白灵侧耳菌渣中漆酶的分离纯化与酶学性质

依次采用离子交换层析(DEAE-Sepharose、CM-Sepharose和SP-Sepharose)和凝胶过滤层析(Superdex 75 HR10/300)从白灵侧耳(Pleurotus tuoliensis)菌渣中分离纯化得到一种漆酶,该酶比活力为176.1 U/mg,纯化倍数为90.7;采用EDMAN降解法和HPLC-LTQ-Orbitrap测序得到该漆酶的N端和3条肽段序列分别为LHGTHAAIGP和PGVLVQGNKGDN、ISMSCDPNFTFS、DSIQIFAGQRYSFVLNAN;对该漆酶的理化性质进行研究,结果表明:该酶相对分子质量为7.0×10~4,最适反应温度为50℃,最适反应pH为4.0,具有较好的酸耐受性,在pH 2～4孵育1 h后能保持90%以上的活性。Cd~(2+)、Pb~(2+)、Hg~(2+)、Zn~(2+)、Fe~(3+)、Cu~(2+)和Fe~(2+)在1.25～10 mmol/L浓度下对该酶活性具有抑制作用。     

一株高产漆酶野生金针菇菌株的鉴定及酶学性质研究

从野生食用菌中筛选出一株漆酶高产菌株F0027,依据形态学、生理生化特征以及r DNA ITS序列分析得出该菌株属于黄色金针菇。对子实体培养料中的酶学性质初步研究表明,其产漆酶的最适温度和最适p H分别是35℃和4.8。抗坏血酸可以完全抑制该漆酶的活性;Fe~(2+)、草酸和EDTA对漆酶活性有强烈的抑制作用,不同浓度的K+、Ca~(2+)、Mn~(2+)、Zn~(2+)、Mg~(2+)对漆酶活性几乎无影响,Cr~(2+)、Al3+对漆酶活性有不同程度的抑制作用;Cu~(2+)对漆酶活性的促进作用不明显。该漆酶对溴百里香酚蓝、依来铬黑和孔雀石绿3种实验室染料有不同程度的脱色作用,其中对依来铬黑染料的脱色率可达到30%以上。     

工厂化生产金针菇菌渣栽培糙皮侧耳的应用分析

研究了生产用糙皮侧耳菌株对工厂化生产金针菇菌渣的适应性,菌渣不同发酵处理方式和复配基质对糙皮侧耳生长发育的影响。结果表明,不同糙皮侧耳菌株对金针菇菌渣的适应性不同,各菌株以菌渣为基质的生物转化率均显著低于棉籽壳基质配方,但降低幅度存在较大差异;金针菇菌渣分别发酵0、3 d、5 d,随着发酵时间延长,菌袋污染率呈降低趋势,糙皮侧耳产量呈升高趋势;单一金针菇菌渣为主料栽培糙皮侧耳,各潮菇的产量均显著低于棉籽壳基质配方,第2潮～第4潮菇的产量降低更加明显,金针菇菌渣与棉籽壳、玉米芯复配基质的产量显著提高。     

糙皮侧耳漆酶基因的克隆及在粟酒裂殖酵母中的表达

利用RT-PCR技术,从糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)总RNA中克隆漆酶基因(Lac),再通过NheⅠ酶切位点与粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)表达载体pESP-2连接,构建酵母真核表达载体,利用电转化方法转化粟酒裂殖酵母SP-Q01细胞,并在SP-Q01中进行表达分析,最后用愈创木酚法测定表达产物的酶学活性。漆酶基因在构建的表达载体重组SP-Q01细胞中得到表达,酶学活性达到89.37 U/L。     

香菇漆酶的纯化及部分性质研究

对香菇漆酶进行了丙酮分级沉降、半透膜透析、DEAE一纤维素及Sephadex G100柱层析纯化,并研究了漆酶的产酶曲线及酶作用最适条件.,结果表明:在该培养条件下,香菇第10天达产酶高峰,峰值酶活为216 U/mL,酶作用的最适pH值为3.6,在pH值3.6～4.6有较强的稳定性.最适酶解温度为30℃,Ba2 、Cu2 对香菇漆酶有激活作用,而Ag 、Fe3 则能明显抑制漆酶活性,其它离子影响相对较小.以邻联甲苯胺为底物的表观Km值为1.68 mmol/L.     

猴头菌液体发酵产α-半乳糖苷酶工艺优化及其酶学性质

为优化猴头菌(Hericium erinaceus)液体发酵产α-半乳糖苷酶的培养条件,研究其酶学性质。采用单因素实验和Box-Behnken设计原理设计实验,建立以酶活性为响应值的回归方程模型,采用Design-Expert得到最优液体发酵产酶工艺,采用硫酸铵沉淀初步纯化该酶,研究该酶的温度、pH特性及其对蛋白酶的抗性。结果表明:猴头菌发酵产酶的最佳发酵工艺为3%豆粕粉、2.3%葡萄糖、1.9%蛋白胨、0.3%MgCl_2,在此条件下猴头菌发酵液中的α-半乳糖苷酶活性提高了48.9%;该酶最适反应温度为60℃,最适pH为6.0,对胃蛋白酶、胰蛋白酶、酸性蛋白酶和中性蛋白酶均表现出较好的抗性。     

阿魏侧耳液体发酵及产木质素降解酶培养基的优化

以阿魏侧耳NB-1为供试菌株,通过液体发酵培养,测定最佳发酵时间,以生物量、漆酶活力、锰过氧化物酶活力为指标,旨在对培养基中碳源、氮源、生长因子进行优化。结果表明:阿魏侧耳液体发酵最佳培养时间为7 d;4个碳源因素中,可溶性淀粉、蔗糖组生物量极显著高于葡萄糖、麦芽糖组(P0.01),可溶性淀粉组漆酶活力极显著高于其它3个碳源组(P0.01),麦芽糖组锰过氧化物酶活力极显著高于其它3个碳源组(P0.01);4个氮源因素中,牛肉膏、蛋白胨组生物量极显著高于尿素、硫酸铵组(P0.01),牛肉膏组漆酶活力极显著高于其它3个氮源组(P0.01),硫酸铵、牛肉膏、尿素组锰过氧化物酶活力极显著高于蛋白胨组(P0.01);4个生长因子组生物量均极显著优于基础培养基对照组(P0.01),维生素C组最佳,维生素C组锰过氧化物酶活力极显著高于维生素B6组和基础培养基对照组(P0.01)。综上所述,阿魏侧耳液体发酵最佳培养时间为7 d,阿魏侧耳液体发酵降解木质素培养基最优碳源为可溶性淀粉,最优氮源为牛肉膏,最优生长因子为维生素C。     

杏鲍菇漆酶的生物学特性

从杏鲍菇、双孢蘑菇、美味侧耳、茶薪菇、凤尾菇和香菇子实体中提取漆酶，用分光光度法测定酶活，发现杏鲍菇漆酶酶活最高，实验结果表明，杏鲍菇漆酶是一种较稳定的高温酶，其最适PH为3．0，最适温度60℃；Pb^2＋,K^ 对酶活有较大的激活使用，而Fe^3 ,Fe^2 则对酶活有较强的抑制作用。     

香菇漆酶同工酶的部分酶学性质的研究

通过丙酮分级沉淀、DEAE-纤维素离子柱层析和Sephadex G100柱层析得到两种香菇漆酶同工酶,分别命名为lac1和lac2,并对其理化性质进行了研究.考察了香菇漆酶同工酶最适反应温度和pH值、热稳定性和pH值稳定性、反应动力学常数以及金属离子对酶活的影响.试验结果表明:Lac1、lac2最适作用温度都为30℃,在不高于40℃的条件下保存30 min,lac1残余酶活在60%以上,lac2在不高于60℃有较高热稳定性,残余酶活在80%以上.最适pH值,lac1为3.6,lac2为4.0.pH值3.0～4.8,lac1有较强稳定性,在pH值4.0～4.6,lac2有较强的稳定性.以邻联甲苯胺为底物lac1和lac2的Km分别为0.964 mmol/L和1.38 mmol/L.金属离子Cl-对lacl有激活作用,Ag 、Mn2 对lac1有抑制作用.金属离子Ba2 和Cu2 对lac2有激活作用,Fe3 、Cl-、Ca2 、Zn2 、Ag 、Mn2 对lac2有抑制作用.     

纤维素分解菌ZJW-4产酶条件研究

采用单因素试验法进行不同条件下的液体发酵培养,确定纤维素分解菌ZJW-4的最适产酶条件。结果表明:ZJW-4产纤维素酶的最优发酵条件为以蛋白胨+(NH4)2SO4为氮源的培养基,28℃,pH 6,静置培养48 h。     

红芝组成型漆酶酶学性质的研究

研究了温度、pH值、金属离子和抑制剂对红芝漆酶活性和稳定性的影响,测定该漆酶的Km值和Vmax。结果表明:红芝漆酶最适反应温度为60℃,低于50℃时较稳定;最适pH值为3.0,在pH 2.5~4.0的范围表现出较强的稳定性;Cu2+、Mn2+、Mg2+对酶活有促进作用,而Cr3+、Hg2+、Fe2+和抑制剂EDTA、DMSO、SDS对酶活有抑制作用;以愈创木酚为底物时Km值为0.13 mmol/L,最大反应速率Vmax为234 nmol.mL-1.min-1。     

木耳漆酶高产菌株筛选及其发酵条件的研究

通过运用不同检测方法对木耳属中的三个种的 2 7个菌株的产过氧化物酶、漆酶能力的检测 ,筛选得到一漆酶高产菌株毛木耳 (Auriculariapolytricha)AP4。并且对AP4的产漆酶的发酵条件进行了初步研究。摇瓶实验产漆酶的最佳培养基的成分为 :碳源羧甲基纤维素(CMC) 5g/L ,氮源NH4NO3 L -天冬酰胺 (L -As paragine) 2 4mmol/L ,培养基的初始pH4 0 ,培养温度2 5℃。     

菌核侧耳β-葡萄糖苷酶液体培养条件的优化

通过单因素和正交试验,对菌核侧耳产β-葡萄糖苷酶液体培养条件进行优化。结果表明:以黄豆浆为氮源,葡萄糖为碳源,初始pH为6.0产酶条件最优。培养温度为25℃、装液量50mL/250mL、摇瓶转速为150r/min培养72h后,酶活力达最高,为1.86U/g(湿菌丝体)。     

桑黄漆酶的发酵条件研究初报

采用液体深层培养方法通过不同碳源、氮源、pH值、温度等因素对桑黄产酶量的影响,研究桑黄合成漆酶的最适发酵条件。采用L9(34)正交设计法对桑黄合成漆酶发酵培养基进行了优化,初步筛选出了桑黄合成漆酶发酵培养基。结果表明,培养基为玉米粉1%、麦麸1%、葡萄糖2%、蛋白胨0.5%、酵母膏0.5%、磷酸二氢钾0.1%、硫酸镁0.05%、添加Cu2+浓度60μmol.L-1,维生素B1 1 mg.100-1.mL-1,漆酶产量最高,为7 666 U.L-1。     

酶解法去除云芝菌丝体粗多糖中淀粉的研究

以水提醇沉的方法得到的云芝液体发酵菌丝体粗多糖为原料,通过酶解法去除淀粉的研究,为今后云芝菌丝体粗多糖的进一步分离纯化提供了条件。试验选取酶用量、温度、pH、酶解时间为参数。采用正交试验优化酶解法去除云芝菌丝体粗多糖中淀粉的最佳工艺参数研究,结果表明:耐高温α-淀粉酶在加酶量1 mg/g、pH6.5、温度100℃、酶解时间40 min;糖化酶在加酶量40 mg/g、pH4.5、温度60℃、酶解时间2 h的条件下,能明显酶解去除云芝菌丝体粗多糖中的淀粉。     

棉籽壳发酵料栽培糙皮侧耳优良菌株的选育

新选育的糙皮侧耳菌株烟PL-19属于早熟型品种.该菌株菌丝在2～37℃温度范围内均能生长,菌丝生长适温为18～30℃,最适温度为25～27℃.在棉籽壳发酵料培养基上,菌丝粗壮、沽白、整齐,爬壁力强,满袋天数为21d±1d.经推广栽培证明,PL-19是高产优质菌株.     

苹果渣发酵料栽培糙皮侧耳优良菌株的选育

新选育的糙皮侧耳菌株PL -A2 属于早熟型品种。该菌株菌丝在 5～ 37℃温度范围内均能生长 ,菌丝生长适温为 18～ 30℃ ,最适温度为 2 5～ 2 8℃。在苹果渣发酵料培养基上 ,菌丝粗壮、整齐、洁白 ,爬壁能力强 ,满袋天数为 2 2d± 1d。经推广栽培证明 ,PL -A2 是高产优质菌株     

改良壳聚糖固定化真菌漆酶的研究

以改良壳聚糖-壳聚糖铜为载体,戊二醛为交联剂对真菌漆酶进行了固定化研究,探讨了其固定化条件及固定化酶的部分性质.结果表明:戊二醛最适浓度为0.5%,交联最佳时间14 h,最佳给酶量约1.3 mg,固定时间12 h或0.5 h.在此条件下获得的固定化漆酶酶活回收率分别为56.4%与51.2%.与游离酶相比,固定化漆酶与作用底物邻联甲苯胺的亲和力降低,但固定化漆酶的稳定性有明显改善.最适温度分别为40℃和80℃,分别比游离酶提高10℃和50℃;90℃条件下保温5 h后固定化酶活保留率分别为57.4%和40%,而相同条件下游离酶酶活明显下降.     

不同糙皮侧耳菌株氨耐受性分析

在PDA培养基中添加NH4Cl和在灭菌发酵料中添加NH4OH(氨水)分析糙皮侧耳(Pleurotus ostreatus)不同菌株黑抗650、野生株NY-2和黑平17-1对氨的耐受性,并通过在NH4Cl质量浓度为1.00％和1.25％的PDA培养基中共培养(32℃)考察1-氨基环丙烷-1-羧酸脱氨酶产生菌对糙皮侧耳氨耐...