FAS和HSL mRNA在猪背最长肌的表达及其与肌内脂肪含量的关系

采用100头肥育期苏太猪,屠宰取背最长肌样品.测定各样品肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)含量,并根据IMF含量将样品分成高、中、低3个组,每组取肌内脂肪含量位于中间的20个个体为研究对象,共计60个个体,各组IMF百分含量(%)分别为(6.00±1.14)、(9.46±0.94)和(13.77±2.12).采用RT-PCR方法测定各样品中脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)和激素敏感脂酶(hormone-sensitivelipase,HSL)mRNA水平,并分析其与肌内脂肪含量之间的相关性,以揭示FAS和HSL的表达与肌内脂肪沉积的关系.结果表明,FAS或HSL基因表达水平与肌内脂肪含量之间并无显著的相关(P＞0.05),FAS与HSLmRNA的比值与肌内脂肪含量之间存在着显著的正相关(R=0.464,P＜0.01,P=60).不同组别之间,随着肌内脂肪含量的增加,FAS与HSL比值有升高的趋势.推测FAS和HSL在猪背最长肌肌内脂肪的沉积中发挥着作用.     

脂联素(A dipoQ)及其受体基因(A dipoR1and A dipoR2)在猪背最长肌和腰大肌中的表达差异

脂联素(AdipoQ)是脂肪组织分泌的一种细胞因子,通过血液循环系统到达靶器官与其受体1和2(AdipoR1和AdipoR2)结合,参与脂质和能量代谢及胰岛素敏感性调节方面的生物学过程.利用荧光定量PCR技术检测了210日龄长白猪和荣昌猪的背最长肌和腰大肌组织中Adip0Q、AdipoR1和AdipoR2基因mRNA丰度的表达差异,并分析了基因相对表达量与猪肥胖指数(porcine obesityindex,POI)、肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)含量和背最长肌横截面面积的相关性.结果表明,在不同性别的长白猪和荣昌猪的两种肌肉组织中均检测到AdipoQ、AdipoR1和AdipoR2的表达,但表达量在品种、性别和组织间存在明显差异.AdipoQ和AdipoR1基因表达量与POI和IMF含量呈负相关,与背最长肌横截面面积呈正相关,但均未达到显著水平(P＞0.05),A dipoR2基因表达量与IMF含量呈显著负相关(P＜0.05).研究结果提示,AdipoQ、AdipoR1和AdipoR2表达量与脂肪沉积性状呈负相关,与肌肉生长性状呈正相关,这与其增加脂肪酸氧化,减少脂肪沉积的功能相符.     

猪APOA5和APOC3基因mRNA的表达差异及与肌内脂肪沉积的相关性分析

为了探究载脂蛋白A5（apolipoprotein A5,APOA5）基因和载脂蛋白C3（apolipoprotein C3,APOC3）基因组织表达差异及其与肌内脂肪（intramuscular fat,IMF）沉积的相关性,本研究利用荧光定量PCR方法分析APOA5和APOC3基因mRNA在可乐猪和江口萝卜猪7个组织中的相对表达量及其与IMF沉积的相关性。研究结果表明：APOA5和APOC3基因在可乐猪和江口萝卜猪的7个组织中均有不同程度表达,在肝脏中表达量最高,在皮下脂肪和背最长肌中表达量次之;APOA5基因在可乐猪多数组织中的表达量显著低于江口萝卜猪（p〈0.05）,而APOC3基因未呈现类似规律性;可乐猪中,除心脏外,其它组织均表现为APOC3基因mRNA表达量高于APOA5,江口萝卜猪心脏、肝脏、脾脏、小肠和背最长肌中同样呈现上述表达差异。相关及回归分析表明,IMF沉积量与可乐猪APOC3 mRNA表达丰度呈线性正相关（p〈0.05）。根据研究结果,可以推测APOA5和APOC3基因与IMF沉积有一定关联性。     

山羊FGF1O基因的克隆及其表达分析

成纤维细胞生长因子10(fibroblast growth factor 10,FGF10)是一种极其重要的生长因子,能促进小鼠(Mus musculus)和人(Homo sapiens)前体脂肪细胞的分化.为了获得山羊(Capra hircus)FGF10基因序列,研究其组织表达特性,确定其在肌内前体脂肪细胞分化过程中的表达模式,并分析FGF10mRNA表达水平与肌内脂肪沉积的关系,本研究以简州大耳羊(C.hircus)为实验动物,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术克隆FGF10基因,采用Ⅱ型胶原酶消化获得山羊原代肌内前体脂肪细胞,利用实时荧光定量PCR(qPCR)技术检测FGF10在成年山羊不同组织中的表达差异及其在肌内前体脂肪细胞分化过程中的表达水平,并将基因表达水平与肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)含量进行关联分析.结果显示,克隆得到山羊FGF10基因(GenBank登录号:KT899958)序列1 252 bp,其中开放阅读框642 bp,编码213个氨基酸,与绵羊(Ovis aries)和牛(Bos taurus)的该基因同源性达100％,具有跨膜结构域和信号肽结构.FGF10 在山羊肺脏中表达水平最高,显著高于其他组织(P＜0.05),在脾脏和脂肪中也存在较高水平的表达.FGF10 mRNA在成年羊背最长肌中表达量显著高于羔羊与育成羊(P＜0.05),相关性分析结果显示,FGF10 mRNA表达量与山羊背最长肌IMF含量呈显著正相关(P＜0.05).FGF10 mRNA在肌内前体脂肪细胞中表达水平最低,在诱导分化后2d达到最高.本研究结果为进一步阐明FGF10基因在山羊肌内脂肪沉积中的分子机制提供了理论依据.     

PGC-1α基因在两个品种鸡两种表型肌肉中的差异表达

过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1 (peroxisome proliferator-activated receptor-γ coactivator-1 alpha,PGC-1α)是调控肌纤维类型转换的关键因子,已成为研究畜禽肌肉品质的一个热点基因.为探讨生长速度不同的两个品种鸡(Gallus gallus)生长发育早期两种表型肌肉中PGC-1α的表达情况,本研究利用qRT-PCR和Western blot分别检测PGC-1α mRNA和蛋白在慢生型清远麻鸡和速生型隐性白羽鸡的比目鱼肌(主要含慢肌纤维)和趾长伸肌(主要含快肌纤维)中的发育性(0,1,3,5,7和9周龄)表达变化.结果显示,同一种肌肉组织中PGC-1α mRNA均是0周龄时表达水平最高,显著高于其他各周龄(P＜0.05);肌肉组织中PGC-1α mRNA和蛋白表达趋势虽然均不相同,但其表达均与肌肉表型和品种相关,即相同周龄时,两个品种鸡的比目鱼肌中PGC-1α mRNA和蛋白表达均高于其趾长伸肌,两种表型肌肉中PGC-1α mRNA和蛋白表达均是清远麻鸡高于隐性白羽鸡,且在0周龄时,mRNA表达差异均极显著(P＜0.01).结果提示,鸡骨骼肌PGC-1α表达可能与慢肌纤维含量密切相关,并与鸡肉品质存在关联.研究结果有助于了解PGC-1α在鸡骨骼肌中的作用,并为改良鸡肉品质提供理论依据.     

半胱胺对肥育后期猪脂肪组织沉积的影响

选用体重55kg左右的肥育后期杜×(长×梅)三元商品猪80头,随机分成实验组和对照组,实验组在基础日粮中添加600 mg/kg半胱胺盐酸盐.35 d后进行屠宰实验,并采集血样、背部皮下脂肪组织和下丘脑.用放射免疫法测定血清胰岛素(insulin)、瘦素(leptin)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度,用RT-PCR方法,以18S rRNA作内标,定量分析脂肪组织中生长激素受体(GH-R)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-IR)和leptin mRNA丰度以及下丘脑Ob基因b型受体(Ob-Rb)基因表达.结果显示半胱胺分别使猪的体重和日增重提高1.54%(P＜0.05)和4.83%(P＜0.05),分别使胴体脂率和6、7肋背膘厚下降14.90%(P＜0.05)和20.14%(P＜0.05).实验组血清中leptin水平下降39.33%(P＜0.05),血清中TNF-α水平升高25.00%(P＜0.05),但血清中insulin水平在二组间没有差异.实验猪脂肪细胞leptinmRNA丰度比对照猪减少15.02%(P＜0.05);实验猪脂肪细胞GH-R、IGF-1、IGF-IRmRNA丰度以及下丘脑leptin-RbmRNA丰度与对照猪无显著差异.表明半胱胺可抑制猪肥育后期的体脂沉积,改善胴体品质,而这种作用并不是通过改变脂肪组织中GH-R、IGF-1和IGF-IR的表达来实现的.     

九龙牦牛脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白基因(A-FABP)的克隆及其表达谱

根据普通牛(Bos tarus)脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白基因(A-FABP)序列设计PCR引物,用成年九龙牦牛(B.grunniens)脂肪组织总RNA,经RT-PCR扩增获得了399 bp的A-FABP基因序列(GenBank登陆号:EU815937.1),该序列与普通牛A-FABP基因的同源性高达98.7%,有4个氨基酸发生突变,并导致等电点的变化.利用半定量RT-PCR分析了九龙牦牛A-FABP基因的mRNA表达特性,结果除肺以外,在脂肪、骨骼肌、心、肝、肾和脾中均检测到A-FABP基因的表达,并且在脂肪组织中表达量极显著高于其他组织(P<0.01),在肝和肌肉中亦有较高表达.A-FABP基因在背最长肌中的表达0.5和9岁以上九龙牦牛显著高于3.5和5.5岁九龙牦牛(P<0.05),并且其表达与背最长肌的肌肉脂肪含量存在显著相关性.     

山羊FAM134B基因克隆、序列分析及其mRNA表达与肌内脂肪含量的相关性

FAM134B基因对肌内脂肪沉积有重要的调控作用,为了进一步了解FAM134B基因的结构与功能及其对山羊(Capra hirus)肉质的影响,本研究以川中黑山羊为实验动物,采用RT-PCR技术克隆了山羊FAM134B基因,并对核苷酸序列和氨基酸序列进行生物信息学分析,运用实时荧光定量PCR技术检测了FAM134B mRNA的表达情况,对肌肉组织中FAM134B mRNA表达与肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)含量进行了关联分析。结果表明,山羊FAM134B基因(GenBank登录号:KF684947.1)cDNA全长1 071 bp,编码356个氨基酸,预测蛋白序列含有4个N-连接的糖基化修饰位点,20多个磷酸化位点;系统进化树分析显示,山羊FAM134B核苷酸序列与牛(Bos taurus)的相似性最高;荧光定量PCR分析表明,FAM134B在山羊的心、肝、脾、肺、肾、背最长肌和腿肌中均有表达,其中在肝脏的表达量最高,脾的表达量最低;相关分析显示:山羊背最长肌、腿肌中FAM134B mRNA表达与肌内脂肪含量呈显著正相关。研究结果显示,FAM134B基因可能对山羊肌内脂肪沉积起着重要的调控作用。本研究为进一步了解FAM134B基因的功能及其在反刍动物IMF代谢中的作用和营养调控机制提供一定基础资料。     

绵羊脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白基因(FABP4)cDNA的克隆、表达及其结构模拟分析

为探讨绵羊脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白(FABP4)在不同生长阶段背最长肌中的表达特性,本实验以成年小尾寒羊(Ovis aries)皮下脂肪组织总RNA为实验材料,在脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白基因(FABP4)cDNA保守区域设计1对引物Ff和Fr,采用RT-PCR方法克隆了绵羊FABP4全编码序列,并运用生物软件对FABP4蛋白空间结构进行分析.同时运用实时荧光定量PCR法,对FABP4在皮下脂肪和背最长肌中的表达以及不同日龄在背最长肌中的表达量与背最长肌肌内脂肪含量的相关性进行了初步研究.结果表明:绵羊FABP4基因cDNA长度为464bp,包含1个由399 bp组成的开放阅读框,编码132个氨基酸.生物信息学分析表明,不同物种间FABP4氨基酸序列具有较强的保守性,蛋白质空间结构呈2个α螺旋和10个β折叠围绕的桶状构型.实时荧光定量PCR试验表明,FABP4基因在160和200日龄绵羊背最长肌中的表达量明显高于90日龄背最长肌的表达量(P＜0.05);且在90、120、160和200日龄绵羊背最长肌中的表达量与相应日龄的背最长肌肌内脂肪含量呈正相关(R2=0.7196,P＜0.01).本研究结果表明,调控FABP4基因在背最长肌的表达是改善绵羊肉质的潜在途径.     

猪肌内前体脂肪细胞的体外培养

本研究建立了猪肌内前体脂肪细胞的体外培养模型,以期为更深入研究猪肌内脂肪代谢提供新的实验方法。实验采集出生5d仔猪的背最长肌组织,Ⅱ型胶原酶消化2h后400目筛网过滤,然后1500r/min离心,沉淀用含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基(完全培养基)重悬后差速贴壁2h,弃去原有培养基,加入新的含10%胎牛血清的DMEM/F12培养基(完全培养基)进行培养。细胞经传代且完全融合48h后,在完全培养基中添加0.5mmol/L3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX),1μmol/L地塞米松(DEX),10mg/L胰岛素(INS)进行诱导培养48h,再换以含10mg/L胰岛素的完全培养基培养48h,最后换完全培养基继续培养,直至90%的细胞出现脂滴。培养结果:细胞贴壁生长,呈短梭状或棱形,经诱导培养后细胞充脂率高。经形态学观察、生长曲线及油红O脂肪染色法鉴定,证明是肌内前体脂肪细胞。普通PCR及实时荧光定量PCR均检测到了脂联素基因的表达。本研究通过差速贴壁法成功培养了猪肌内前体脂肪细胞,并通过诱导培养重现了其分化、成熟的全过程。     

人工养殖鲟鱼生长与肌肉品质的研究进展

鲟鱼肉和卵极具营养价值,鲟鱼养殖规模稳定扩大,中国已经成为世界上最大的鲟鱼养殖国家。尽管国内外在鲟鱼保护生物学和应用技术方面取得了一系列科研成果,但对养殖鲟鱼的生长和肌肉品质的发育规律所知甚少。本文综述了国内外养殖鲟鱼异速生长模式和肌肉品质分析的研究现状,发现现有鲟鱼生长于肌肉品质的研究主要集中于幼鱼或某一个生长期,缺少系统性和完整性。因此,建议针对主要养殖鲟鱼品种,从幼鱼到成鱼系统开展养殖鲟鱼生长与肌肉品质变化规律的研究,揭示鲟鱼肌肉品质的生长发育规律。     

早期限饲对肉鸡肌肉生长及肌纤维类型的影响

采用隔日限饲的方式对1～14日龄三黄肉鸡仔鸡进行早期限饲处理,后恢复自由采食直至63日龄试验结束,以分析早期限饲对肉鸡肌肉生长和肌纤维类型的影响。分别于14和63日龄随机选取对照组和早期限饲组肉仔鸡各20羽,屠宰后采样,记录腓肠肌外侧头重量并采用相对定量RT-PCR的方法检测其不同类型肌纤维肌球蛋白重链mRNA基因表达。结果表明,早期限饲组体重及腓肠肌外侧头重均低于对照组(P<0.05,n=20)。14日龄早期限饲组慢肌及快红肌肌球蛋白重链mRNA表达水平显著高于对照组(分别为P<0.01和P<0.05,n=10),快白肌肌球蛋白重链基因表达显著低于对照组(P<0.05,n=10)。63日龄早期限饲组慢肌肌球蛋白重链mRNA基因表达显著低于对照组(P<0.05,n=10),快红肌和快白肌肌球蛋白重链与对照组相比均无差异(P>0.05,n=10)。结果提示:(1)早期限饲阻碍了肌纤维类型的转化,延缓了肌肉的发育及增重,最终引起整体体重的下降;(2)早期限饲对肌肉肌纤维成分具有持久影响,其影响一直持续到63日龄上市。     

外源生长激素对尼罗罗非鱼生长、骨骼肌纤维增生及肥大的影响

生长激素是影响动物生长发育的最重要内分泌激素,为了探讨外源生长激素对尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)生长、骨骼肌纤维增生以及肥大的影响,本实验对同一批次尼罗罗非鱼幼鱼进行为期7周的外源重组人生长激素(hGH)肌肉注射,并设置了磷酸盐缓冲液(PBS)注射对照组,每周注射1次,测量体重、体长等表型生长指标,同时,隔两周采集背部肌肉,利用石蜡切片技术分析骨骼肌背侧第一肌节中肌纤维数目与面积的变化.结果显示:(1)注射后第1周起,实验组鱼的体重、体长即高于对照组,但差异不显著(P＞0.05);第5周起,实验组鱼体重显著高于对照组鱼(P＜0.05),第7周起,实验组鱼体长极显著高于对照组鱼(P＜0.01).(2)注射后第1周起,实验组鱼肌纤维数目、总面积均高于对照组鱼,差异不显著(P＞0.05);第5周起,实验组鱼肌纤维的外源性增生和肥大现象极显著(P＜0.01).研究结果表明,外源生长激素对尼罗罗非鱼的表型生长、骨骼肌肌纤维的增生与肥大均有显著促进作用,肌肉生长中以肥大生长更为明显.     

不同生长阶段墨瑞鳕脂肪酸组成及主成分分析

为比较不同生长阶段墨瑞鳕肌肉中脂肪酸组成的变化,本研究通过气相色谱技术测定墨瑞鳕幼鱼、成鱼、亲鱼肌肉中脂肪酸含量,并对脂肪酸组成进行主成分分析。结果表明,3个不同生长阶段墨瑞鳕的不饱和脂肪酸(UFA)总量分别为52.2%、58.2%、60.1%;在高度不饱和脂肪酸(HUFA)中DHA含量均最高。随着鱼体生长,墨瑞鳕棕榈油酸、油酸、亚油酸、亚麻酸含量均呈上升趋势,从高到低依次为亲鱼>成鱼>幼鱼;肉豆蔻酸、花生一烯酸、花生四烯酸、EPA、DHA 含量呈下降趋势,从高到低依次为幼鱼>成鱼>亲鱼;UFA总量和单不饱和脂肪酸(MUFA)含量呈上升趋势,从高到低依次为亲鱼>成鱼>幼鱼;多不饱和脂肪酸(PUFA)总量和必需脂肪酸(EFA)总量含量呈先升后降趋势,从高到低依次为成鱼>亲鱼>幼鱼。墨瑞鳕不同生长阶段脂肪酸含量大部分存在显著差异,特别是幼鱼与成鱼的脂肪酸含量(除二十碳三烯酸外)均存在显著差异;肉豆蔻酸、花生一烯酸、花生四烯酸、EPA和DHA等5种脂肪酸是墨瑞鳕的主要特征脂肪酸,这5种主要特征脂肪酸之间均互呈强正相关。随着墨瑞鳕的生长发育应及时提高相应阶段功能性脂肪酸的比例,降低相应阶段呈强负相关的主要特征脂肪酸的比例。本研究结果为墨瑞鳕的开发利用以及饲料营养需求等提供了理论参考。     

利用单根肌纤维法分离和培养猪骨骼肌卫星细胞及其成肌诱导分化

建立单根肌纤维法体外培养猪骨骼肌卫星细胞的体系,了解其增殖和成肌特性。通过Ⅰ型胶原酶消化,从猪骨骼肌中分离完整的单根肌纤维并培养,用细胞免疫荧光鉴定肌纤维上的卫星细胞,随后对从单根肌纤维上游离出来的卫星细胞进行细胞免疫荧光染色,传代培养,成肌诱导分化和Western blot分析骨骼肌卫星细胞成肌特异性蛋白的表达。结果显示:分离并培养的单根肌纤维上附着有卵圆形的细胞,并随时间的推移,细胞缓慢向外迁移并增殖,卫星细胞特异性标志基因对盒转录因子(Paired protein box,Pax7)和成肌分化抗原(Myogenic Differentiation Antigen,MyoD)免疫荧光染色呈阳性,且阳性率达到90%以上。成肌诱导分化后,细胞开始汇合,并呈方向性生长,最终形成多核肌管,且成肌特异性标志基因Myogenin和myosin heavy chain(MyHC)表达呈阳性。MyoD蛋白高表达于增殖期,而Myogenin和MyHC在进入分化期才表达。该实验成功建立了猪骨骼肌单根肌纤维的体外培养方法并获得了高纯度的卫星细胞,为骨骼肌卫星细胞进行活体移植治疗相关疾病研究提供了实验材料。     

Growth of Crop and Weeds in Growth Chambers and Outdoors

The early growth of spring barley (Hordeum ulgare L.), Brassica rapa L. ssp. oleifera (DC.) Metzger, Stellaria media (L.) Vill. and Viola arvensis Murray in growth chambers and in shading cages outdoors at different irradiance levels was compared. Leaf area and shoot dry weight were lower outdoors than in growth chambers at similar irradiance and temperature. A simulation model with temperature and irradiance responses derived from growth-chamber experiments was used to test whether outdoor growth could be estimated properly. The correlations of the regressions between simulated and measured values of leaf area index (LAI) and shoot dry weight were high. However, with some exceptions, overestimations occurred, more for shoot dry weight than for LAI, and more for 100% daylight than for lower irradiance. The reasons for this are discussed.     

不同性别河北柴鸡早期生长规律及其生长曲线拟合

本研究运用Logistic、Gompertz和Bertalanffy三种非线性模型对不同性别河北柴鸡早期生长规律和生长曲线进行分析及拟合比较。结果表明,3种曲线模型拟合度均达到0.99以上,但Gompertz曲线模型在拟合度和预测极限生长量、拐点周龄和最大周增重等方面相对较好。进一步分析表明,河北柴鸡公鸡的极限体重和拐点体重均高于母鸡,拐点周龄性别间差异不大,公鸡最大周增重与实际观测值接近。本文有助于了解不同性别河北柴鸡各自的生长模式及其对营养、环境的需求,为开展规模化饲养提供参考。     

猪脂肪和肌肉组织的DNA甲基化图谱

最近,由深圳华大基因研究院和四川农业大学主导,中、美、英、加四国共12个单位共同参与的研究取得了重大突破,研究人员发现表观遗传学,特别是DNA甲基化在肥胖的发展中发挥着重要作用。研究人员以猪(Susscrofa)为模式动物,探索了3个不同猪种内8个部位的脂肪组织和2个部位的肌肉组织内     

植物生长调节剂对干旱胁迫下大豆幼苗生长的影响

采用盆栽试验,研究了在模拟干旱胁迫下喷施植物生长调节剂对大豆幼苗生长发育和生理生化指标的影响。结果表明,植物生长调节剂可促进大豆幼苗茎叶生长和主根伸长,增加侧根数,加大根冠比,提高叶绿素含量、脯氨酸含量和过氧化物酶(POD)活性,从而增强了植株的抗旱能力。喷施宝、云大120、地中宝、福施壮4种植物生长调节剂对不同大豆品种幼苗生长的影响基本一致,以喷施宝的效果最好,其次为云大120。