不同地理株柔嫩艾美耳球虫卵囊排出量的比较研究

试验采用来自吉林省怀德县、伊通县头道乡和伊通县大虎山等地的柔嫩艾美耳球虫的孢子化卵囊,以每只鸡5000,1×104,1×105个的剂量,口服接种7日龄和14日龄无球虫AA肉鸡,对感染后6~13 d每日24 h内所排出的卵囊计数,并对其进行统计分析。结果表明:7日龄雏鸡接种剂量为5000,1×104个时伊通大虎山株的排卵囊量最多,接种剂量为1×105个时怀德株的排卵囊量最多。14日龄雏鸡接种剂量为5000,1×104个时伊通大虎山株的排卵囊量最多,接种剂量为1×105个时怀德株的排卵囊量最多。结果还显示无论接种剂量相同与否,各虫株均从接种后第6 d开始排卵囊,第7 d达到高峰,第8,9 d开始减少,至第13 d趋于0。     

理化因素对柔嫩艾美耳球虫卵囊致病力的影响

<正> 随着养禽业的发展,人们对鸡球虫病的免疫预防越来越重视。免疫学研究表明,能够诱导雏鸡产生坚强免疫力的抗原是有生命力的球虫虫体,而不是死虫或其提取物。因此,如何减弱球虫的毒力,则是制造安全、有效疫苗的关键。在国外,人们相继得到了鸡胚传代致弱株(Long,1966)和“早熟株”(Jeffers,1974,1975)为了寻找适合我国情况的球虫卵囊致弱程序,我们观察了     

柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)小配子发育超微结构的观察

利用透射电镜对柔嫩艾美耳球虫小配子发育的超微结构进行了观察 小配子母细胞和大配子母细胞于相邻的宿主细胞内相伴产生 ,系由末代裂殖子侵入后 ,长大变圆而形成 小配子的形成为直接分化型 首先细胞核分裂为多个 ,随后细胞核向周边移动 ,随之近核处限制膜外突 ,临近处限制膜下陷 中心粒在核上方形成并发育为基粒、鞭毛中的微管和附着微管 ,早期形成的小配子仍与小配子母细胞的残体相连 成熟小配子与残体分离 ,外型呈香蕉状 ,外被单位膜 ,内有一电子结构十分致密的细胞核 ,核头端侧面有一个巨大线粒体 ,小配子有鞭毛 2根 ,每根鞭毛内有微管 ,为 9+2结构 ,附着微管至少 6根 ,这些微管均起始于基粒     

柔嫩艾美耳球虫（Eimeria ternlla）小配子发育超微结构的观察

利用透射电镜对柔嫩艾美耳球虫小配子发育的超微结构进行了观察。小配子母细胞和大配子母细胞于相邻的宿主细胞内相伴产生,系由末代裂殖子侵入后,长大变圆而形成。小配子的形成为直接分化型。首化细胞核分裂为多个,随后细胞核向周边移动,随之近核处限制膜外突,临近外限制膜下陷。中心粒在核上方形成半并发育为基粒、鞭毛中的微管和附着微管,早期形成的小配子仍与小配子母细胞的残体相连。成熟小配子与残体分离,外型呈香蕉状,外被单位膜,内有一电子结构＋分致密的细胞核,核实端侧面有一个巨大线粒体,小配子有鞭毛2根,每根鞭毛内有微管,为9＋2结构,附着微管至少6根,这些微管起始于基粒。     

鸡柔嫩艾美耳球虫单卵囊分离技术的建立

以玻璃纸做材料,用单卵囊分离技术,对柔嫩艾美耳球虫进行了分离,实验室单卵囊感染26只鸡,在感染后5～12d,用饱和盐水漂浮集卵法进行检测,其中10只鸡检出卵囊,结果表明,该单卵囊分离技术简单易行,单卵囊感染成功率达38%,单卵囊技术的关键步骤为:(1)滴管拉的尽量细,(2)滴液尽量小,(3)要耐心观察,(4)实验鸡在0～7日龄。     

柔嫩艾美耳球虫各阶段虫体纯化方法的改进

本文报道了改进的柔嫩艾美耳球虫各阶段虫体纯化方法。用胃蛋白酶消化盲肠道组织，铜筛过滤除去大颗粒杂质后，以1．1mol·mL－1蔗糖离心漂浮卵囊，然后用小于0．5mol·mL－1蔗糖溶液反复漂洗，最后以5％次氯酸钠消毒处理，获得了大量纯化柔嫩艾美耳球虫卵囊。孢子化卵囊经研磨，消化，游离出子孢子后，过DEAE-纤维素52层析柱，以0．05mol·mL-1，Tris－HCl，（pH＝80，0．15mol·mL1-NaCl）洗脱，层析往高5cm，洗脱液水柱高3cm，流速为2mL·min－1，纯化出了子孢子。取人工感染球虫鸡的120h后的盲肠，游离出第二代裂殖子，铜筛过滤后，过柱方法同前，纯化出了第二代裂殖子。结果证明本法分离的子孢子和第二代裂殖子活性好，回收率达87％。     

离体条件下球虫卵囊子孢子囊的释放

利用柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)为试验虫株,盖玻片、载玻片为实验材料,用拇指适当施加压力时,在400倍的光学显微镜下,观察了柔嫩艾美耳球虫卵囊破裂和子孢子囊释放的过程,结果发现,卵囊在适当压力的作用下,在卵囊一端发生破裂,随后子孢子囊逐个从破裂口处溢出,溢出后的子孢子囊内含有2个子孢子,说明球虫卵囊虽然对常规的消毒剂抵抗力很强,但是在鸡的消化道内,尤其在肌胃内球虫卵囊很容易破裂而释放子孢子囊。     

柔嫩艾美耳球虫子孢子抗原的制备

[目的]为进一步研究柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）的单克隆抗体奠定基础。[方法]给肉鸡雏接种E．tenella纯种孢子化卵囊：第5～10天收集鸡的粪便并标记、粗提,经卵囊孢子化、纯化孢予化的卵囊、计数卵囊后,最终制备出子孢子抗原。[结果]该方法制备E．tenella子孢子抗原较其他方法简单易行,不需太多专门仪器和培养液,一般实验室均可进行,效果良好。但所用时间较长。[结论]该试验成功分离提纯出了鸡的E．tenella卵囊,并获得了蛋白浓度较高的抗原,为单克隆抗体的制备提供了有力保障。     

外源性一氧化氮对雏鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊作用的研究

 以硝普钠 (SNP)、精胺 (Sper/NO)和亚硝基谷胱甘肽 (GSNO)作为一氧化氮 (NO)供体用于处理卵囊 ,探讨外源性NO对卵囊的孢子化率及其致病力的影响。试验结果表明 ,在以上 3种NO供体中 ,只有GSNO对卵囊的孢子化有明显的抑制作用 ,其对纯化卵囊的抑制率达 93%～ 97% ,对粪便中卵囊的抑制率可达 10 0 % ;GSNO还能明显抑制孢子化卵囊的致病力 ,经 2～ 8mmol·L-1浓度GSNO处理的卵囊明显丧失了对雏鸡的致病作用。     

对氯间甲酚及复方对氯间甲酚对鸡柔嫩艾美耳球虫卵囊的抑杀效果

为验证苯酚类消毒剂对鸡球虫卵囊的抑杀作用,采用不同浓度的单体和复方对氯间甲酚消毒剂与未孢子化的柔嫩艾美耳球虫卵囊共孵育,检测其对卵囊孢子化率的影响;与孢子囊共同孵育,通过子孢子脱囊率评价其对子孢子释放的干扰。孢子化卵囊经过不同浓度消毒剂直接浸泡、粪便干扰下浸泡或喷雾处理后经口接种雏鸡,通过OPG和盲肠病变记分探究消毒剂处理对卵囊的繁殖力和鸡的致病性的影响。结果显示, 2种消毒剂均可使孢子化率和子孢子脱囊率显著下降,且3种浓度的复方对氯间甲酚与3%氨水对照组（PC）的消毒效果无显著差异。直接浸泡处理试验结果显示,2%和3%复方对氯间甲酚 （HTS2和HTS3）具有更为显著的抑杀效果,与PC无显著差异;粪便干扰试验结果显示,粪便作用下这两种消毒剂对球虫卵囊仍有理想的抑杀效果;喷雾处理试验结果显示,3%对氯间甲酚（HT3）对球虫卵囊抑杀效果最好,显著优于PC组（P＜0.05）,而2%对氯间甲酚（HT2）、HTS2和HTS3组的抑杀效果与PC组无显著差异。研究结果表明,不同浓度下这2种消毒剂对孢子化和未孢子化的柔嫩艾美耳球虫卵囊都有一定的抑杀作用,综合比较,复方对氯间甲酚消毒剂具有更强的抑杀球虫卵囊效果,具有代替氨水成为鸡球虫消毒剂的潜能。     

柔嫩艾美尔球虫的分离及病理学观察

采用单卵囊感染技术,从鸡球虫混合种中分离出1株柔嫩艾美尔球虫(E im eria tenella)。并对该株柔嫩艾美尔球虫的病理学做了进一步研究。利用柔嫩艾美尔球虫的寄生部位、肉眼病变、临床症状等生物学特性进行鉴定,并做回归动物实验,用此球虫卵囊100,000个感染雏鸡。取8天后明显病理变化的盲肠组织,采用石蜡切片技术,进行病理学观察。结果表明,在盲肠肠绒毛上皮、肠腺及肌层都有虫体寄生,并且有明显的出血病变。     

对柔嫩艾美耳球虫敏感株与抗药株ATP酶活性的检测

采用ATP酶试剂盒对柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)11种敏感株与抗药株的4种ATP酶活性进行了检测。结果表明,鸡球虫不仅具有活跃的ATP酶系统,而且其活性因球虫对药物敏感性的不同而表现强弱不同。敏感株的ATP酶活性最强,而各抗药株的ATP酶活性均有不同程度的降低,尤其是氯化锂(Na -K -ATP酶抑制剂)和利多卡因(Na 通道阻断剂)参与诱导产生的马杜霉素诱导抗药株和盐霉素诱导抗药株的Na -K -ATP酶,Mg2 -ATP酶,Ca2 -ATP酶和Ca2 -Mg2 -ATP酶的活性极显著低于相同来源的抗药株和敏感株的活性。本文研究表明,虫株对药物的敏感性可能与ATP酶活性有关,检测ATP酶活性可作为判别柔嫩艾美耳球虫对离子载体类抗球虫药物敏感性或抗药性的指标之一。     

柔嫩艾美耳球虫野外分离株对4种抗球虫药的耐药性检测

该试验采集安庆、肥东及巢湖3个地区的3株盲肠球虫,进行柔嫩艾美耳球虫(E.tellena)单卵囊的分离,采用鸡体实验法对癸氧喹酯、尼卡巴嗪、球痢灵和磺胺氯吡嗪钠进行耐药性检测,以抗球虫指数(ACI)、病变记分减少率(RLS)、相对盲肠卵囊产量(ROP)和最适抗球虫活性百分率(POAA)4项指标综合判定.结果表明,安庆株、肥东株及巢湖株均对癸氧喹酯敏感,对尼卡巴嗪均完全产生耐药;安庆株对球痢灵中度耐药,对磺胺氯吡嗪钠重度耐药;肥东株对球痢灵轻度耐药,对磺胺氯吡嗪钠重度耐药;巢湖株对球痢灵重度耐药,对磺胺氯吡嗪钠完全耐药.     

买嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)裂殖子超微结构的观察

利用透射电镜对柔嫩艾美耳球虫裂殖子的超微结构进行了观察描述．柔嫩艾美耳球虫裂殖子的表膜由外膜和内膜复合体两层组成,外膜连续,内膜复合体在头部断开形成极环,在其它部位断开形成微孔;裂殖子的膜下微管２４根,起始于极环,向后延伸至细胞核处;裂殖子的头部由顶泡、锥体和极环组成,锥体和顶泡可以伸缩;柔嫩艾美耳球虫裂殖子棒状体３个以上,微线数量很多,二者都由电子致密的结构组成;细胞核位于裂殖子的中后部,外被双层膜,有电子致密的核仁和染色质．     

表面活性素体外抗球虫作用研究

[目的]探讨表面活性素体外抗鸡柔嫩艾美耳球虫的效果。[方法]实验前将柔嫩艾美耳球虫活化,配成2.5×106/ml细胞悬液加入细胞培养板,实验组各孔分别加入不同浓度表面活性素,对照组加入等量MEM,采用定量法作柔嫩艾美耳球虫生长曲线,观察其增长速率。用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法,观察表面活性素对柔嫩艾美耳球虫成活率的影响,用乳酸脱氢酶(LDH)测定法测定表面活性素对柔嫩艾美耳球虫的损伤。[结果]在5 mg/ml表面活性素作用下其20~120 h增殖率为0,5 mg/ml表面活性素可使其破裂。[结论]表面活性素具有较强的抗柔嫩艾美耳球虫作用,有可能成为预防的理想药物。