浅谈基层畜牧兽医站实验室常规ELISA检测操作注意事项

介绍了实验室常规ELISA试验的基本原理、操作要领及注意事项,供基层畜牧兽医站工作人员参考.     

兽医实验室酶联免疫吸附试验操作要点

酶联免疫吸附试验(ELISA)是兽医实验室常用检测方法,具有灵敏度高、特异性强以及操作简便等特点。为了刚好地使用ELISA方法进行疫情检测以及疫病诊断,本文总结了常见ELISA试验各个操作步骤的注意事项,为广大实验员提供获得更准确有效的实验结果提供参考。     

浅析实验室常规ELISA检测

ELISA即酶联免疫吸附试验,ELISA是一种敏感性高、重复性好的固相酶联免疫测定广泛用于各种抗原抗体的检测,本文介绍了实验室常规ELISA试验的基本原理、操作要领及注意事项,供基层畜牧兽医站工作人员参考.     

使用ELISA试剂盒应该注意的问题

酶联免疫试剂盒是较普遍常用的药物残留检测方法,与仪器分析技术相比具有快速、简便、准确和灵敏度高等特点,但对实验操作条件的要求比较严格.实验条件主要由实验室的操作环境和操作人员的操作熟练程度两方面组成.但EIJSA试剂盒对实验室操作环境的要求是儿种药物残留检测方法中相对较低的.由于大部分的试验操作步骤都是由实验人员来完成的,人为的误差相对严重一些.本人结合几年的工作实践介绍一下进行ELISA操作的时候应该注意的问题.     

ELISA和DIA对猪囊虫病诊断的比较

应用ELISA和DIA两种方法,采用同一抗原,同一结合物,对956份猪血清进行了猪囊虫病的检测对比试验。结果,DIA和ELISA的特异性分别为99.57％与98.88％,敏感性分别为98.39％和97.18％,无明显差异。但在抗体滴度、操作时间、抗体消长规律、诊断液的用量等方面,DIA明显优于ELISA。     

ELISA方法在猪瘟抗原抗体检测上的应用

本文总结了猪瘟抗原检测,包括双抗体夹心ELISA、竞争ELISA、抗原捕获ELISA和NASBAELISA,以及猪瘟抗体检测方法,包括间接ELISA、竞争ELISA、液相阻断ELISA和斑点ELISA方面的研究进展。     

四种方法检测羊副结核病的比较

本文首次在国内对羊副结核病进行ELISA检测,并与皮内变态反应(DTH)、补体结合反应(CF)和琼脂扩散试验(AGID)进行比较。对1869只羊的检测结果表明,ELISA、、CFAGID和DTH的检出率分别为10.8%、、6.6%4.1%和4.9%。以ELISA的检出率为最高。ELISA可以替代CF和AGID。AGID操作简单方便,尚有一定的实用价值。ELISA和DTH结合检测,可提高羊副结核病的检出率。     

确定ELISA试验阳性临界值的探讨

固相免疫酶技术建立二十多年来，在血清学和病原诊断研究中应用广泛。围绕ELISA不能深入发展的主要问题之一是至今结果判定尚无统一标准，直接影响其敏感性和特异性。在ELISA具体操作中，确定临界值随机性很大，受主观因素影响较大，易造成试验判定出现偏差。ELISA操作中存在的误差有三：技术误差，操作误差和统计误差。技术误差主要指抗原抗体间的非特异交叉反应，及抗原抗体的纯度、效价和使用浓度等。操作误差主要指试验器材处理方式和加样准确性，显色反应是结果判定是否准确的关键。在诸试验条件一致情况下，co值还受当时的温度…     

3种口蹄疫O型抗体检测试剂盒对疫苗免疫牛血清抗体检测的比较试验

为了提供检测结果准确且操作便捷的试剂盒,本试验应用两种商品化试剂盒和本实验室研制的一种基于合成肽包被抗原的间接ELISA试剂盒同时对口蹄疫疫苗免疫后14、21和28 d的150份免疫牛血清进行口蹄疫O型抗体水平的检测,并对3种试剂盒测定结果的符合程度、重复性和便捷性进行了比较。试验结果表明3种试剂盒测得的抗体水平检测结果之间高度符合,且3种试剂盒各自的检测结果重复性良好,基于合成肽包被抗原的间接ELISA试剂盒在操作便捷性方面优势明显。     

单克隆抗体直接ELISA法检测家蚕微孢子虫

本文报道的是将辣根过氧化物酶(HRP)直接标记于单克隆抗体上进行直接ELISA法检测家蚕微孢子虫,实验结果表明:直接ELISA法比间接ELISA法检测家蚕微孢子虫其灵敏度和特异性二者差异不大,但直接ELISA法操作简单,是实用性较强的一种检测家蚕微孢子虫的方法。     

间接ELISA在猪瘟抗体检测上的应用

间接ELISA以其灵敏、特异、简单、快速、稳定、高通量及易于操作等优点,在猪瘟免疫猪群抗体水平监测、猪瘟的快速诊断与流行病学调查中得到了广泛应用,显示出了良好的应用前景。论文就间接ELISA方法及其在猪瘟诊断上的应用概况做一综述,以期为我国猪瘟的综合防控提供参考。     

ELISA三联诊断试剂盒应用于猪弓形虫病的调查

1978—1981年期间,我县部分地区曾流行猪弓形虫病,为掌握该病流行情况,我们采用了省医学研究院寄生虫病研究所提供的ELISA 三联诊断试剂盒,对曾发生过猪弓形虫病流行的疫区和一些假定非疫区,作了血清流行病学调查,并对 E LISA 操作的有关技术因素进行了探讨,通过实践应用,证明ELISA 三联诊断试剂盒可以作为猪弓形虫病流行病学调查及疾病的监测,现将结果报告如下。     

浅析口蹄疫阻断ELISA试验中易出现的问题及其纠正措施

口蹄疫是高度接触性传染性疾病,传播迅速,可形成大流行,对养殖业和国际畜产品贸易具有严重影响。目前基层实验室对其检测常采用阻断ELISA的方法,该法灵敏度高且费用低,但对试验要求较高,易导致试验不成立。本文主要从实验人员、设备和操作过程三个方面分析、总结ELISA中易出现的问题,并提出预防措施,以便引起实验室管理者和操作人员的注意,避免出现类似错误,以提高ELISA试验的准确率。     

吸附ELISA检测奶牛副结核病

应用吸附ELISA对2批澳大利亚及1批新西兰进口奶牛进行副结核病的检测,结果2头阳性反应,其余为阴性反应。特异性试验和重复性试验表明吸附ELISA在进口奶牛副结核病的检测中,结果准确、特异性高、重复性好,且具有快速、灵敏、操作简单的特点,适合应用于大批量样品副结核病的检测。     

液相阻断EUSA实验操作应注意的节点

液相阻断ELISA实验操作虽然繁琐，时问较长（一般16—24h内出结果），但该方法的敏感性好，特异性高和可重复性均优于其他方法，而且无须使用活毒，避免了散毒的危险，也摆脱了对细胞培养和动物实验的依赖，目前是检测病毒抗体的国际标准方法，也是国际贸易指定检测方法之一。     

鸭瘟病毒间接ELISA方法的建立

通过SPF鸡胚进行鸭瘟病毒培养和增殖,采用反复冻融后离心-0.22μm滤膜过滤-差速离心-蔗糖密度梯度离心法(sucrose-density-gradient-centrifugation,SDGC),纯化后病毒粒子作为ELISA包被抗原,从而建立了鸭瘟病毒间接酶联免疫吸附试验(ELISA)。经对不同血清样品的检测,表明此方法具有操作简便、敏感性高、特异性好的优点,特别适用于大批鸭群的抗体检测和流行病学调查,为合理免疫和疫病预防提供有效的技术手段。     

口蹄疫病毒抗体SA-ELISA快速检测方法的建立

旨在解决如何对现有方法进行优化创新以建立口蹄疫抗体检测新方法的问题，本研究在基于原有液相阻断ELISA的基础上进行方法优化，实现口蹄疫病毒抗体的快速、灵敏检测。本研究通过对抗口蹄疫IgG抗体标记生物素技术与HRP标记链霉亲和素(HRP-SA)相结合建立新的液相阻断ELISA检测方法(SA-LPBE),在猪，牛、羊血清样品中具有较高的符合率。结合实际情况，判定优化后牛、羊血清抗体效价≥128,猪血清效价≥64时，判定为阳性，与商用检测试剂盒结果一致。并且经符合率分析，与原试剂盒具有92.3%的符合率，其批内变异系数<5%,批间变异系数<10%。该方法改变了原有的需要制备兔抗豚鼠抗血清再标记HRP技术路线，根本上提高了酶促反应的效率，保证了方法原有敏感性的同时提高了方法的特异性；利用生物素标记抗体与HRP-SA反应迅速、标记原料稳定、检测背景值等优点实现了将液相阻断ELISA试剂盒操作时间由2 d缩短为3 h,解决了原有方法操作繁琐、用时过长、操作疲劳、不稳定、易出错等问题。建立的SA-LPBE可应用于FMDV抗体检测，为FMD流行和临床检测提供了技术方法。     

皮试法与ELISA法在奶牛结核病检测中的对比试验

通过单纯颈部皮内变态反应(SICT)、比较变态反应(SICCT)检测方法、γ-干扰素ELISA和ELISA 4种方法,同时检测上海2个奶牛场的222头奶牛。结果发现:阳性检出率以颈部皮内变态反应为最高(67.6%)、ELISA(44.1%)和γ-干扰素ELISA居中(31.1%),比较变态反应最低(13.1%);单纯的颈部皮内变态反应与2种ELISA的符合率较差,而比较变态反应与2种ELISA具有较好的符合率;在变态反应阴性牛中,仍然检出了部分ELISA阳性牛。由此认为,先以变态反应检疫牛群,再随之实施抗体检测,会更有利于结核病牛场的净化与防制。     

应用间接ELISA检测鸡痘病毒抗体方法的建立

建立了检测鸡痘病毒抗体的间接ELISA方法。应用该方法检测鸡痘阳性血清，其灵敏度为琼脂扩散试验的400～800倍，而且还具有特异性强、操作简便、快速等特点。     

兽医实验室酶联免疫吸附试验操作要点

1样品的基本知识主要介绍样品采集、处理以及保存的知识,ELISA测定样品很多,如血清、尿液、唾液、排泄物等。部分样品可直接开展ELISA检测,比如血清;而部分样品则需要经过预处理,比如粪便。兽医实验室一般根据常规方式采集样品,禽类采心脏、翅静脉血的方式;猪采前腔静脉等处血;羊采颈静脉血;牛采颈静脉、尾静脉血。将血清分离时,避免出现溶血°现阶段,ELISA试剂盒多数使用的辣根过氧化物酶作为标记,红细胞溶解就会释放出较多的过氧化酶活性物质,在ELISA检测中,溶血会造成非特异性显色,导致假阳性,最后很难得到精确的检测结果。