一株对TMV和PVY具有拮抗活性生防菌的筛选与鉴定

【目的】筛选对烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus,TMV）和马铃薯Y病毒（Potato virus Y,PVY)具有显著拮抗活性的菌株。【方法】从山东诸城等植烟区采集烟草病毒病高发区健康烟株中烟100（Nicotiana tabacum var. Zhongyan 100）的根际土壤,分离抗TMV的活性菌株,通过生理生化测定和分子鉴定确定菌株。采用Real-time PCR技术定量检测该菌株对TMV和PVY的抑制作用进一步验证该菌株的抗病毒活性。田间试验进行3个处理,菌液与病毒混合,2 h后接种（I）,喷菌液2 h后接种病毒汁液（II）,接种病毒汁液2 h后喷施菌液（III）,以8%宁南霉素和肥皂水分别与等体积病毒汁液混合为阳性对照,以LB培养基与病毒汁液混合为空白对照。利用菌株发酵液对剪刀上病毒的钝化作用进行验证试验。【结果】筛选到的菌株通过枯斑寄主半叶法显示其对TMV的抑制效果达98%以上,命名为4A1,分子鉴定结果显示该菌株16S rDNA序列与Pseudomonas monteilii的16s rDNA序列同源率达到99%;菌株4A1为革兰氏阴性,氧化酶、淀粉水解VP、吲哚等反应为阴性,明胶液化、葡萄糖反应为阳性,能运动,确定该菌株为蒙氏假单胞菌（P. monteilii）。Real-time PCR检测结果显示其发酵液对TMV、PVY具有显著的抑制活性。田间试验结果显示,处理I可有效降低大部分病毒侵染,TMV和PVY发病率分别为5.3%和7.7%,病情指数分别为0.8和2.9;处理II可显著减少TMV和PVY的侵染几率,发病率分别为33.3%和36.7%,病情指数分别为4.2和6.0;处理III烟株发病率为95.0%和92.0%,病情指数为24.5和20.1;CK组TMV、PVY发病率分别为99.3%和95.4%,病情指数为别为38.6和45.1。菌株对剪叶工具的处理,钝化病毒效果可达95%以上,防效显著高于其它处理。【结论】在烟叶生产上,该菌株可以作为生产工具的生物消毒剂和抗病毒剂。     

荧光假单胞菌CZ对TMV的抑制作用及其活性蛋白的分离纯化

从烟草根际中分离到一株拮抗烟草花叶病毒(TMV)的生防菌荧光假单胞菌CZ,将其发酵液接种或喷施TMV寄主三生NN烟后进行生物学检测.结果表明:荧光假单胞菌CZ发酵液与TMV混合后接种,其枯斑抑制率为91.5％;接种TMV的前、后24h喷施CZ发酵液,对TMV的抑制率分别为78.9％和30.5％.荧光假单胞菌CZ发酵液经硫酸铵盐析获得活性粗蛋白,经阴离子层析、superdex-G-75凝胶层析和SDS- PAGE检测,分子量为39.4 kD.     

具有解钾活性假单胞菌的分离与鉴定

[目的]分离并鉴定具有解钾活性假单胞菌。[方法]以农田土壤为样本,在钾长石粉为唯一钾源的选择性培养基上分离并纯化解钾菌,并通过形态观察和16S r DNA序列分析对分离到的细菌进行鉴定。[结果]经梯度稀释涂布和平板划线分离,经初筛获得8株生长良好并具有解钾透明圈的细菌。将初筛后获得的细菌菌株进行发酵培养,利用原子吸收分光光度法测定发酵上清液中的速效钾含量,从中筛选出解钾能力较强的1株假单胞菌K3。通过形态观察发现,该菌株为革兰氏阴性杆菌。16S r DNA序列分析结果表明,该菌株与荧光假单胞菌F113亲缘关系最近,初步确定该菌株属假单胞菌属。[结论]该研究为微生物钾肥的开发提供了新的试材。     

复合诱变选育恶臭假单胞菌高产菌株的研究

以恶臭假单胞菌Pseudononas putida野生株Ps—FLAG01为出发菌株．经超声波（US）一硫酸二乙酯（DES）复合诱变后．筛选出一高产菌株Ps—FLAG05．其总酶活力为0．3253u／mL．比出发菌株提高25．89％；对其发酵培养基配方进行了优化．最佳配方为：玉米浆1．0％．葡萄糖3．5％．氯化钠0．15％．诱导剂4．5％．与原配方相比．发酵水平提高了13．03％．     

抗烟草花叶病毒活性放线菌的初步筛选和鉴定

为筛选对烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)具有拮抗活性的放线菌,以烤烟Coker 176、K326为材料,采用生物活性测试和半叶枯斑法,测定47株放线菌菌株发酵上清液抗TMV的活性,对具活性的菌株进行分子鉴定和系统发育分析。结果表明,6株放线菌的发酵上清液具有一定的抗TMV活性,其中菌株F187、F349、F417发酵上清液对TMV具有明显钝化作用,发酵上清液与TMV作用30 min后抑制率分别为57.18%、60.27%、70.19%;分子鉴定和系统发育分析显示菌株F187、F417、F349均属链霉菌;链霉菌F187、F349、F417的代谢产物对TMV有较高的抑制活性,值得在菌种鉴定、发酵条件优化、活性物质的分离与鉴定等方面进行深入研究。     

一株烟草青枯菌拮抗细菌的筛选及鉴定

利用不同地点采集发病烟苗根围土样的方法,从重庆黔江烟草地共采集了土样31份,经分离纯化获得一株对供试致病烟草青枯菌有较强抑制作用的拮抗菌株swu31-2,通过其形态特征,生理生化试验和16S rDNA序列的测定,初步判定属于铜绿假单胞菌．     

罗非鱼荧光假单胞菌的分离鉴定

从发病罗非鱼中分离获得1株革兰氏阴性杆菌,依据细菌形态、培养、生理生化特性初步鉴定为荧光假单胞菌,结合PCR检测、克隆测序及Blast比对分析,进一步确定该分离菌株为荧光假单胞菌。致病性试验结果显示,该分离菌株具有较高的致病性,能引起罗非鱼发病、死亡,其病理变化与荧光假单胞菌引起的鱼类赤皮病完全相似。药敏试验结果显示,该分离菌株对氟哌酸、氧氟沙星、新霉素高度敏感,但对氨苄青霉素、青霉素、阿莫西林等不敏感。     

恶臭假单胞菌诱变与底物类似物抗性筛选

提高海因酶产生菌株的活力，能为β-内酰胺类抗生素的重要中间体D-对羟基苯甘氨酸的生产带来应用价值，对产海因酶的恶臭假单胞菌MZ-4S-0315进行紫外、微波诱变处理，在加有适量底物类似物5-FU的选择培养基上进行筛选．结果表明：经测定的140株菌株，其海因酶活力大部分比原菌株产酶能力有所提高；其中在微波（800w,2450Hz）40s诱变条件下筛选到一株产酶活力比原菌株提高2．44倍的菌株ZF-109．该方法比以往化学试剂结合的诱变操作简单，危害性小，特别是筛选速度有了极大提高．     

具有脱氮除硫能力的假单胞菌的筛选·鉴定与活性研究

[目的]从污水处理厂旁的土壤中富集和筛选鉴定出具有脱氮除硫能力的菌株,并研究温度、p H、金属离子对其脱氮除硫能力的影响。[方法]通过形态学特征、生理生化鉴定、16S r DNA测序,测定硝态氮和硫酸根浓度。[结果]筛选鉴定出1株硝态氮降解率93.9%、硫酸根生成率74.9%的假单胞菌JD4,其脱氮除硫最适温度为30℃,p H 7.0~7.5。[结论]该菌种能在以硝酸盐为氮源、碳酸氢盐为碳源、硫化物为能源的无机培养基中生长,具有成为生物脱氮剂的潜力。     

1株高冰核活性细菌的分离与鉴定

从发生冻害的植物组织中分离到1株冰核细菌MB03,该菌株在-3℃时在2 min内的冻结率达到96.5%,而产生1个冰核所需要的细胞数约为2.9×103个,其冰核活性明显高于冰核细菌标准菌株和其它分离菌株.进一步对MB03进行了鉴定,经个体形态与培养特征观测、部分生理生化反应、G C摩尔分数测定、16SrDNA序列对比分析、菌落原位杂交探测特异性基因和PCR扩增冰核基因等鉴定,确定该菌为丁香假单胞菌(P5eudomonas syringae).     

草甘膦抗性菌株假单胞菌P818的筛选鉴定

5-磷酸烯醇式丙酮酰-莽草酸-3-磷酸合成酶(EPSPS)是除草剂草甘膦的靶标酶,转基因抗草甘磷作物主要通过转入外源EPSPS编码基因或者对外源EPSPS定点突变来获得。为了扩充草甘膦抗性基因资源,筛选新型草甘膦抗性基因,本研究分离筛选并获得了一株新型草甘膦抗性菌株,16sr DNA鉴定显示该菌株属于假单胞菌,该菌株被命名为假单胞菌818。该菌株的获得为进一步筛选克隆草甘膦抗性相关基因提供了可靠保障,丰富了草甘膦抗性基因资源库,获得自主知识产权的新型草甘膦抗性基因有利于应对国外生物技术公司对该领域的垄断,有利于我国遗传改良作物的培育。     

番茄灰霉病菌颉颃菌的筛选

对从不同生态环境下采集的样品进行分离纯化,共得到菌株68株.经初筛,得到对番茄灰霉有颉颃作用的生防菌株16株,占分离菌株的23.5%.并对其中较强颉颃作用的9株菌株进行抑茵活性的测定.结果表明:滤纸片法得到的各菌株对番茄灰霉的抑制率在65.1%～92.0%之间,抑菌带在2.0～11.0mm之间,共获得颉颃菌株8株,占分...     

Nisin产生菌的筛选及鉴定

从新鲜牛奶样品中用M17G筛选培养基定向筛选出20株目的菌株.应用琼脂扩散法,以黄色微球菌(Micrococcus flavus)NCBI8166为指示菌对其发酵产物进行效价测定,经反复筛选,获得1株稳定的高产菌株KY08,产Nisin效价为813IU·mL-1.用细菌鉴定系统Vitek-32进行生化特征鉴定,并参照了<伯杰氏细菌学鉴定手册>(第八版),将KY08菌株初步鉴定为乳酸链球菌种的一个亚种.     

葡萄霜霉病拮抗细菌N6的分离、筛选及鉴定

筛选葡萄霜霉病菌的拮抗菌株,为该病害的生物防治提供更多的资源.采用稀释平板分离法,从3个品种的健康葡萄叶片上分离得到细菌153株.初筛采用平板对峙法,得到5株拮抗辣椒疫病菌的菌株.采用叶盘法进行复筛,得到防治葡萄霜霉病效果好并且稳定的菌株N6,其防效达到74.2％.通过对菌株N6的形态、生长特性、生理生化反应、16S rDNA序列测定和系统发育分析,鉴定该菌株为砖红微杆菌(Microbacterium testaceum).     

恶臭假单胞菌株HZ-2产嗜铁素的发酵条件研究

为明确恶臭假单胞菌株HZ-2产嗜铁素的发酵条件,采用摇瓶发酵法,通过CAS检测分析,对影响嗜铁素分泌的几种发酵因子进行了研究.结果表明,适合嗜铁素分泌的最佳培养条件是:pH值为6.5,接种量为2,发酵时间为48h,装瓶量为50/150 mL,Fe3+浓度为0.1 mg/L,Al3+浓度为2.7 mg/L.     

一株拮抗姜瘟根际青枯假单胞杆菌的沙雷氏菌的分离与鉴定

从生姜连作地土壤中分离到1株对生姜青枯假单胞杆菌(Pseudomonos solanacarum Smith)有强拮抗作用的沙雷氏菌株R11,对该菌株进行了形态特征、培养特征、生理生化和16S rDNA序列分析的系统鉴定,发现R11为革兰氏阴性菌,端生一根鞭毛.以16S rDNA序列为基础构建了包括11株相关种属细菌在内的系统发育树,R11与沙雷氏菌(Serratia sp.)十分接近,序列相似性值达99％.     

脂肪酶菌种的筛选及分子鉴定

通过固体平板法,从温泉水样中筛选出1株耐热脂肪酶产生菌X-33。对该菌株进行了产酶条件的初步探索,得出其摇瓶发酵条件为：2%可溶性淀粉,3%酵母膏,MgSO4·7ddH2O 0.1%,K2HPO40.1%,三丁酸甘油酯乳化液0.1%,起始pH值7.5,通气量50 mL/250 mL摇瓶,250 r/min,发酵温度37℃,发酵周期24 h。该酶在60℃条件下温浴30 min,可保留部分活性。为鉴定该菌株,克隆并测序了其16S rDNA基因序列,NCBI上比对分析表明,该菌株与sphingomonas yabuuchiae（鞘氨醇单胞菌）有最紧密的亲缘关系。     

产涩柿单宁酶菌株的筛选及鉴定

[目的]获得可产生涩柿单宁酶的微生物,并对其鉴定。[方法]微生物在以涩柿为培养基上自然生长,进行划线分离,获得纯种菌株。将菌株接种于溴酚蓝培养基上,选取变色圈较大的8个菌株,进行COD去除率和单宁耐受力试验,选取COD去除率高、单宁耐受力强的菌株,使用形态学观察法进行菌种鉴定。[结果]获得可产生涩柿单宁酶的菌株,初步鉴定为黑曲霉。[结论]利用该方法,可获得产生涩柿单宁酶的黑曲霉,其COD去除率高、单宁耐受力强,有成为工程菌株的潜力。     

产广谱细菌素芽孢菌筛选与鉴定

为筛选出可产抑菌肽的芽孢菌,采用稀释涂布、平板划线的方法从土壤、泡菜、湖泥等10种样品中分离纯化菌种,利用抑菌圈法筛选出有4株抑菌性的芽孢菌,对抑菌效果最好的菌株J11通过菌落形态、革兰氏染色、芽孢染色、生理生化试验以及16SrDNA测序鉴定,表明其为多粘类芽孢杆菌,并进一步测定J11的抑菌谱,结果表明其对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、溶酪巨型球菌、戊糖片球菌、瑞士乳酸杆菌、乳酸链球菌均具有一定的抑菌性。尤其对溶酪巨型球菌的抑菌圈直径达30.13 mm,抑菌作用非常明显。J11具有良好的抑菌性,具有广谱抑菌效果,对常见的致病菌和腐败菌都有一定的抑菌性,在食品保藏中具有一定的应用价值。