猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较试验

目前国内外的猪瘟ELISA抗体检测试剂盒种类繁多,为了给实际使用提供参考依据,用猪瘟病毒阴性、弱阳性、强阳性血清参考品为标尺,比较了14种国内外猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒的符合率。结果表明,6种阻断ELISA试剂盒符合率均可达到100%,在敏感性和特异性上整体优于间接ELISA试剂盒。     

三种猪瘟抗体检测方法比较

猪瘟是养猪场猪的常见病，要解决这一问题，必须坚持对猪场进行经常性的猪瘟免疫监测。目前，我国对猪瘟抗体的测定方法有：中国农科院兰州兽医研究所生产的“液体猪瘟正向间接血凝抗原试剂盒”、中国农科院哈尔滨兽医研究所生产的“猪瘟DOT－ELISA试剂盒”和最近由厦门进出境检验检疫局与厦门大学抗癌研究中心合作研制的猪瘟抗体免疫金标试纸条三种方法。最近，我们分别应用上述方法对采自长泰、龙海地区猪场的１２０头份猪血清进行检测，现报告如下：１材料与方法１．１被检猪血清采自福建省龙海苗圃猪场、长泰联盛猪场、龙海白水猪场…     

两种猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒对疫苗免疫猪血清抗体检测的比较试验

为了比较两种猪瘟病毒抗体检测试剂盒对猪瘟疫苗免疫抗体的检测结果,本试验将27头猪瘟抗体阴性仔猪免疫猪瘟活疫苗后7、10、14、17、20、23、27、30、34 d共9个时间点采血,分别用两种猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒进行抗体检测,同时采用OIE指定方法-荧光抗体病毒中和试验对检测结果进行验证。结果表明,虽然两种试剂盒均可在免疫后30 d 100%检测到免疫猪体内的猪瘟抗体,但国产试剂盒在疫苗免疫后第10天便可在6/21猪体内检测到猪瘟抗体,20 d时抗体检测全为阳性,而美国IDEXX公司的试剂盒在疫苗免疫后27 d才在11/21猪体内检测到猪瘟抗体,30 d时才全部变为阳性,而两种试剂盒对6头阴性对照猪血清连续跟踪检测34 d均为阴性。由此可以得出结论:国产试剂盒在疫苗免疫后的早期抗体检测中敏感性明显高于IDEXX公司的试剂盒。     

PPA-ELISA检测猪瘟抗体方法在江苏省的应用

<正> 猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种高度传染性疾病,死亡率很高,迄今尚无有效的治疗方法。自1980年以来全省改革了防疫制度,全面推行了常年防疫,使猪瘟逐步得到了控制。为了进一步控制和消灭猪瘟,我省25个市、县1985年与农业部签定了《猪瘟、鸡新城疫免疫程序新技术推广》项目,按项目要求,在三年内要控制和消灭猪瘟和鸡新城疫。经过三年努力,25     

ELISA方法在猪瘟抗原抗体检测上的应用

本文总结了猪瘟抗原检测,包括双抗体夹心ELISA、竞争ELISA、抗原捕获ELISA和NASBAELISA,以及猪瘟抗体检测方法,包括间接ELISA、竞争ELISA、液相阻断ELISA和斑点ELISA方面的研究进展。     

两种检测试剂盒对猪瘟抗体水平检测结果的比较

选择一种由中国兽医药品监察所研制的国产试剂盒与美国IDEXX公司的进口试剂盒对300份猪血清同时进行检测,结果显示,两种试剂盒的符合率为83.67%;国产试剂盒检出的阳性率高于进口试剂盒;对检测结果不一致的49份血清用荧光抗体病毒中和试验(FVNT)进行了复核,国产试剂盒与FVNT的符合率为63.2%,进口试剂盒与FVNT的符合率为31.6%。试验结果表明,国产试剂盒具有更高的敏感性,能满足我国猪瘟抗体监测的需要。     

猪瘟抗体胶体金快速定量检测卡的研制

应用胶体金免疫层析技术,结合胶体金定量读数仪研制出一种快速定量检测猪血清中猪瘟抗体水平的检测卡。该检测卡以胶体金标记高灵敏的猪瘟重组E2蛋白,同时在NC膜上包被同一蛋白,经正交实验确定最适条件,同时通过与对照线的颜色对比,应用胶体金定量读数仪,可对样本中猪瘟抗体水平进行定量。该检测卡检测方法简便、快速、稳定性好。与猪圆环病毒病、猪伪狂犬病、猪繁殖与呼吸综合征等常见猪疫病抗体均无交叉反应。检测71份猪血清样本结果与ELISA结果的符合率达90.1%。结果表明,实验研制的猪瘟抗体胶体金快速定量检测卡可用于基层兽医站和养殖企业的检测。     

ELISA法检测猪瘟抗体消长规律的试验研究

本试验采用间接ELISA方法,检测猪瘟(CSF)常规免疫仔猪的CSF抗体水平。试验分A、B两组,A组首免注射4头份猪瘟兔化弱毒疫苗,B组首免注射2头份猪瘟兔化弱毒疫苗;二免两组均注射2头份猪瘟兔化弱毒疫苗。试验结果表明,注射疫苗后10d,开始产生抗体,20d-30d抗体达到峰值,二免后抗体峰值维持40d以上。首免4头份的仔猪比首免2头份的仔猪CSF抗体峰值出现的早,维持时间长。     

猪瘟病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及优化

以原核表达、纯化的猪瘟病毒(CSFV)E2主要抗原区蛋白为目标检测物,通过对各反应条件的筛选和优化,建立了检测CSFV抗体的间接ELISA检测方法。结果表明,本研究的最佳抗原包被浓度和最佳血清稀释度分别为1.0 μg/mL和1:200;最佳抗原包被条件和最佳封闭时间均为37 ℃ 1 h;最佳酶标二抗稀释度和作用时间分别为1:10 000和37 ℃ 45 min;阴性临界值判断标准为当D450nm<0.30时猪血清样品为CSFV抗体阴性;批内和批间重复试验变异系数分别为4.8%和6.9%,表明该检测方法具有较高的稳定性;特异性试验结果表明,间接ELISA方法与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV)、猪细小病毒(PPV)阳性血清均无交叉反应;应用该间接ELISA方法随机检测80份猪血清样品,与进口阻断ELISA试剂盒相比其阳性符合率为83.58%,阴性符合率为76.92%,总体符合率为80.25%。结果表明本试验建立的间接ELISA方法具有很好的临床应用价值。     

三种猪瘟抗体检测方法比较试验研究

为了选择一种方便、准确、经济的猪瘟检测方法,本文通过对猪瘟正向间接血凝法、Dot-ELISA法和免疫金标试纸检测法进行比较试验,其结果依次是:阳性率为90%、86.7%和80%,三者试验结果基本相同,经方差分析,差异不显著(P0.05),检测实验结果可靠。猪瘟抗体金标试纸检测法具有结果直观、操作方便、反映时间短等优势,非常适合我市小型养猪场和散养户,可以及时检测猪瘟免疫状况,制定适合本场(户)的个性化免疫程序,预防猪瘟的发生。     

2020年新疆部分地区猪瘟病毒抗体检测及分析

为了解2020年新疆部分地区规模化猪场的猪瘟病毒（CSFV）抗体水平,本试验应用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）,对采自18个规模化猪场的1 085份血清样品进行猪瘟病毒抗体检测。结果显示,CSFV抗体平均合格率为83.59%（907/1 085）,高于国家规定标准（70%）,平均阻断率为（66.99±25.09）%。A、B、C、D、E地区间猪瘟病毒抗体水平差异显著（P<0.05）。各规模猪场猪群抗体合格率在70%~87%之间,并且差异显著。此次检测结果表明,6个不同地区平均抗体合格率中,A、B、C、F地区抗体水平整齐度良好,E地区抗体水平偏低,变异系数偏大,抗体整体水平较差。大型规模养猪场猪瘟抗体合格率普遍高于中、小型规模养猪场,说明大型规模养猪场在猪瘟的防控方面具有一定优势。该结果可为新疆地区规模化猪场的猪瘟免疫防控提供参考。     

应用HRP—SPA—ELISA检测猪瘟病毒抗体的试验研究

应用猪瘟兔化弱毒PEG沉淀抗原、HRP—SPA建立了HRP—SPA—ELISA检测猪瘟病毒抗体的方法。通过对5份阴性血清和32头仔猪注苗前及注苗后不同时期256份系列血清的检测以及阻断试验,证明本法具有较高的敏感性和特异性。猪瘟抗体ELISA效价与兔体中和试验效价比较,二者呈显著的正相关(r=0.8072)。对32头仔猪系列血清的检测结果表明,免疫母猪(配种前45d左右注苗)所生的30～40日龄未注苗仔猪的母源抗体水平不很高,有1/3在阴性范围内,注苗后15d,ELISA抗体开始上升,90d达峰值;90～120d大部分猪的抗体水平迅速下跌到略高于60d时的抗体水平上,保持稳定约2个月左右,但也有一少部分猪90d后抗体水平下跌缓慢,一直保持相当高的水平。     

猪瘟抗体三种检测方法的比较试验

对猪瘟兔化弱毒疫苗免疫母猪所生的仔猪,在接种疫苗前、后采集1116份血清样本,同时用HRP—SPA—ELISA、IHA和ID等三种方法进行比较检测,三种方法的阳性率分别为100％、90.77％和69.59％.     

以重组mE2蛋白为抗原建立检测猪瘟病毒抗体间接ELISA方法 …

以在Ｅ．ｃｌｏｉ高效表达的猪瘟病毒Ｅ２基因主要抗原编码区为抗原,以辣根过氧化物酶标记的兔抗猪ＩｇＧ为二抗,建立了检测猪瘟病毒抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法。经检测筛选出最佳反应条件为;１．２μｇ／孔纯化的Ｅ．ｃｏｌｉ表达的ｍＥ２重组蛋白包被酶标板,用１０％的兔血清或马血清进行封闭,以正常Ｅ．ｃｏｌｉ裂解上清液稀释待检血清。     

检测猪瘟病毒E0抗体ELISA方法的建立与应用

E0蛋白是猪瘟病毒(CSFV)重要的结构蛋白之一,能刺激机体产生中和性保护抗体,同时也是作为鉴别诊断的标识之一.本研究通过RT-PCR扩增得到石门株E0基因,构建了重组质粒pET-28a-E0,原核表达E0目的蛋白后鉴定了其免疫反应性.将纯化后的目的蛋白进行梯度稀释,建立了 ELISA检测方法,优化反应条件如下:最佳蛋...     

猪瘟病毒抗体ELISA检测国家级能力验证结果与分析

猪瘟疫苗免疫是我国猪瘟防控的核心,猪瘟病毒抗体ELISA检测是进行免疫效果评价的最常用手段。中国兽医药品监察所国家/OIE猪瘟参考实验室（以下简称：参考实验室）承担了国家认证认可监督管理委员会（以下简称“认监委”）组织的A类能力验证项目“猪瘟诊断检测技术”（CNCA-19-A01）,全面考察和评价我国动物疫病检测机构对猪瘟病毒抗体的检测能力。参考实验室负责制备检测样品,并进行随机编号。向每个参试实验室发放4份待检盲样,由其采用ELISA方法对各盲样进行定性判断,并向参考实验室提供检验结果及原始检验报告。出现“不满意”结果的单位可参加补测1次,若补测结果仍为“不满意”,则表明该实验室暂不具备该参数的检测能力。参加本次能力验证猪瘟病毒抗体检测的实验室共有103家,初测满意率为92.23%,初测和补测的总体满意率为100%。此次能力验证结果表明,参加此次能力比对试验的猪瘟检测机构均能够提供正确的检测结果,可以满足猪瘟病毒抗体监测的需求。通过本次能力验证项目查找出了存在的问题,参试单位可以及时纠正错误,进一步提升猪瘟抗体的检测能力。     

猪瘟病毒间接ELISA抗体检测试剂盒的临床应用研究

采用猪瘟病毒间接ELISA抗体检测试剂盒对5省/市的猪血清样本进行检测,并与进口ELISA试剂盒相比较,同时采用世界动物卫生组织(OIE)指定方法-荧光抗体病毒中和试验对检测结果有差异的血清样本进行验证,结果显示,两种试剂盒对田间临床样本的符合率为78.1%;猪瘟病毒间接ELISA抗体检测试剂盒与荧光抗体病毒中和试验的符合率高于进口ELISA试剂盒;综合免疫背景分析,猪瘟病毒间接ELISA抗体试剂盒的敏感性和特异性均高于进口试剂盒,更适合在我国进行大规模推广应用。