核酸技术在禽病诊断中的应用

近年来 ,随着分子生物学发展 ,禽病诊断水平有了很大提高。禽病的实验室诊断技术已从常规的病毒分离鉴定以及抗原、抗体的免疫学检测 ,进入到可对病原微生物的基因序列和结构直接进行测定的分子生物学水平。核酸技术是分子生物学技术的一部分 ,它包括聚合酶链反应 ,核酸探针及限制性内切酶酶切片段分析和核酸序列测定。核酸技术的核心是根据病原体的遗传物质ＲＮＡ或ＤＮＡ进行鉴别定性 ,其目的是检测病原体 ,同时鉴定血清型、亚型或基因型 ,核酸序列分析定性的水平是其他方法不可比拟的。核酸技术具有高灵敏性、高特异性等优点 ,目前该技术…     

核酸探针技术在禽病研究中的应用

核酸探针技术是近几年来随着分子生物学技术的迅速发展而建立起的一种新的检测技术,它灵敏度高,特异性强,且快速方便,开辟了临床诊断技术的新领域,广泛应用于疾病的诊断、病原体相关性研究等。在禽病研究中,核酸探针用于诊断疾病、比较毒株和研究病原菌感染机制方而的不少研究。在抗病育种方而,已将其作为导入的目的基因的主要检测手段之一。本文仅就核酸探针技术在禽病研究中的应用做一简述。     

核酸技术在禽病诊断上的常规运用

核酸技术(包括聚合酶链式反应,核酸探针,限制性内切酶酶切片段分析和测序)在禽病研究中一直主要局限于基础分析和回顾性研究。近来,这些方法已更多地用于鸡和火鸡的临床诊断以及实施流行病学调查,它们的核心内容在于通过对病原基因材料—RNA或者DNA的分析,对病原进行识别和鉴定。对病原快速检测的同时,结合血清型、亚型或基因型的鉴定一直是这些方法运用的目标。序列分析同时也提供了一种为其它方法所无可比拟的鉴定指标。本文中,我们描述了核酸技术在传染性支气管炎病毒、火鸡鼻气管炎病毒(禽肺病毒)和新城疫病毒诊断和流行病学调查上的运用。     

核酸检测技术在水产动物病毒感染诊断中的应用

目前,应用于水产动物病毒感染诊断中的核酸检测技术主要包括核酸杂交、聚合酶链反应、聚舍酶链反应与分子杂交联用、聚合酶链反应与免疫学联用、限制性酶切技术、环介导的等温扩增、基因芯片及测序等技术。这些技术发展迅速,并在原有基础上根据实际的需求产生出很多相应的衍生技术。它们已被广泛应用在水产动物病毒感染诊断中并发挥着巨大的作用。核酸检测技术以其无法比拟的优点得到了快速的推广和应用,有着广阔的发展空间。     

液相芯片技术在动物疫病检测中的研究进展

液相芯片技术是整合了激光技术、流式细胞仪、数字信号处理和传统化学技术的一种新型生物分子检测技术,目前广泛应用于各种免疫分析和核酸检测中。液相芯片技术支持单重和多重分析,可在多种测定方法中对蛋白质和核酸靶标进行高通量检测,具有高通量、操作简单、适用范围广、重复性好、特异性高、所需样品量少、更灵敏稳定、成本低等优点,正逐渐代替传统检测和定量病原体的工具,如实时荧光定量PCR扩增检测系统（qPCR）、酶联免疫吸附试验（ELISA）等检测方法。动物传染病严重危害着养殖业健康发展,一些诸如高致病性禽流感的人畜共患病对人类健康造成了严重威胁。高效灵敏的诊断系统将有助于在传染病暴发期间筛选大量样本,防止感染扩散。液相芯片技术的发展为高通量检测和疾病的预防提供了新的平台。作者简要概述了液相芯片技术的原理和优点,重点阐述了液相芯片技术在检测动物疫病,包括猪病、禽病、兔病、犬病、啮齿类动物和其他动物疫病方面的研究进展。相信今后液相芯片技术会成为临床诊断、基础研究、新药开发、司法鉴定、食品卫生监督、生物武器防范等领域的一项重要分析检测技术,该技术的发展将大大推动生命科学研究与进步。     

核酸技术在禽病研究中的应用

核酸限制内切酶指印和酶谱分析是用特异限制性酶分解核酸,然后用电泳分离核酸片段的技术。该技术可鉴别出血败血性巴氏杆菌野毒和疫苗株;把肠炎沙门氏菌分为3组;把衣原体分为7组和清楚地鉴别出牛痘、鹌鹑痘和禽痘。核酸探针是一些用来检     

重组酶聚合及其在禽病原酶扩增技术检测中的应用

重组酶聚合酶扩增技术是2006年由英国科学家研发的一种核酸恒温扩增技术,它不同于传统的PCR扩增,恒温条件下短时间内实现靶基因大量扩增,具有恒温、快速、便携、灵敏度高、特异性强和操作简单等优点,具有广阔的应用前景。本文综述了RPA技术的原理、反应条件优化、产物检测方式、与其他恒温技术相比的优势及在禽病病原检测中应用,旨在为禽病病原检测新技术、新方法的研制提供参考。     

LAMP技术应用于禽病诊断的研究进展

环介导等温扩增技术（LAMP）是一种新的核酸扩增技术,具有简单、快速、特异性强的特点.由于采用4个引物,与传统的核酸扩增技术相比,它具有敏感、特异的特点.为此,对近几年应用LAMP技术诊断禽流感、禽腺病毒感染、鸭疫、鹅细小病毒病等7种禽病的研究进行了综述.     

酶联免疫吸附试验在禽病学中的应用

酶联免疫吸附试验(ELISA)是免疫酶技术的一种,主要用来检查抗体和抗原。ELISA 首次由Engvall 和 Perlman(1971)提出后,相继得到医学和兽医学工作者的高度重视。该方法1974年在英国医学领域获得试用及发展,近几年来在禽病方面也进行了广泛深入的研究,取得了初步成就。鉴于在国内禽病工作中的研究、应用尚少,特别是用ELISA 测定禽病免疫抗体的资料不多,故进行综述,以供参考。     

鸡传染性支气管炎病毒（IBV）分子生物学的研究（简报）

鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）分子生物学的研究（简报）王永玲，吴延功，蒋贻海，孙淑芳，张子春，王玉东（农业部动物检疫所）应用分子生物学技术进行禽病的研究在我国是从九十年代开始的，主要是利用ＰＣＲ扩增技术和基因克隆及核酸探针这些高新技术，对于ＩＢＶ的研...     

从第十一届世界禽病国际大会看禽病研究发展方向

一.以单克隆抗体、聚合酶链反应(PCR)、限制性酶切片段分析(RFA)以及基因表达为代表的分子生物学技术日趋成熟,并逐步进入常规化应用,标志着禽病诊断和疫苗研制技术已进入分子生物学时代。 以单克隆抗体为基础的ELISA检测技术,已作为多种禽病的标准诊断方法被OIE等国际组织所采纳。此次会议上,匈牙利,特别是瑞典的学者报道了用单克隆抗体阻断ELISA检测新城疫病毒、禽腺病毒、禽传染性支气管炎病毒以及支原体等病原的特异性抗体的方法,中国学者则报道了用单克隆抗体双抗夹心法ELISA检测新城疫病毒的方法。 本次会议的论文摘要集共收入论文摘要374篇,其中35篇是有关基因和表达方面的文章,占摘要总数的9.36％,研究内容包括PCR检测技术、重组病毒疫苗及其免疫效果、核酸(DNA)疫苗、限制性酶切分析在病原鉴定方面的应用等等。荷兰和德国的学者报道了他们用PCR方法鉴别新城疫病毒致病力的研究。     

禽用核酸疫苗的研究进展

核酸疫苗是近 2 0年来发展起来的一种新型疫苗 ,它应用现代生物工程技术和分子生物学技术 ,克服了传统疫苗所存在的一些问题 ,具有传统疫苗不可比拟的优点 ,成为国内外学者争相研究的热点之一 ,呈现出良好的发展势头和应用前景。在禽病学领域 ,禽流感、新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊等疾病的核酸疫苗得到了较为深入的研究 ,为禽用核酸疫苗乃至其他领域的核酸疫苗的进一步研究提供了有益的参考 ,也将会为养禽业带来不可估量的经济效益。通过对禽用核酸疫苗研究概况的综述 ,不仅可以了解国内外研究动态 ,借鉴最新的研究方法和研究思路 ,也可以发现问题和提出问题 ,进而寻求新的研究方向     

家禽传染病的现代分子生物学诊断技术

对于集约化养禽业，在疫病的诊断上要体现“准”和“快”。家禽传染病的常规诊断方法虽然具有许多优点，但其费时、敏感性低、繁琐、漏诊、误诊的缺点也同样明显。随着分子生物技术的不断应用和发展，现代分子生物学技术如核酸杂交技术、聚合酶链式反应（PCR）技术、限制性片段长度多态性分析（RFLP）、核苷酸序列分析和基因芯片等，将在禽病的准确、快速诊断中扮演重要角色。     

ELISA技术及其在禽病诊断中的应用

ELISA,在1971年最初建立时称为酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay),在国内有人译作酶联免疫吸附试验,它是一种免疫测定,是把抗原抗体反应的特异性和酶的高效催化作用有机结合起来的一种非放射性标记免疫检测技术。近年来,随着单克隆抗体技术和酶标记技术的发展与应用,市场上已出现了各种各样的商品化ELISA试剂盒,广泛应用于临床医学、动植物食品检验、生物学研究等领域。本文主要是对ELISA技术的基本原理、类型、影响因素及其目前在禽病诊断中的应用加以综述。1ELISA技术简介1.1ELISA基本原理ELISA是以免疫…     

禽多杀性巴氏杆菌PCR检测方法的初步建立

禽多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,PM)是引起禽霍乱的一种病原菌,能快速引起家禽的败血症等一系列病症,给我国的家禽业造成了巨大的经济损失。试验通过在Gene Bank中查询禽多杀性巴氏杆菌的全基因组序列,从而找到PM的保守序列,运用Primer5设计引物,常规PCR后得到目的核酸扩增产物。经过敏感性、特异性、干扰性等试验确定了该方法的特异性和稳定性。结果证明该方法特异性强,敏感性高,干扰性极低,并且与生化鉴定得出的结果有较高的符合率。该方法简单易操作,适合广泛应用于临床以检测禽多杀性巴氏杆菌病。     

禽病病毒的分子生物学研究概述

近年来,分子生物学技术的飞速发展大大提高了对动物病毒病的诊断水平。禽病毒病的实验室诊断技术已从常规的病毒分离鉴定、抗原和抗体的免疫学诊断检测,进入到对病毒基因序列和结构直接进行测定的分子生物学水平、禽病病毒的分子生物学诊断也越来越成熟,本文对有关禽病病毒的分子生物学研究文献。综述如下:     

PCR和核酸探针技术诊断MD和RE的比较研究

分别应用聚合酶链反应(PCR)技术和核酸探针的点杂交技术，对临床鸡肿瘤／可疑肿瘤病料分别进行马立克氏病(MD)和禽网状内皮增生症(RE)的检测。结果MD和RE的PCR检测阳性率分别为81．9％和53．3％，探针点杂交检测的阳性率则分别为77．1％和27．1％。研究的结果表明，两种检测技术都有很高的特异性，相比而言PCR技术检测的敏感性更高，而且更快速、操作更简便、成本更低。     

21世纪中国禽病防制研究展望

我国现代化养禽业起步较晚,70年代末期80年代初期才陆续在全国各地建立了规模化集约化的养禽场,随着养禽生产技术和禽病防制技术的广泛深入应用,我国养禽生产得到了高速发展,家禽饲养总数已跃居世界第一位,蛋类人均占有量也达到发达国家的水平.规模化养禽业的迅速发展,使我国禽病防制研究从深度到广度均取得了令人瞩目的成就,特别是现代免疫学和分子生物学技术在禽病防制研究中的应用,使传统的禽病防制研究开始向现代的禽病防制研究过渡.     

鸡致病性外源性禽白血病病毒特异性核酸探针交叉斑点杂交检测试剂盒的研制

用特定引物通过PCR合成了经地高辛标记的鸡致病性外源性及内源性禽白血病病毒特异性核酸探针,通过交叉斑点分子杂交,这些探针将可用于检测病料样品中致病性外源性禽白血病毒特异性核酸的存在。利用此试剂盒,对从病料组织样品中提取的基因组DNA作交叉斑点分子杂交或对提取的DNA用相应引物扩增后的PCR产物作交叉斑点分子杂交,可在24～36h内完成检测并报告结果。     

遗传改造技术构建疾病动物模型在医药学研究上的应用前景

现代遗传改造技术包括转基因技术、同源重组技术及人工核酸内切酶技术等,现代遗传改造技术得到了快速改进并应用于疾病动物模型制作,其所构建的疾病动物模型能从根本上再现疾病发生和发展的过程,能为疾病发病机理的研究和新药研发提供重现性好且真实可靠的在体试验数据。以CRISPR/Cas9为代表的人工核酸内切酶技术解决了构建疾病动物模型的技术障碍,利用遗传改造技术构建的疾病动物模型有望在今后的医药学研究中发挥重要作用。