒病的新病例,毒株命名为PDCoV Ch-A。     

猪德尔塔冠状病毒病原学特征与致病机制研究进展

猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）作为最近几年新暴发的冠状病毒之一,虽然检出率和致死率低于猪流行性腹泻病毒（PEDV）,但感染PDCoV的猪场越来越多,对养殖业造成了严重的经济损失。PDCoV的结构蛋白可能起到免疫调节功能,但目前针对PDCoV病毒蛋白如何调控宿主功能,利用宿主机制逃避免疫反应利于自身存活和增殖的研究较少,对PDCoV各结构蛋白在病毒复制和转录中的具体功能尚无深入研究。文章对PDCoV及其致病机制的研究进展进行综述,以期为基于免疫调节病毒蛋白开发疫苗、通过病毒蛋白直接防控疾病提供参考。