皱盖假芝化学成分分离及其结构鉴定

对皱盖假芝(Amauroderma rude)子实体提取物的化学成分进行分离及结构鉴定。皱盖假芝子实体经干燥、粉碎,采用热水浸提,依次采用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取,最终得到氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物及水溶物;采用各种分离手段,从皱盖假芝提取物中分离出6个化合物单体,并通过现代波谱分析方法及结合文献,最终确定为尿苷、5’-甲氧基尿苷、星鱼甾醇、腺苷、尿嘧啶、原儿茶酸,所有化合物均属首次从皱盖假芝中分离得到。     

灵芝药效成分形成的规律研究

研究袋料栽培灵芝主要的药用成分灵芝多糖和三萜在不同生长时间和子实体部位的分布规律。将灵芝整个出芝过程分为5个时期,将子实体分为3个部分,采用硫酸-蒽酮法测定多糖含量,采用香草醛-高氯酸法测定三萜和甾醇含量。结果发现灵芝多糖含量随子实体发育逐渐降低,在空间上无分布规律;灵芝三萜和甾醇含量随子实体发育逐渐增加,并在边缘含量分布最高。灵芝多糖和三萜含量随子实体发育有规律变化,灵芝三萜在子实体不同部位分布规律。     

灵芝不同生长发育期粗多糖和三萜含量变化规律

检测分析了3种灵芝（Ganoderma lucidum,G．capense,G．tsugae）11个菌株不同生长发育期的子实体粗多糖和三萜含量变化情况。结果表明,大部分供试灵芝菌株不同生长发育期的子实体粗多糖和三萜含量均存在显著或极显著差异,其中粗多糖含量多为现蕾期时最高,芝盖形成期有所降低,成熟期又有所增加,衰老期又大幅度降低;而子实体三萜含量则在现蕾期、芝盖形成期和成熟期均较高,于衰老期显著或极显著地降低。     

两种无孢灵芝子实体醇提物的比较

以龙芝2号和鹿角灵芝两种无孢灵芝(Ganoderma lingzhi)子实体为原料,95%乙醇超声提取,对醇提物中的三萜进行了分析和体外抗肿瘤实验。结果表明,两种样品的醇提物得率分别为1.8%和3.7%,醇提物中三萜化合物含量分别为0.53%和1.16%;高效液相结果表明,鹿角灵芝中三萜的种类也多于龙芝2号。两种无孢灵芝的醇提物对肿瘤细胞K562和SW620的增殖均有一定的抑制作用,龙芝2号抑制肿瘤增殖的活性优于鹿角灵芝。     

38株灵芝子实体抗肿瘤质量的生物评价

针对38株灵芝子实体样品,开展醇提物抑制He La、SK-OV-3肿瘤细胞增殖活性和三萜含量测定研究,对其抗肿瘤质量进行评价,筛选具有开发抗肿瘤产品潜力的优质菌株。实验结果表明,33号、34号2株灵芝对He La细胞和SK-OV-3细胞均具有较强的杀伤作用,对2株细胞增殖抑制IC50分别为16.55μg·m L-1、10.2μg·m L-1和31.9μg·m L-1、30.64μg·m L-1,可作为优质资源进行进一步开发。各菌株灵芝子实体的三萜含量在1.372 mg·g-1~6.184 mg·g-1之间,不同菌株子实体间三萜含量差异较大,细胞增殖抑制活性与三萜含量间不具有相关性,提示灵芝抗肿瘤原料质量评价宜考虑补充生物质量评价方法。     

灵芝菌丝水提物活性成分分析研究

目的：研究分析灵芝菌丝水提物的活性成分及含量。方法：按照国家药典及有关标准检测方法,检测灵芝菌丝水提物多糖、三萜及甾醇、灵芝酸、腺苷、氨基酸、微量元素、农药残留及毒素的含量。结果：灵芝菌丝水提物多糖质量分数为0.43%,三萜及甾醇质量分数为0.18%,灵芝酸A、D、F、G及腺苷质量分数分别为7.2μg/g、6.9μg/g、32.0μg/g、12.6μg/g、42.1μg/g,含有16种氨基酸,总质量分数为13.7 g/100 g,含硒、硼、锌等12种微量元素,农药残留及黄曲霉毒素未检出。结论：灵芝菌丝水提物无毒安全,含有多糖、三萜、甾醇、灵芝酸等多种活性成分,可被开发为一种食品新资源。     

基于偏最小二乘法的赤芝子实体三萜类化合物抗氧化谱效关系的研究

测定了64株赤芝(Ganoderma lucidum)子实体醇提物清除二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基的活性和三萜指纹图谱,采用遗传算法筛选其指纹图谱中的26个共有峰,并标定出其中15个特征峰,运用偏最小二乘回归分析方法(partial least squares regression,PLSR)对指纹图谱中26个三萜峰与醇提物清除DPPH自由基的活性进行关联分析,建立了赤芝子实体三萜类化合物的抗氧化谱效关系方程。在赤芝子实体醇提物三萜指纹图谱的26个共有峰中,峰S1、S4、S9、S10和S26的峰面积与醇提物清除DPPH自由基的活性呈显著正相关关系;峰S3、S11、S15、S18、S19、S22和S25的峰面积与醇提物清除DPPH自由基的活性呈显著负相关关系。分别测定鉴定出的15个峰对应的三萜化合物对DPPH自由基的清除活性,发现与清除DPPH自由基活性呈显著正相关的三萜化合物灵芝酸C_2(S4)、灵芝酸B(S9)、灵芝酸LM_2(S10)、灵芝醛A(S26)对DPPH自由基的清除活性明显高于其他三萜化合物,与清除DPPH自由基活性呈显著负相关的三萜化合物灵芝酮三醇(S18)、灵芝萜酮二醇(S22)无清除DPPH自由基的活性。另外,利用H_2O_2诱导的PC12细胞损伤模型进一步验证灵芝酸C_2、灵芝酸B、灵芝酸LM_2、灵芝醛A和灵芝萜酮二醇在细胞水平的抗氧化活性,发现灵芝酸C_2、灵芝酸B、灵芝酸LM_2、灵芝醛A具有明显的保护神经细胞氧化损伤的活性,而灵芝萜酮二醇对神经细胞的氧化损伤无保护作用。结果表明,本研究建立的赤芝子实体三萜类化合物抗氧化谱效关系方程具有较高的准确性,能够较全面地反应赤芝子实体醇提物中不同三萜化合物与其抗氧化活性的相关性,可快速锁定有效成分以指导活性成分的分离纯化工作。此外,该方法也为赤芝子实体的质量控制提供了更为有效和准确的方法。     

十七种食药用菌提取物抗病毒活性筛选

通过MTT法和空斑实验法评价了17种食药用菌提取物对单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus 1,HSV-1)和肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)的两个不同来源毒株EV71-CSFI4、EV71-PTPS的抑制效果。结果表明:皱盖假芝(Amauroder marudis)、枣翘鳞肉齿菌(Sarcodon imbricatus)水提物对3种病毒均具有较好的抑制效果,皱盖假芝水提物对HSV-1、 EV71-CSFI4、EV71-PTPS的治疗指数分别为32.17、30.05、21.55;枣翘鳞肉齿菌水提物对EV71-CSFI4、EV71-PTPS的治疗指数较高,分别为95.35、112.22。研究结果提示皱盖假芝、枣翘鳞肉齿菌水提物具有进一步开发抗病毒产品的潜力。     

不同中药提取物对牛樟芝生长和胞内三萜产物形成的影响

研究了6种中药材的水提物和醇提物对牛樟芝(Antrodia camphorata)液态发酵过程中菌丝体生长和胞内三萜类成分产量的影响。将不同中药的水提物和醇提物分别加入到发酵基础培养基中,培养20 d后测定牛樟芝菌丝体生物量和胞内三萜含量。结果表明,除了薏苡仁水提物添加浓度在0.6%时,对牛樟芝生长有抑制作用,其他中药水提物对牛樟芝生长均有促进作用。枸杞水提物对牛樟芝生长和胞内三萜的产生有显著的促进作用;陈皮和当归醇提物在高浓度时对牛樟芝菌丝体生长和胞内三萜的产生有明显的抑制作用;连翘醇提物对牛樟芝胞内三萜物质的产生有显著的促进作用,是对照组的4.5倍。     

高压超临界CO_2提取灵芝三萜和甾醇成分的研究

为了研究常温高压超临界CO_2提取法提取灵芝三萜和甾醇成分的效果,采用不同高压的超临界CO_2提取法提取灵芝细粉中灵芝三萜和甾醇成分,通过高效液相色谱(HPLC)测定灵芝三萜和甾醇的含量,并与传统的乙醇回流提取法进行比较。研究表明,高压超临界CO_2提取工艺条件为:提取压力85 MPa,提取温度50℃,提取时间4 h,在此条件下灵芝三萜含量为1.35%,麦角甾醇含量为0.32%,而采用乙醇回流提取法提取的灵芝三萜含量为0.92%,麦角甾醇含量为0.2%。与传统乙醇回流提取法相比,采用高压超临界CO_2提取法,灵芝三萜含量提高了46.7%,麦角甾醇含量提高了60%。HPLC图谱表明,高压超临界CO_2提取法的提取物中三萜和甾醇不仅含量高,而且成分种类多。因此高压超临界CO_2提取法具有得率高、提取温度低、提取时间短等优点,为灵芝成分的提取提供了新技术。     

不同灵芝提取液含量对冲剂颗粒质量的影响

试验设计4种提取方法:水煮、醇提、先水煮后醇提、先醇提后水煮,研究不同提取方法对灵芝(Ganoderma lucidum)活性成分的影响;设置辅料(kg)和灵芝提取液(L)的配比为8:1、10:1、12:1、14:1、16:1,通过测定颗粒成型性、堆密度、停止角、溶化率、吸湿性,研究不同灵芝提取液含量对灵芝冲剂质量影响。结果显示:灵芝多糖和蛋白含量高低的顺序均为先醇提后水煮先水煮后醇提水煮醇提,而灵芝三萜的顺序为先水煮后醇提先醇提后水煮醇提水煮。综合考虑先醇提后水煮和先水煮后醇提的方法最佳;除8∶1配比颗粒成型性不达标外,其余所有处理的所有指标均符合标准,效果最佳的配比为10∶1,本试验为灵芝颗粒冲剂的加工技术提供参考数据。     

广西适栽灵芝品种的筛选试验

通过对15种来源不同的灵芝菌株进行母种和原种、出芝试验,对相关生物学指标和灵芝三萜含量进行相关评价,并得出以下结论:南韩灵芝芝盖厚而大、菌柄长、长芝整齐、芝型好、生物转化率高、栽培周期短,可作为以整株灵芝子实体销售为目的栽培优选菌株;信州灵芝的芝小而朵多,芝盖厚、结构密实、边缘整齐、菌柄长、菌盖和菌柄结构分明,长芝整齐、芝型好、生长周期短,可作灵芝盆景栽培的优选菌株;大红灵芝gy栽培周期最短39天,生物转化率为55.8%,故可作为以灵芝子实体的粗加工保健品和提取灵芝有效成分为目的栽培优选菌株;美国灵芝在母种和菌袋的培养基上的生长速度均是所有品种中最快的,仅次于大红灵芝gy,故美国灵芝可作为灵芝菌丝深层发酵的优选菌株。以上的菌株可作为广西灵芝产业发展所选菌株的参考。     

两株西藏白肉灵芝菌株特性初探

对西藏林芝地区的白肉灵芝(Ganoderma leucocontextum)菌株G-122和G-241进行鉴别分析,并对其栽培性状、有效成分含量和提取物功能等方面进行研究。基于形态学特性和ITS分析,2个菌株均鉴定为白肉灵芝。二者菌丝对峙培养产生明显拮抗线,菌丝体生物量差异显著(G-241高于G-122),子实体颜色不同(G-241和G-122分别为红褐色和黄褐色),G-241子实体单菇重高于G-122;有效成分含量差异也较大,G-122粗多糖含量高而G-241总三萜含量高;菌株G-122、G-241醇提物对乳腺癌MT-1细胞IC_(50)值分别为265.2和225.6μg/mL。实验结果表明菌株G-122和G-241为不同菌株。     

皱盖假芝水提物抑制单纯疱疹病毒研究

研究了皱盖假芝(Amauroderma rudis)水提物(AERA)对单纯疱疹病毒(Herpes Simplex Virus,HSV)感染细胞的抑制效果。体外细胞试验结果表明:皱盖假芝水提物能有效抑制HSV感染非洲绿猴肾细胞(African green monkey kidney,Vero)(半数有效浓度IC50为107μg/mL),且具有低毒性优点(半数致死浓度CC50为1477μg/mL)。不同加样时间和加样顺序试验结果表明:水提物AEAR是作用于HSV病毒感染细胞的早期阶段。     

野生层迭灵芝驯化栽培研究初报

报道了野生层迭灵芝(Ganoderma lobatum)发现和采摘的地理位置和生态环境,分离、纯化出了泰G1号菌种,以及在木屑袋料和椴木上驯化栽培试验成功的步骤和方法。驯化栽培出的层迭灵芝子实体,经泰国玛希隆大学药学学院商品质量检测中心测试,其三萜含量为(0.8±0.01)%(w·w~(-1),n=3,RSD=0.79%),多糖含量为(1.4±0.01)%(w·w~(-1),n=3,RSD=0.83%);经上海市农科院食用菌研究所检测,层迭灵芝三萜含量为5.32%,多糖含量为2.39%,核苷和三萜含量及图谱与其他灵芝品种有较大差异。试验和检测结果表明,层迭灵芝可作为灵芝属一新栽培品种,具有极高的经济价值和研究价值。     

四种灵芝产品中多糖和三萜含量的比较

以市场上的灵芝破壁孢子粉、未破壁孢子粉、子实体和精粉共4种灵芝产品为研究对象,比较分析其活性成分三萜和多糖含量的差异。应用光学显微镜比较破壁孢子粉与未破壁孢子粉的差别、热水浸提法提取多糖、苯酚-硫酸法测定多糖含量、醇提法提取三萜、香草醛-冰醋酸法测定三萜含量、高效液相色谱法(HPLC)检测灵芝酸。结果显示精粉中多糖含量为52.40 mg·g~(-1),显著高于其他三者,破壁与未破壁孢子粉多糖含量为(21.32±1.11)mg·g~(-1),差异不显著,但高于子实体的9.83 mg·g~(-1)。而子实体中三萜含量却是最高的,为4.97 mg·g~(-1),破壁孢子粉中三萜含量为2.23 mg·g~(-1),明显高于未破壁的1.10 mg·g~(-1)。通过对比4种产品的三萜指纹图谱发现,子实体和精粉中的灵芝酸种类远远多于破壁及未破壁孢子粉中的,且不同产品中有相同的组分。     

不同栽培模式下松杉灵芝的生长与有效成分含量

比较了不同栽培模式(模式Ⅰ:林下栽培自然生长,模式Ⅱ:林下人工管理,模式Ⅲ:大棚栽培)下松杉灵芝(Ganoderma tsugae)子实体的生长与有效成分含量。结果表明:模式Ⅰ的松杉灵芝生长期最短;模式Ⅱ和模式Ⅲ的子实体产量分别为3.74kg和3.63kg,高于模式Ⅰ(2.77kg);模式Ⅲ子实体的多糖含量最高,为0.63%;模式Ⅱ子实体的三萜与甾醇含量最高,为0.75%。     

不同来源赤芝活性成分分析及质量评价

分别采用高效液相色谱仪、荧光分光光度计、紫外-可见分光光度计测定13批不同来源赤芝（Ganoderma lucidum）子实体的多糖、总三萜中甾醇、灵芝酸C2、灵芝酸B、灵芝酸A、灵芝酸E、灵芝酮三醇、灵芝萜烯二醇以及硒的含量，并基于熵权逼近理想解排序法（technique for order preference by similarity to an idealsolution, TOPSIS）对上述测定指标进行数据分析，综合评价产品质量。结果表明，基于液相色谱分析建立的6种三萜化合物含量测定方法具有较高的灵敏度与准确度；熵权TOPSIS评价模型快速、灵敏、有效，与主成分分析评价模型结论基本一致，能全面、客观地评价赤芝药材质量，可为赤芝品质分析与综合评价提供参考。     

木块袋栽灵芝新技术

1　菌株的选择　目前国内人工裁培灵芝可分为三大类型 :1药用型 :如泰山赤芝、南韩灵芝、圆芝 6号等。 2药用兼观赏型 :如黑芝 G4 3— 1,黑芝 G4 3— 2 (我中心选育 )等。 3观赏型 :如树舌灵芝、皱盖乌芝、黄边灵芝等。由于各地消费市场不同 ,栽培者应以当地市场为导向 ,灵活选     

高产三萜灵芝新菌株‘沪农灵芝5号’的选育

为选育高产三萜灵芝（Ganoderma lucidum）新品种,以抗杂菌能力强、生物学效率高的‘沪农灵芝1号’（H 1）和三萜含量高、抗杂菌能力弱的‘灵芝G 8’(G 8)为亲本,将原生质体单核菌株进行杂交,从130个杂交组合中筛选出菌丝长势较好的25个杂交菌株,并对其进行栽培试验,考察菌包成品率、生物学效率等农艺性状及子实体三萜含量,从中筛选出杂交菌株Z18。与亲本G8相比,Z18菌包成品率提高66.67%、生物学效率提高22.54%;与亲本H1相比,Z18子实体中三萜含量提高51.26%。ERIC-PCR分析结果显示,Z18与亲本存在遗传差异。Z18达到新品种审定标准,已通过上海市非主要农作物品种认定,定名为‘沪农灵芝5号’。