棘腹蛙Ⅰ型干扰素基因的克隆与原核表达

干扰素(IFN)具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能,具备较好的临床应用前景。为了解棘腹蛙干扰素的基因信息,本试验明确了棘腹蛙Ⅰ型IFN基因ORF编码长度为561 bp,编码的蛋白质含有1个信号肽和103aa的保守功能结构域。遗传进化分析显示,棘腹蛙Ⅰ型IFN进化相对保守;其蛋白质结构主要由α螺旋构成,细胞表面受体结合能力相对保守。将目的片段装入原核表达载体pET32a并转化BL21(DE3)进行蛋白表达与纯化,获得了预期蛋白。本研究证实了棘腹蛙Ⅰ型IFN属于相对保守的典型Ⅰ型干扰素;为后期深入挖掘棘腹蛙IFN的生物学功能、促进广谱抗病毒生物制剂研发提供了参考。     

棘腹蛙“水肿病”病原的分离鉴定

为了解重庆地区部分棘腹蛙养殖场水肿病病因,并对该病的临床防控提供参考,本研究采集了10只具有水肿病典型症状的2岁龄棘腹蛙成蛙,剖检后从其主要病变组织分离细菌;对分离的优势菌进行培养特性观察和回归致病性试验,同时进行生理生化特性鉴定、16SrDNA序列测定和药敏试验。结果显示,从病蛙腹腔中分离到1株优势菌株并命名为CQWU201501,该菌为革兰阴性无芽胞短杆菌,主要生理生化特性符合弗氏柠檬酸杆菌的指标,16SrDNA序列与弗氏柠檬酸杆菌同源性高达99.5%;药敏试验显示该菌对绝大部分β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类和四环素类药物敏感。综上所述,棘腹蛙水肿病是由弗氏柠檬酸杆菌引起的;该菌对供试的16种药物敏感,仅对头孢唑啉和复方新诺明2种药物耐药,生产上可选择敏感药物治疗。     

一例棘腹蛙“白内障”的病原分离鉴定

在患白内障棘腹蛙眼部、口腔和胃部分离到一株圆形或椭圆形、葡萄状堆积的革兰氏阳性菌,经培养特性观察和致病性实验,确定候选菌株CQWU201401为白内障的病原;通过针对该菌株的生理生化特性鉴定和16S rDNA测序鉴定结果判定该候选菌株为金黄色葡萄球菌。采用药敏纸片法对该菌株进行药敏试验,在10种药物中的仅对四环素有耐药现象;针对该病原菌的分离鉴定和药敏试验为临床上防治该病提供了参考。     

我国珍稀两栖动物——棘腹蛙

棘腹蛙在维护自然界的生态平衡中起着重要作用,也是环境监测的指示动物,棘腹蛙对水质、地质、气候等都有较高的要求。为了保护棘腹蛙这个中国珍稀两栖物种,本文从生态学、遗传学、繁殖学、营养价值等方面对棘腹蛙进行了综述,以期为棘腹蛙后续进一步的研究提供参考。     

棘腹蛙TNFα基因的克隆与序列分析

为了解棘腹蛙TNFα基因的相关信息,对棘腹蛙的TNFα基因进行了克隆和序列分析。克隆了全长为936 bp、ORF长度为675 bp的TNFα-Pb基因;对该基因的蛋白质结构分析显示,TNFα-Pb的信号肽由44个氨基酸组成,随后由2个α螺旋,和10个β折叠形成小分子蛋白;系统进化分析发现,TNFα-Pb与两栖类聚为一枝,与高等哺乳动物存在功能分化的可能。本研究为了解棘腹蛙的生物反应调节机制奠定了一定基础。     

棘腹蛙消化道淀粉酶的分布及其活性与pH值和温度的关系

为了探讨棘腹蛙消化道各段淀粉酶的活力分布及pH值和温度对淀粉酶活力的影响,试验采用3,5-二硝基水杨酸比色法对其进行了研究。结果表明:棘腹蛙消化道各部位淀粉酶活力由高到低的顺序为回肠>直肠>十二指肠>胃>食道;pH值和温度均显著影响淀粉酶活力,二者与淀粉酶活力的关系曲线均呈单峰型,棘腹蛙胃、十二指肠、回肠和直肠的最适pH值分别为5.6,6.6,7.6,7.6,它们的最适温度均为35℃。     

棘腹蛙生长激素/类胰岛素样生长因子轴关键基因的克隆与序列特征分析

机体的生长激素(GH)/类胰岛素样生长因子(IGFs)轴由GH系统和IGFs系统构成,可促进细胞增殖、调节生长发育、调控生理代谢,在机体生长发育调控方面有着重要作用。为明确棘腹蛙GH/IGFs轴的功能结构和进化特征,为棘腹蛙生长发育调控方面的研究提供理论依据,本试验对棘腹蛙GH、类胰岛素生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)和类胰岛素生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)进行克隆并对其序列特征进行分析。结果显示:1)与两栖类模式动物的多重序列比对发现,棘腹蛙GH、IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ的功能结构域严格保守,具有一定的遗传多态性;IGF-Ⅱ的N端呈简缩进化趋势。2)遗传进化聚类分析发现,棘腹蛙IGFs与两栖动物聚为一支,并与硬骨鱼相对近缘,说明IGF-Ⅰ和IGF-Ⅱ进化地位相对原始;棘腹蛙GH则与蛙类、鱼类等水生动物相对近缘,暗示该基因具有趋同进化趋势。3)为进一步明确上述基因的特异性功能位点,利用Swiss-model server软件解析其蛋白质结构,最终确定IGF-Ⅰ的THR52、LEU53、PHE72、PHE73、SER74为潜在的功能分化位点,IGF-Ⅱ的TYR81、LYS82、LYS83为潜在的功能分化位点,GH的PHE208为潜在的功能分化位点。由此可知,棘腹蛙GH/IGFs轴的主要基因相对保守,但与已知模式物种相比,存在潜在的功能分化位点,可作为后期棘腹蛙GH/IGF轴功能研究和遗传进化特征分析的分子靶标。     

新型抗菌肽Hadrurin基因的克隆与表达

Hadrurin是一种分离自毒蝎的高活性抗菌肽,对多种细菌有较强抑制活性.本试验构建Hadrurin全基因并在其两端加入了可切除的保护性多肽基因;再酶切Hadrurin基因产生黏性末端并连入pET-32a(+)原核表达载体;IPTG诱导表达抗菌肽蛋白,亲和层析纯化抗菌肽蛋白.结果表明,构建的Hadrurin全基因片段序列完全正确,连接进入pET-32a(+)表达载体的基因由0.1 mmol/L终浓度的IPTG诱导5 h可达到表达的高峰,重组蛋白经亲和层析可到达纯化的目的.     

水产动物抗菌肽基因异源表达研究进展

综述了近几年的一些研究结果,就水产动物抗菌肽在大肠杆菌、酵母菌、动植物等表达系统中的异源表达以及各自系统的优缺点等进行了阐述。     

棘胸蛙的人工养殖

棘胸蛙又名石蛙、石鸡 ,属两栖纲无尾目蛙科蛙属 ,在我国分布较广。该蛙体重可达５００克以上 ,含有高蛋白质、氨基酸、多种维生素和矿物质 ,肉质脆嫩 ,味道鲜美 ,具有清热解毒、滋补强身、防癌抗癌之功效。发展其人工养殖 ,是致富的好门路。１生物学习性棘胸蛙属流水生活型 ,常栖于山区水流较缓的小溪内 ,后肢粗壮 ,跳跃能力很强 ,畏光怕声 ,白天一般伏在洞口 ,或潜伏于草丛、砂砾和石头空隙间 ,伺机捕食附近的食物 ;生长温度为１８～２８℃ ,超过３６℃则活动异常 ,甚至出现死亡 ,低于１２℃进入冬眠 ,双目紧闭 ,不动不食 ;食谱较广 ,蝌蚪…     

细粒棘球绦虫TSP8基因在其不同发育阶段的差异表达及生物信息学分析

为研究细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus,E.g)TSP8基因的分子特性以及其在虫体不同发育阶段的差异表达,根据NCBI GenBank数据库中的TSP8基因设计1对特异性引物,对TSP8基因进行PCR扩增,将PCR产物克隆到pMD19-T载体后测序,通过生物信息学软件分析预测TSP8基因的结构与功能,并通过SYBR Green Ⅰ qRT-PCR方法分析TSP8基因在虫体原头蚴、包囊壁以及成虫mRNA相对转录情况。结果显示：成功克隆到细粒棘球绦虫TSP8基因序列,与细粒棘球绦虫跨膜蛋白(GenBank登录号：CDS17460.1)同源性为100%;进一步生物信息学分析显示,TSP8基因全长669个核苷酸,编码222个氨基酸,理论等电点为5.06,为稳定蛋白分子;TSP8基因编码的氨基酸序列共含有5个跨膜区域,含有4个优势B抗原表位;qRT-PCR结果显示TSP8基因在原头蚴及成虫阶段均有表达,差异显著,具有统计学意义(P<0.05)。本研究对细粒棘球绦虫TSP8基因的分子特性进行了初步研究,为进一步揭示其生物学功能奠定了基础。     

花臭蛙皮肤分泌物中抗菌肽Odorranin的分离纯化与表征

从花臭蛙(Odorrana schmackeri)皮肤分泌液中分离得到一类(包含三种)新型的抗菌肽.经过一级结构解析和抗菌活性表征后,命名为Odorranin(1,2,3).该类抗菌肽由21个氨基酸组成.Odorranin对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有明显的抑制活性,其中Odorranin 3对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度分别为4.2 、6.06 μg/mL.     

棘胸蛙养殖技术经验

棘胸蛙又称棘蛙、石蛙、石蛤蟆、石鸡,属两栖纲蛙科。 一、经济价值:棘胸蛙是一类大型的野生蛙类。它体大肉多而细,味美如鸡肉,营养丰富 蛙肉中含有蛋白质、葡萄糖、氨基酸、铁、磷和维生素等多种营养成分,脂肪     

蛙皮肤抗菌肽Dermadistinctin-L原核表达载体的构建

根据GenBank中公布的猴蛙皮肤抗菌肽Dermadistinctin-L(DDL)成熟肽氨基酸序列,选择大肠杆菌偏爱密码子,设计合成了3条互补引物,通过PCR扩增得到完整的Dermadistinctin-L基因序列。将获得的基因序列克隆到原核表达载体pET-32a(+),经酶切鉴定和序列分析证明成功构建了pET32a-DDL表达载体,表达载体的正确构建为Dermadistinctin-L的高效表达和生物学活性研究奠定了基础。     

抗菌肽酵母表达系统的研究进展

抗菌肽是生物体内一类具生物活性的小分子多肽,由于从天然资源中提取成本高,得率低且化学合成价格昂贵,利用基因工程技术生产抗菌肽具有重要意义.酵母表达系统具有表达量高,利于产物分离纯化等优点,利用酵母表达抗菌肽具有很好的前景.本文综述了毕赤酵母表达系统表达抗菌肽的最新进展.     

抗菌肽Abaecin的表达及生物活性的研究

在枯草芽孢杆菌中表达抗菌肽Abaecin,并鉴定表达产物的生物学活性,以判定其能否开发为口服药物和饲料添加剂。通过Western blot方法检测目的基因表达情况;采用琼脂扩散法检测表达产物的生物活性。结果表明:抗菌肽Abaecin在枯草芽孢杆菌中成功表达,并有效地分泌至细胞外。体外抑菌实验结果表明,表达产物Abaecin对革兰氏阴性菌有抑菌活性,并且在不同温度37～100℃、pH2～9和酶(胃蛋白酶、胰蛋白酶和蛋白酶K)的条件下,仍能保持抗菌活性,证实表达产物可以抵抗动物消化系统的降解。枯草芽孢杆菌简便快捷地表达了抗菌肽Abaecin,并且表达产物有开发为口服药物和饲料添加剂的前景。     

棘胸蛙产卵量、卵子孵化率的比较研究

为选择适于闽北的棘胸蛙养殖品种,比较了异地引种棘胸蛙和本地引种棘胸蛙的产卵量和卵子孵化率。试验表明,异地经过几个世代驯化的棘胸蛙在总产卵量上要比本地引种的棘胸蛙要多两倍多,产卵总数为3071枚,本地引种的棘胸蛙产卵总数为863枚。异地引种棘胸蛙在卵子孵化率上也比本地引种棘胸蛙要高,平均为95.3%,而本地引种的棘胸蛙的卵子孵化率仅为64.18%,说明异地引种的棘胸蛙在闽北有较好的推广前景。     

一例棘胸蛙水蛭病的诊治与分析

棘胸蛙,又名石蛙、石棒,属蛙科,棘蛙属,在重庆、四川及云贵高原的山间溪流环境中分布广泛。随着牛蛙、黑斑蛙等传统蛙类在经济市场上表现疲惫,该品种受到养殖行业的关注。上世纪90年代后期开始,该品种的养殖技术逐步发展,趋于成熟。目前在重庆、江浙及两湖地区,被广泛养殖。随着规模的扩大与行业人员的更新,一些养殖场因管理经验不足及配套设施落后等原因,导致疾病频频爆发,目前棘胸蛙报道较多的有歪头病,白内障及溃疡病。现笔者就诊治的一起水蛭病例做总结与分析,以供大家参考。     

棘胸蛙的苗种繁育技术

棘胸蛙俗名石顿、石磷、骨栋，属脊椎动物门、两栖纲、无尾目、蛙科、蛙属。棘胸蛙肉质洁白细嫩，味道特别鲜美，被国内外美食家誉为“百蛙之王”。由于人们的大量滥捕，近年来野生资源濒临灭绝。因此，开展棘胸蛙人工繁殖，为人工养殖提供充足的种苗，对发展人工养殖具有十分重要的意义。现就棘胸蛙人工育苗的主要技术总结如下；     

棘胸蛙蝌蚪的常见疾病防治

棘胸蛙是我国特有的大型野生蛙,一般喜欢栖息在高山深谷,草木丛生,阴凉安静,清水长流,底质富有沙砾石砺的山涧石洞（水潭）之中,对环境条件要求比较高。棘胸蛙的成体和幼体有着完全不同的形态。幼体生活在水中,外形似鱼,一般称蝌蚪。