50年中国农业科技成就（四）

（九）畜禽疫病防治５０年代初期，研制出安全有效的牛瘟兔化、山羊化弱毒疫苗，猪瘟兔化、绵羊化弱毒疫苗，仅用６年的时间，就消灭了牛瘟、猪瘟。１９７６年，在联合国粮农组织和西欧经济共同体召开的会议上，一致认为中国的猪瘟兔化弱毒疫苗为控制和消灭欧洲的猪瘟起了重要作用。１９６８—１９８３年，研制成功的马传染性贫血病弱毒疫苗是国际兽医科学的创举。据１９８２年底统计，全国１３个省、市、自治区已免疫注射２００万匹马次，使这种毁灭性病毒病已基本得到控制。研制出的牛肺疫兔化弱毒菌苗和兔化绵羊化适应菌苗综合防治措施，…     

猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR快速鉴别检测方法的建立

【目的】建立猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR快速鉴别检测方法。【方法】根据Gen-Bank中36株猪瘟病毒(CSFV)强毒株和兔化弱毒疫苗株的基因序列,分别设计了针对CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的特异性引物,建立了一种能区分CSFV强毒和兔化弱毒疫苗株的RT-PCR检测方法。【结果】建立的RT-PCR检测方法可以从CSFV强毒株和兔化弱毒疫苗株中分别扩增出大小为187和492 bp的特异性片段,对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)等猪源性病毒的检测结果均为阴性,说明该方法具有较好的特异性。对10份疑似猪瘟临床样品进行检测后发现,利用该方法可以从中分别检测出CSFV强毒和疫苗毒。【结论】建立了可鉴别检测CSFV强毒株和弱毒疫苗株的RT-PCR方法,为猪瘟的早期诊断及疫苗免疫猪和野毒感染猪的鉴别提供了技术参考。     

猪瘟病毒石门株E2基因序列分析

经非猪瘟免疫猪增殖猪瘟病毒石门株,从抗凝血中直接提取病毒RNA进行RT-PCR,获得了猪瘟病毒石门株E2基因片段。克隆后测序,结果表明石门株的E2囊膜糖蛋白与国外报道的5株猪瘟病毒的E2囊膜糖蛋白具有相同的骨架结构,即均具有15个半胱氨酸残基和5个潜在糖基化位点,此外石门株也具有保守序列RYLASLH。同源性比较表明,石门株与日本的ALD株和GPE#+-株同源性最高,而与欧洲的Alfort株同源性最低。与国内的疫苗种毒（482代）、疫苗毒以及国外使用的中国猪瘟兔化弱毒株同源性比较表明,石门株与种毒(482代)同源性最高,其次为国外使用的中国猪瘟兔化弱毒株,而与国内使用的疫苗毒同源性最低。本研究提示国内疫苗毒的E2基因在生产中有较大变异,可能导致抗原漂移。     

鉴别猪瘟强毒和弱毒的反转录-复合套式聚合酶链式反应(RT-nPCR)检测方法的建立

[目的]建立一种能区分猪瘟病毒（classical swine fever，CSFV）强毒和弱毒的反转录-复合套式聚合酶链式反应（RT-nPCR）检测方法。[方法]根据GenBank上登录的现有CSFV基因组全序列，选择高度保守区设计了一对CSFV通用引物，并在该对引物跨越区域的内部设计了猪瘟兔化弱毒疫苗和强毒特异性引物，建立了一种能区分猪瘟强毒和弱毒的RT-nPCR鉴别诊断方法。[结果]应用该方法从猪瘟兔化弱毒疫苗和石门强毒株基因组中扩增出了大小分别为447和343bp的一条特异性片段，从两种病毒基因组混合物中扩增出了大小为447和343bp的两条特异性片段，但对牛病毒性腹泻病毒和其它常见猪源病毒细胞培养物以及正常细胞基因组进行检测时均为阴性。该方法可以检测出0．04pg的CSFV RNA。对从黑龙江省采集的15份疑似猪瘟病料进行了检测，结果表明，有14份类似猪瘟强毒，1份类似弱毒疫苗。限制性片段长度多态性和种系发生分析证实了RT-nPCR的检测结果。[结论]本研究建立的RT-nPCR可以有效区分猪瘟强毒和弱毒，减少了未感染的免疫猪被误杀的可能性。     

春季前后猪瘟免疫“十”要点

一、要使用猪瘟兔化弱毒单苗疫苗包括猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞苗和猪瘟兔化弱毒兔脾淋组织苗,不要使用猪瘟—猪丹毒—猪肺疫＂三联苗＂防猪瘟。重要的是用猪瘟单苗防好猪瘟,猪丹毒可以不防。在怀疑有猪肺疫的猪场,可用猪巴氏杆菌A型及B型（E0630）单苗联用,且应于猪瘟单苗免疫间隔7天后使用。另外,对猪瘟单苗的选择也有讲究,最好能选用两个不同知名品牌的产品,这叫双保险。     

抗猪瘟高免卵黄抗体的制备

猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种急性、热性、高度接触性传染病。近年来,在养猪生产中尽管普遍对猪群用猪瘟兔化弱毒苗进行免疫接种,但免疫失败的现象时有发生,给养猪业造成了很大的经济损失。为了找到一个治疗猪瘟的经济有效方法,我们进行了抗猪瘟高免卵黄的制备。1材料与方法1·1试验动物186日龄罗曼商品蛋鸡,杜洛克仔猪均由郑州牧业工程高等专科学校微生物学教研室提供。1·2疫苗及毒株猪瘟兔化弱毒苗购自农业部郑州生物药品厂;石门系猪瘟强毒购自中国兽药监察所。1·3免疫方法1·3·1基础免疫对罗曼商品蛋鸡进行免疫,第一次每羽肌注猪瘟兔化…     

猪瘟兔化弱毒荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

【目的】建立一种能够实际应用于猪瘟兔化弱毒疫苗中猪瘟病毒含量检测的荧光定量PCR方法。【方法】根据GenBank中登录号为AF091507的猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒株的全长基因组序列,在其5′非编码区设计2对特异性引物(标准品引物、定量引物)和1条探针(qPCR-P),通过标准品引物进行RT-PCR扩增及T7 RNA聚合酶体外转录构建标准品RNA。对荧光定量PCR方法的各项条件进行优化,建立猪瘟兔化弱毒荧光定量PCR检测方法,并采用该法对成品猪瘟兔化弱毒疫苗中的病毒含量进行检测。【结果】成功构建了体外转录的标准品RNA,建立了检测猪瘟兔化弱毒的荧光定量PCR方法。该方法检测灵敏度可达10拷贝/μL,比RT-nPCR方法的灵敏度高出1个数量级;该法对标准品RNA检测的线性范围为1.0×108~1.0×102拷贝/μL。对1.0×108,1.0×106,1.0×103拷贝/μL 3种稀释度的标准品RNA进行重复性试验,批内变异系数分别为0.54%,0.52%和0.39%;批间变异系数分别为1.47%,1.85%和1.01%,具有良好的可重复性。应用该方法对不同厂家猪瘟兔化弱毒疫苗中的病毒含量进行测定,可知同一厂家脾淋苗中的病毒含量比细胞苗高出1~2个数量级,而不同厂家同一类型疫苗中病毒含量也有差异,其中脾淋苗差异不大,而细胞苗间的差异较大,最高可达27.2倍。【结论】建立的猪瘟兔化弱毒荧光定量PCR方法,具有敏感性高、特异性强、重复性好的特点,为实际工作中对猪瘟兔化弱毒疫苗的质量监控提供了重要的技术支撑。     

猪瘟流行新特点与防治对策（上）

猪瘟是猪的一种烈性传染病。其特征为发病急，高热稽留和细小血管壁变性，引起全身泛发性小点出血，脾梗死。随着我国猪瘟免化弱毒疫苗研制成功和使用，猪瘟流行程度得到有效控制，有的国家使用猪瘟兔化弱毒苗消灭了猪瘟，但猪瘟在我国仍然存在，有的地方甚至很严重。并且其流行也表现出一此新特点[第一段]     

仔猪参考免疫程序

30日龄．猪链球菌二价灭活苗，每头肌肉注射2毫升；35日龄，仔猪副伤寒活疫苗，每头口服5毫升；40日龄，猪瘟兔化弱毒疫苗，每头肌肉注射4头份0型口蹄疫灭活疫苗，每头肌肉注射2毫于h60日龄，O型口蹄疫灭活疫苗，每头肌肉注射2毫升；70日龄，猪瘟兔化弱毒疫苗，每头肌肉注射6头份。     

常见猪疫苗怎么用

一、猪瘟、猪丹毒、猪肺疫三联活疫苗该疫苗是采用猪瘟兔化弱毒株接种乳兔或敏感细胞,收获含毒乳兔组织或细胞培养病毒液,以适当比例和猪丹毒弱毒苗液及猪肺疫弱毒菌液混合,加入优选保护剂,充分振荡,混合均匀,经冷冻干燥制成。用于猪瘟、猪丹毒和猪肺疫的免疫预防,猪瘟免疫期为     

抗猪瘟病毒单克隆抗体的研究——猪瘟病毒抗原的提纯

本文介绍了用 PEG 和蔗糖密度梯度区带离心纯化猪瘟病毒的方法和步骤。先用 PEG 沉淀浓缩猪瘟兔化弱毒感染的牛睾丸细胞培养液,再经蔗糖密度梯度区带离心,出现4条区带,其中病毒感染力最强的位于Ⅱ带,其次为Ⅰ带,蛋白质含量多为0.14～0.19毫克/毫升和0.21～0.12毫克/毫升。电镜检查可见带有膜囊的病毒粒子,SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳显示Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ带均各出现一条明显蓝色条带外,在它前后侧还隐约可见一条浅带。用这些方法浓缩提纯兔化猪瘟弱毒效果较好,且较简便易行。     

新生凉山黑猪乳前猪瘟免疫试验探讨

[目的]排除母源抗体对仔猪猪瘟免疫影响。[方法]仔猪出生后在吮乳前注射猪瘟兔化弱毒苗,注射后间隔不同时间令其吸吮初乳,再饲养至155 d行中和抗体测定。[结果]乳前免疫后0.5 h吮乳组免疫效果良好,经攻击猪瘟强毒,完全获得保护。[结论]新生凉山黑猪乳前猪瘟免疫法,具有一定的推广实用价值。     

非典型猪瘟的诊断与防制对策

对近年来广西出现的非典型猪瘟的流行特点、临床症状、剖检病变、诊断要点进行了概述,提示原在猪瘟临床诊断上具有重要示病意义的典型眼观病变较少出现在非典型猪瘟病例,而原先易忽视的眼观病变如肾纵切面。肾乳头呈现点状出血、扁桃体充出血及点状脓性病灶、心浆膜粘膜有出血斑点、胃浆膜及胃底部黏膜有出血斑点或有溃疡点等病变频繁出现,成为新的示病指征趋势;指出反转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）是快速确诊非典型猪瘟的诊断技术;提出实施猪瘟免疫监测、制定科学合理的个性化免疫程序、适度加大猪瘟兔化弱毒疫苗的免疫头份、淘汰带毒感染母猪等防制对策。     

2011—2013年广西地区猪瘟抗体监测及免疫效果分析

为了解广西地区猪瘟的免疫抗体水平,采用正向间接血凝试验对采集自2011—2013年广西14个地市不同规模猪场的20 271份血清样品进行了猪瘟抗体检测。结果表明,广西各地的猪瘟抗体水平存在一定差异,抗体合格率为64.4%~97.5%,平均合格率为84.9%,大型规模场和中小规模场的猪瘟抗体合格率较稳定,且保持在较高水平,分别为96.0%和87.5%;农村散养户和屠宰场/市场的抗体合格率相对较低,分别为82.7%和70.5%。     

关于现场非典型猪瘟的早期诊断和防治的探讨

本文报告了1974—1987年间在31个猪瘟疫点共剖检了178例非典型猪瘟病例,其临床流行病学、病理变化与典型猪瘟的表现有所不同。据此提出了对非典型猪瘟病猪的诊断要点和防治措施。     

兰州市猪瘟流行病学调查

由于本次抽查的只是XX区猪场的猪瘟免疫情况,调查范围有一定局限性,并不能完全代表整体情况,但有助于了解整体猪瘟免疫情况,从而为该病的监测及其防控提供科学的依据。为摸清当前XX市XX区猪瘟流行病学动态,作好地区猪瘟的防制工作,进行调查研究。     

猪瘟细胞苗与犊牛血清中BVD/MD抗体的检测

猪瘟兔化牛睾丸细胞苗在生产中,常出现疫苗毒价不达标的问题。其主要的原因是在生产中使用了含BVD/MD抗体的犊牛血清。试验过程中,采用合格的疫苗与标准的BVD/MD抗血清中和,然后再加入标准BVD/MDV,接种BT细胞,结果出现CPE。证实了疫苗中的HCV与BVD/MD抗体发生了结合。故生产前对血清中BVD/MD抗体的检测是不可忽视的。     

规模化集约化养猪场猪瘟免疫程序的研究

本文根据PPA-ELISA测定的猪瘟弱毒抗体OD值来决定猪瘟免疫程序.配种前母猪接种猪瘟细胞苗2头剂(300兔感量),到产仔后哺乳期母猪体内抗体OD值平均为0.56,其仔猪3、10、15、20、30、40日龄的母源抗体OD值分别为0.34、0.30、0.25、0.21、0.18、0.15.20日龄接种2头剂猪瘟细胞苗,其OD值在30、40、50、60、70日龄时分别为0.32、0.34、0.35、0.29、0.25.在断乳后60日龄左右接种2头剂,到70、80、100、130、160、210日龄时的OD值分别为0.368、0.432、0.397、0.407、0.409、0.424.至出栏不再接种.后备种猪配种前进行第三次接种2头剂,以后每半年接种一次.     

猪瘟“免疫”猪群暴发猪瘟的诊断

１９９９年１月至３月武汉市某种猪场发生以高热,高死亡率为特征的传染病。哺乳仔猪的发病率为６６．７％,死亡率为５８．３％,断奶仔猪的发病率为５３．６％,死亡率为１２．３％,造成巨大经济损失。经流行病学调查,病理变化观察和免疫荧光抗体检查,确诊该种猪场所暴发的传染病为猪瘟。此外,用间接血凝试验对２１日龄超前免疫仔猪的血清中猪瘟抗体水平进行了检测,表明表明仔猪的免疫合格率为７８．９％。     

猪接触传染性胸膜肺炎临床感染血清学检测研究

[目的]总结河南省猪接触传染性胸膜肺炎的流行病学规律。[方法]2006年1月至2007年12月份历时2年,郑州牧业工程高等专科学校附属兽医院对来诊的未进行传染性胸膜肺炎疫苗接种的1 169头猪随机采血,进行猪传染性胸膜肺炎抗体水平检测。[结果]平均阳性率为21.55%,同时在被检猪中又进行了猪瘟、圆环病毒、蓝耳病、伪狂犬病、弓形体等疾病感染的检测,证实猪传染性胸膜肺炎与病毒性、细菌性、寄生虫性疾病有着不同程度的混合感染。[结论]猪在发生一种或几种传染病的情况下,由于机体抵抗力的下降,往往可以继发多种疾病。