酶联免疫吸附法在检测中的应用

酶联免疫吸附法(ELISA)是一种基本的酶免疫分析方法,起始于1971年Engval用碱性磷酸酯酶标记的3 gG测定1gG,随后这种方法得到迅速发展和不断完善.由于ELISA具有选择性好、灵敏度高、结果判断客观准确、实用性强等优点,目前已广泛应用于临床医学、生物学和分析化学等领域.……     

重组CP多克隆抗体在马铃薯卷叶病毒DAS-ELISA检测中的应用

先经过饱和硫酸铵沉淀分离,再用Protein G亲和层析柱纯化,从马铃薯卷叶病毒(PLRV)重组CP作抗原制备的抗血清中获得了高纯度多克隆抗体( IgG),并用戊二醛法一步法进行碱性磷酸酶的标记获得了酶标抗体(IgGAP).将纯化的抗体与酶标抗体用于感染PLRV病叶的检测,DAS-ELISA反应呈阳性,结果表明,用重组...     

酶联免疫吸附测定(ELISA)需要注意的问题

由于酶联免疫吸附测定(ELISA)具有样品前处理简便、快速准确、所需仪器廉价等优点,已广泛应用于免疫学检验的各领域中。国家标准GB/T5009.111-2003、GB/T 5009.22-2003规定了ELISA方法作为粮食行业中呕吐毒素、黄曲霉毒素     

酶联免疫吸附试验在口蹄疫诊断中的研究进展

防治口蹄疫的关键是做出及时、准确的诊断。酶联免疫吸附试验(ELISA)有诸多优点,因此不论在实验室还是在田间,都是常用的口蹄疫诊断方法。介绍了传统ELISA和新型ELISA方法的原理、特点及最新研究进展。传统ELISA包括液相阻断ELISA、间接ELISA、固相竞争ELISA、间接夹心ELISA。新型ELISA包括单克隆抗体ELISA、PCR-ELISA、生物素-亲和素ELISA及Dot-ELISA。ELISA的发展方向应当是既灵敏稳定,又操作方便、易于实现自动化。随着技术的进步,ELISA在临床诊断和流行病学调查中将会有更加广泛的应用。     

马铃薯A病毒重组CP多克隆抗体的制备及其在DAS-ELISA检测中的应用

利用重组CP作抗原制备出马铃薯A病毒的多克隆抗体,并将其用于DAS-ELISA检测。以p ET22b(+)为起始载体,构建了PVA-CP基因的原核表达载体p ET22b-ACP,重组菌BL21(p ET22b-ACP)经IPTG诱导表达出了分子量为30 k Da的特异性重组CP。利用高纯度重组CP为抗原免疫家兔,制备出了效价为1∶512 k的抗血清。以PVA重组CP为抗原,用间接ELISA与直接ELISA分别测定重组CP纯化抗体(Ig G)及其碱性磷酸酶标记物(Ig G-AP)的活性,用DAS-ELISA测定2种抗体的活性,目测及OD值测定结果表明3种ELISA测定反应都呈阳性。以PVA病毒阳性标准物为抗原,在上述3种ELISA测定中也呈阳性反应,重组CP多克隆抗体及其酶标抗体与PVA有较强的反应信号。利用重组CP制备的多克隆抗体及其酶标抗体达到了马铃薯A病毒DAS-ELISA检测的要求。     

酶联免疫吸附试验检测呕吐毒素测量不确定度评定的探讨

为探讨酶联免疫吸附试验(E L I S A)检测呕吐毒素(DON)测量不确定度的评定,按照GB/T5009.111-2003,分析测量过程的不确定度分量,合成各试剂盒检测系统的扩展不确定度。结果表明,总扩展不确定度是(K=2)。含有测量不确定度的结果基本能反映测量的真实水平,有助于了解目前国产E L I S A试剂手工法检测低水平H B s A g的实际情况。     

酶联免疫吸附法快速检测谷物中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇

应用ELISA法快速检测麦类、谷物及其制品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON),最低检出限为10μg/L,检测范围为10-1 000μg/L。用10%甲醇水溶液提取含DON的小麦及玉米样品,回收率为86～93%,变异系数为4.1%～17.4%。     

酶联免疫吸附分析法测定黄瓜中的甲基对硫磷

采用自制多克隆抗体,考察了不同离子强度和不同甲醇含量对竞争反应的影响,并对反应体系进行了优化,最终建立了黄瓜中甲基对硫磷的残留检测ELISA方法。实验表明,甲基对硫磷对抗体竞争性结合的I50为0.13 mg/L,方法检出限I20 为6.7 μg/L。除倍硫磷与杀螟硫磷表现了一定的交叉反应外,其它结构相类似的有机磷农药均无交叉反应。黄瓜样品经简单前与处理后分别采用ELISA和GC测定,用ELISA方法测得黄瓜中甲基对硫磷的添加回收率为83.10%~93.46%,C.V为6.61%~10.36%,最低检出限为 0.003mg/kg,与GC测定数据基本相符,符合农药残留分析的要求。     

石房蛤毒素酶联免疫吸附测定方法的研究

建立间接竞争酶联免疫吸附分析方法(idc-ELISA)测定石房蛤毒素(Saxitoxin,STX)。采用碳化二亚胺法,将半抗原STX分别与卵清蛋白(OVA)和牛血清蛋白(BSA)偶联,得到免疫抗原STX-OVA和包被抗原STX-BSA。用STX-OVA免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。确定的最佳包被抗原质量浓度为2μg/mL,多抗的工作浓度为1∶800,羊抗鼠二抗工作浓度为1∶1 000。回归方程Y=0.136 6X-0.015 1,R2=0.990 1。该方法的灵敏度达到5.8μg/mL,检出范围在0.2～926μg/mL。     

食品安全检测中的酶联免疫技术应用

酶联免疫技术(ELISA)是在免疫学和细胞工程学基础上发展的一种微量检测技术,具有操作简便、灵敏性高等优点,已在食品农药残留、重金属污染、食品添加剂检测等诸多方面表现出了独特的优势,在食品安全检测领域有着广阔的应用前景。分析酶联免疫技术的原理和方法,从生物毒素、药物残留、致病微生物、重金属污染和食品的品质等方面评述其在食品安全检测中的应用。     

辣椒抗马铃薯Y病毒(PVY)研究进展

马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)是限制辣椒生产的主要病毒病害之一,该病毒是马铃薯Y病毒组(Potyvirus)的典型代表,能够侵染辣椒等茄科作物,造成重大的经济损失。应用抗病资源、选育抗病品种是克服PVY对辣椒危害最为经济有效的方法。文中综述了辣椒PVY病毒的发现、流行和检测与分类,并针对辣椒抗PVY育种工作描述了抗性鉴定方法、抗原筛选、抗性遗传、分子定位和标记开发的研究进展,介绍了PVY抗性基因与病毒的互作机理,并就辣椒抗PVY育种中存在的问题及未来研究方向进行了讨论。     

双重RT-PCR同步检测马铃薯A病毒和马铃薯卷叶病毒

根据马铃薯A病毒全基因序列和马铃薯卷叶病毒衣壳蛋白区序列分别设计PVA和PLRV的特异性引物,应用双重RT-PCR同步检测马铃薯A病毒和马铃薯卷叶病毒,分别得到300bp和222bp大小的扩增片段.试验从反转录、PCR等方面对双重RT-PCR同步检测2种病毒进行了探索和优化.结果表明反转录反应中dNTPs浓度、2种病毒下游引物浓度比例以及PCR反应中Mg2+浓度对双重RT-PCR同时检测PVA和PLRV有较大的影响.     

马铃薯卷叶病毒(PLRV)检测及系统进化关系的研究进展

马铃薯卷叶病毒（PLRV）是导致马铃薯严重减产的世界性病毒病害，本文介绍了PLRV的研究状况，检测方法，不同分离物CP序列同源性进行了系统进化树比较并对这些研究进行了总结。     

酶联免疫法(ELISA)测定月饼中黄曲霉毒素B_1

采用酶联免疫法对月饼中黄曲霉毒素B_1含量进行测定,并对该方法的线性、灵敏度、回收率和重现性进行验证;黄曲霉毒素B_1标准品在1.00~50.00 g/kg范围内线性良好,Y=-40.291C+88.365,R~2=0.998 4,该方法对黄曲霉毒素B_1的最低检出含量为1.00 g/kg,不同含量添加所得回收率为96.7%~105.0%,重复性好,精密度为1.96%。通过对9个不同产品特性月饼中黄曲霉毒素B_1的测定,发现所有样品均有检出,但黄曲霉毒素B_1的含量均小于5.00 g/kg。结果表明,酶联免疫检测方法测定快速、定量准确、重现性好,可高效率地定量检测大量市售月饼中黄曲霉毒素B_1的含量。     

马铃薯病毒种类及主要病毒检测方法

本文对北疆地区马铃薯主要病毒的特性和致病症状进行了描述,并简要介绍了马铃薯主要病毒的检测技术。     

间接竞争酶联免疫吸附法应用于采后水果组织中葡萄孢菌的定量分析

灰霉病是导致水果采后巨大经济损失的主要病害,其致病菌为葡萄孢菌。葡萄孢菌通常以潜伏侵染的形式存在,一旦病原菌发展蔓延则引起健康果实的迅速腐烂变质。因此,开发快速、灵敏的葡萄孢菌检测和定量分析方法势在必行。本文介绍了一种用于测定苹果(Red Delicious)、鲜食葡萄(Pink Moscatel)和梨(William’s)组织中葡萄孢菌的间接竞争酶联免疫吸附法(ELISA)。该方法的原理是基于水果组织中葡萄孢菌抗原与交联固定在微量滴定板表面的葡萄孢菌纯化抗原对于单克隆抗体结合位点的竞争作用。为了验证该方法的有效性,进行了如选择性、线性分析、精密度、准确性、灵敏性等大量的参数测定。该方法对于葡萄孢菌抗原的检测限为0.97μg.mL-1,为了保证测定的稳定性,事先将纯化抗原固定长达4个月。应用该方法可以对尚未表现症状的任何水果中的葡萄孢菌进行检测定量分析。通过与一项DNA定量测试结果进行对比,表明ELISA法的测定结果与DNA分析结果具有很好的相关性。本研究结果表明,新开发的测试方法实现了对无发病症状的果实中葡萄孢菌的检测分析,具有成本低廉、操作简便、快捷等优点,可将其应用于世界各国对水果等植物的病害检疫领域。     

临夏州马铃薯品种(系)比较试验探析

以陇薯6号为对照,在临夏州农业科学院北塬试验站对12个马铃薯品种(系)进行了品种(系)比较试验.试验结果显示,有5个品种(系)比对照陇薯6号增产,增产率在48.29％～8.62％,其中产量位于前3位的品种(系)为201614-5、201727-4、201827-2,折合单产分别为2305.67 kg/667m2、223...     

马铃薯新品种(系)比较试验初报

为筛选出适宜万州区种植的优质高产抗逆性强的马铃薯品种,从四川、重庆、湖北恩施州等地的农科院引进10个马铃薯新品种(系)进行试验,对品种物候期、生物性状、晚疫病抗性、块茎结薯习性及产量等进行调查分析。结果表明,鄂薯14号、鄂薯16号的丰产性较好且抗病性强尤其是晚疫病抗性强,可进行大面积示范;丽薯6号、合23M-2的产量较高,但中度感晚疫病,推广应用时要注重晚疫病防控;渝薯3号和渝薯6号产量、抗病性等表现较优但有空心等生理缺陷,可续试,其余品种产量低适应性差予以淘汰。     

兰州市旱作区马铃薯品种(系)比较试验

马铃薯为主要粮食作物之一,其营养丰富,素有＂地下苹果＂的美称。为了满足人们对高产优质马铃薯新品种的需求,试验选用20个马铃薯品种(系),以‘陇薯7号’为对照,进行抗病性、农艺性状与丰产性等综合性状进行比较试验,以期筛选出适合甘肃省榆中县大面积推广种植的马铃薯新品种,为该区马铃薯品种更新换代提供科学依据。结果表明,‘陇薯10号’、‘陇薯7号’、‘陇薯12号’具有较好的适应性、商品性、抗旱性、抗病性与丰产性,以‘陇薯10号’产量最高达到36 175.90 kg/hm2,较CK增产9.05%,适合在该地区大面积推广种植,而从商品性与口感考虑,应适当扩大种植‘陇薯7号’、‘陇薯12号’,并进一步在当地进行试验种植。