脱氧雪腐镰刀菌烯醇对PC12细胞凋亡的影响

[目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)诱导PC12细胞凋亡及对相关基因Bcl-2、Bax、Bid mRNA和蛋白cleaved-Caspase 3、cleaved-Caspase 9表达水平的影响。[方法]用不同质量浓度的DON(0、125、250、500、1 000和2 000 ng·m L~(-1))对PC12细胞染毒24 h,采用透射电镜观察、流式细胞术、荧光定量PCR、Western-blot等方法,研究DON对PC12细胞的超微结构、凋亡率、凋亡相关基因及蛋白表达的影响。[结果]不同浓度的DON均可诱导细胞凋亡,各试验组细胞凋亡率均极显著高于对照组(P0.01),并随着染毒剂量的增加而升高,在1 000 ng·m L~(-1)时达到峰值;与对照组相比,各试验组Bax mRNA表达水平和Bax/Bcl-2值均极显著增加(P0.01),Bcl-2 mRNA表达水平在DON浓度超过500 ng·m L~(-1)时极显著下降(P0.01),而Bid mRNA表达水平在DON浓度超过250 ng·m L~(-1)时极显著下降(P0.01);Western-blot检测结果显示,各试验组cleaved-Caspase 9蛋白表达量均极显著高于对照组(P0.01),而cleaved-Caspase 3蛋白表达量在DON浓度超过500 ng·m L~(-1)时极显著增加。[结论]DON能够诱导PC12细胞发生凋亡,凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Bid及蛋白Caspase3、Caspase9等参与了DON诱导PC12细胞凋亡的调控。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇降解菌的分离和鉴定

【目的】分离筛选能够降解脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)的细菌,以期能在该毒素的生物解毒处理中得到应用。【方法】用高产毒禾谷镰刀菌F-25接种灭菌的小麦籽粒,培养后获得DON毒素;然后以DON毒素为唯一碳源进行DON毒素降解菌的驯化富集培养,得到能够降解DON毒素的混合菌群,逐一对分离到的细菌进行DON毒素降解能力检测,得到能够降解DON毒素的菌株。【结果】筛选得到的菌株DDS-1对液体培养基中的DON毒素的降解能力达95%以上,显著高于其它菌株;从形态、生理生化特性以及16S rDNA序列进行分析,DDS-1菌株初步鉴定为徳沃斯氏菌Devosia sp.;把DDS-1添加到小麦饲料中后,饲料中的DON毒素降解率达到75.47%。【结论】选出的DON高效降解菌株徳沃斯氏菌,不但对液体培养基中的DON毒素具有很好的降解作用,对饲料中DON毒素也有很好的降解效果。这为真菌毒素的生物脱毒处理提供了可行的方法。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对PC12细胞自噬的影响

【目的】研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对PC12细胞自噬的影响。【方法】以不同质量浓度(0(CK),125,250,500,1 000和2 000ng/mL)的DON处理PC12细胞24h后,采用倒置显微镜、透射电镜、免疫荧光、荧光定量PCR、Western-blot等技术,研究DON对PC12细胞形态和超微结构、LC3聚点率及自噬相关基因classⅢPI3 K、Beclin-1、P62 mRNA和蛋白LC3Ⅱ、P62、classⅢPI3K表达的影响。【结果】不同质量浓度的DON均可诱导PC12细胞自噬,各试验组细胞自噬水平均高于对照组(CK),并随着DON质量浓度的增大而先增加后下降,在DON质量浓度为1 000ng/mL时达到峰值。与对照组相比,各试验组classⅢPI3 K mRNA和Beclin-1mRNA表达水平均极显著增高(P0.01),P62mRNA表达水平随着DON质量浓度的增加总体呈下降趋势,差异达显著(P0.05)或极显著(P0.01)水平。Western-blot结果显示,LC3Ⅱ蛋白表达量在DON质量浓度为1 000ng/mL时最高,与对照组相比,250~2 000ng/mL DON处理组的LC3Ⅱ蛋白表达量显著(P0.05)或极显著(P0.01)增加;500~2 000ng/mL DON处理组classⅢPI3K蛋白表达量较对照组显著(P0.05)或极显著(P0.01)增加,其中以1 000ng/mL DON处理组表达量最高;与对照组相比,不同质量浓度DON处理组P62蛋白表达量均极显著降低(P0.01),其中以1 000ng/mL DON处理组最低。【结论】DON能够诱导PC12细胞发生自噬,自噬相关基因classⅢPI3 K、Beclin-1、P62及蛋白LC3Ⅱ、P62、classⅢPI3K等参与了DON诱导PC12细胞自噬的调控。     

饱和臭氧水对脱氧雪腐镰刀菌烯醇的降解研究

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)是由禾谷镰刀菌产生的一种次生代谢物,其在粮谷类及其制品、饲料中污染较常见,对人畜有一定的急、慢性危害。因此,研究安全、有效降解食品和饲料中污染的脱氧雪腐镰刀菌烯醇方法,对保证食品安全具有重要的意义。从充臭氧的时间、水的温度、以及p H等探讨了影响臭氧在水中饱和度的因素,以及采用饱和臭氧水对脱氧雪腐镰刀菌烯醇降解的效果。实验结果表明:在50 mL超纯水中,以0.5 L/min的速度充臭氧5 min后,当温度为0℃,p H值为4.0时,臭氧浓度可以达到饱和,此时臭氧含量为73.2 mg/L。用1 mL该饱和臭氧水分别对5μg和10μg的DON标准品进行降解处理,其降解率分别达到99.0%和98.5%。然后采用该饱和臭氧水对面粉中加标的DON进行了降解试验,DON的降解率为82.6%。最后又对实际阳性的小麦、玉米、面粉3种样品中的DON进行了降解试验,经高效液相色谱测定其降解率在82.46%～83.70%。由此得出,饱和臭氧水能有效降解食品中的DON,降解后的DON含量均低于国家限量标准(1 mg/kg)。     

小麦及小麦粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究

1 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 脱氧雪腐镰刀菌烯醇,是由产毒真菌产生的一种次级代谢产物,因易引起猪的呕吐,又称为呕吐毒素,其主要产毒真菌为禾谷镰刀菌和黄色镰刀菌等,主要污染小麦、大麦、燕麦、玉米等谷物. 世界范围内谷物中脱氧雪腐镰刀菌烯醇污染多发易发、相当广泛,主要原因是谷物在田间经常受到其产毒真菌禾谷镰刀菌(导致小麦赤霉病和...     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对小麦愈伤组织SOD活力的影响

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对小麦愈伤组织ＳＯＤ活力的影响宋玉立１陈利锋１聂理２徐朗莱２徐雍皋１（１南京农业大学植物保护学系，２理学院，南京２１００９５）ＥＦＦＥＣＴＯＦＤＥＯＸＹＮＩＶＡＬＥＮＯＬＯＮＴＨＥＡＣＴＩＶＩＴＩＥＳＯＦＳＵＰＥＲＯＸＩＤＥＤＩＳ...     

小麦中镰刀菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇污染现状与防控研究进展

脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）,又称呕吐毒素,是由小麦赤霉病菌禾谷镰刀菌复合群（Fusarium graminearum species complex）产生的单端孢霉烯族毒素,毒素在小麦籽粒中累积。作为B型单端孢霉烯族毒素,DON可以引起呕吐、拒食、腹泻、出血甚至死亡, 对猪的危害尤其严重。近年来,小麦赤霉病在世界各地高频率流行,尤其在中国长江中下游小麦生产区以及黄淮部分小麦产区、美国中西部小麦主产区,导致小麦中DON毒素严重超标,并引发了严重的食品安全问题。本文对国内外小麦中DON毒素的污染现状、产毒镰刀菌种类及其化学型的分布及其趋势、毒素产生的调控机制以及小麦中DON毒素的防控途径进行了论述,希望有助于镰刀菌毒素污染小麦质量安全的风险评估、监管以及科学处置。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对蛋鸡生产性能、血液指标和抗氧化能力的影响

[目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对高产蛋鸡生产性能、蛋品质、血常规、血液生化指标以及肝脏抗氧化能力的影响。[方法]选用26周龄体质量为(1.90±0.2)kg、产蛋率一致的海兰蛋鸡120只,随机分为6组,每组4个重复,每个重复5只,对照组每天灌胃等量生理盐水,试验组每天分别灌胃1、5、10、20和50 mg·kg~(-1)DON,连续灌服6周。[结果]与对照组相比,不同质量浓度DON处理组蛋白高度和哈夫单位均显著升高,白细胞(WBC)和血小板(PLT)数量均显著降低(P0.05或P0.01)。DON剂量为10 mg·kg~(-1)时,与对照组相比,蛋鸡产蛋率极显著降低(P0.01),血清中红细胞(RBC)数量、血红蛋白(HGB)含量和红细胞压积(HCT)极显著上升至最高(P0.01);DON剂量高于10 mg·kg~(-1)时,与对照组相比,血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)活性和尿素(UREA)浓度及肝脏组织中一氧化氮(NO)和丙二醛(MDA)浓度显著提高(P0.05或P0.01),蛋壳颜色和肝脏组织中总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性显著降低(P0.05或P0.01),但5 mg·kg~(-1)DON组的T-AOC水平和SOD活性显著提升(P0.05)。[结论]DON会显著影响蛋鸡的凝血功能,当DON剂量达到10 mg·kg~(-1)会显著降低蛋鸡产蛋率和蛋品质,引起肝脏和肾脏组织损伤,对肝脏的抗氧化能力也具有显著抑制作用。     

玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量的测定能力验证

[目的]通过实验室能力验证活动分析了影响玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)检测结果的主要因素。[方法]依据GB 5009.111—2016第二法:免疫亲和层析净化HPLC法检验并优化前处理条件。[结果]采用5倍稀释浓度提取1 h和3 mL/min的净化速度,能力验证样品中DON含量为571μg/kg, RSD为0.25%。[结论]通过了中国食品药品检定研究院组织实施的NIFDC-PT-228《玉米粉中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定》能力验证,与中国食品药品检定研究院统计Z比分值为0.70,能力验证结果为满意,细化完善了国标测定脱氧雪腐镰刀菌烯醇的操作,为广大检验检测人员提供参考。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对仔猪海马神经细胞凋亡及线粒体膜电位的影响

[目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)对仔猪海马神经细胞的凋亡及其信号通路的影响。[方法]体外培养仔猪海马神经细胞至对数生长期,以不同质量浓度的DON(0、125、250、500、1 000和2 000 ng·mL~(-1))进行处理,采用倒置显微镜和透射电镜观察细胞的形态学变化及线粒体结构,CCK-8试剂盒检测细胞的存活率,流式细胞仪检测线粒体膜电位的变化,ELISA试剂盒检测caspase-3酶活性,荧光定量PCR(RT-qPCR)检测Bcl-2和Bax mRNA的表达水平。[结果]DON可显著抑制仔猪海马神经细胞存活率并诱导细胞发生明显的形态学变化,且具有剂量和时间效应;DON可降低线粒体膜电位,增强caspase-3酶活力,并通过上调Bax mRNA和下调Bcl-2 mRNA的表达,增加Bax/Bcl-2值。[结论]DON可通过引起线粒体功能障碍,激活caspases-3并调节Bcl-2家族基因,从而诱导仔猪海马神经细胞凋亡。     

脱氧雪腐镰刀菌烯醇对雏鸡脂质过氧化反应及脑部形态结构的影响

[目的]本试验旨在研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)对雏鸡脑组织形态结构、血清及脑组织中氧化与抗氧化指标的影响,探讨DON的神经毒理作用。[方法]选取120只健康的1日龄海兰蛋雏公鸡,预饲1周后,按单因素试验设计,随机分成4组,每组30只。对照组和试验组饲喂相同的全价饲料,试验组中的低剂量组、中剂量组和高剂量组按采食量分别添加0.27、1.68和12.21 mg·kg-1剂量的DON灌胃染毒,对照组灌服等量的生理盐水,试验从第8天开始,每隔7 d染毒1次,共染毒5次。试验期为36 d。试验结束时,所有雏鸡经翅下静脉采血,分离血清,用于测定过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量等指标;同时每组随机剖杀20只鸡,迅速取脑组织,一部分用于观察脑组织的病理变化及神经细胞的超微结构,另一部分用于测定氧化与抗氧化指标。[结果]与对照组相比,试验组雏鸡血清CAT、SOD和脑组织SOD、GSH-Px活性及NO含量显著降低(P0.05),各试验组雏鸡血清MDA和高剂量组脑组织MDA含量显著升高(P0.05),中剂量组和高剂量组血清T-AOC、GSH-Px和脑组织CAT活性及NO含量显著降低(P0.05),高剂量组脑组织T-AOC活性显著降低(P0.05);DON可引起试验组雏鸡脑组织产生不同程度的噬神经现象,并伴随部分神经纤维断裂;大脑皮质超微结构显示,随着染毒剂量的增加,试验组鸡脑组织神经元胞体出现不同程度的变性,且与剂量呈正相关。[结论]DON可引起雏鸡血清及脑组织脂质过氧化反应,造成脑组织不同程度损伤,即DON可对雏鸡产生一定的神经毒性。     

浅析脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量随玉米生霉粒的变化关系

为了了解玉米脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量与生霉粒含量之间的关系,本文通过对新收获玉米在特定的温湿度条件下保存,并产生生霉,通过对不同生霉含量的玉米的脱氧雪腐镰刀菌烯醇进行测定,并对测定结果进行分析,总结出在特定温度下,玉米脱氧雪腐镰刀菌烯醇随玉米生霉粒含量的增加而增加,为粮食企业仓储环节安全储存建言献策。     

小麦籽粒脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)含量影响因素相关性分析

为探明小麦籽粒脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)含量与病情指数、病粒率、籽粒麦角甾醇含量的相关性,对52个小麦品种(系)自然发病病情指数(以下简称病指)、病粒率、籽粒麦角甾醇含量和DON含量进行相关性分析以及聚类分析。结果表明,籽粒DON含量与病粒率、麦角甾醇含量和病指均呈极显著的正相关关系,相关系数分别为0.858(P0.01)、0.792(P0.01)、0.512(P0.01);基于病指、病粒率和籽粒DON含量,可将52个小麦品种(系)大致聚类为7种不同抗感类型。可见,依据田间病指,尤其是病粒率,可预测籽粒DON含量情况;同时依据病指、病粒率和籽粒DON含量可初步判定不同品种(系)的抗感性类型,在生产实践中具有一定的实用性。     

猪胃组织中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的液质联用检测

以脱氧雪腐镰刀菌烯醇毒素(Deoxynivalenol,DON)为检测对象,建立了一种检测猪胃组织中DON的液质联用分析方法。样品经乙腈:水(80:20,V/V)提取,varian Bond Elut Mycotoxin净化柱净化后,收集提取液并于45℃水浴氮气吹干,乙腈:水(20:80,V/V)溶解,经0.22μm微孔滤膜过滤后,以反相C18柱为色谱柱,甲醇、纯水溶液梯度洗脱为流动相,电离离子源电离后质谱检测。结果显示,DON在2～100 ng/mL范围内线性关系良好(r2>0.99);检测限(LOD)和定量限(LOQ)分别为2μg/g和5μg/g;低、中、高浓度(5、20、50μg/g)的回收率分别为71.8%、89.5%、87.4%,RSD分别为6.75%、9.82%、6.39%。表明该方法操作简单,灵敏度高,适用于猪胃组织中DON的检测。     

免疫组织化学法定位猪肾脏中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的研究

脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)是目前全球污染谷物最严重的真菌毒素之一。在所有的易感动物中,以猪最为敏感。该研究采用DON标准品,通过静脉注射的途径,研究该毒素在猪体内肾脏的分布情况,为毒素的残留提供依据。选用10头健康阉公猪,随机分为2组,一组经乳静脉注射DON,注射剂量为75μg/kg体质量,另一组经乳静脉注射生理盐水。注射完成后开始计时,并观察记录猪的反应情况,待30min后放血宰杀,并迅速取肾脏,采用免疫组化法定位肾脏中DON的分布情况。研究结果显示,染毒剂量75μg/kg体质量组,静注后约5～10min开始出现明显的异常反应。具体表现为:狂躁不安,不停的磨牙,咀嚼,之后大量流涎,随之出现呕吐等症状,这一过程的持续时间对该组猪来说存在个体差异。免疫组化法定位结果显示,在肾小囊的壁层见有DON的分布。