胰蛋白酶处理不影响牛体外受精胚胎的活力

本研究按国际通用的方法用０．２５％胰蛋白酶溶液清洗牛体外受精胚胎，然后冷冻或在室温下短期保存胚胎，检查胚胎在体外和体内的发育率，结果表明胰蛋白酶处理的胚胎与未处理胎的发育相似，说明这样的处理对胚胎活力无不良影响。     

混合防冻剂、投液氮温度及解冻温度对牛体外受精胚胎活力的影响

试验一按正交设计比较了三种浓度（０．５Ｍ，０．７５Ｍ和１．０Ｍ）的甘油和丙二醇、三种投液氮温度（－２５℃，－３５℃，－４５℃）、三种解冻温度（１０℃，２０℃，３７℃）对第７、第８天囊胚存活率的影响。结果甘油浓度以１．０Ｍ和０．７５Ｍ的效果较好，胚胎成１６率分别为５４．０％和５３．１％；而丙二醇以０．５Ｍ水平的成活率最高，为６１．６％；投液氮温度以－２５℃的效果最好；（成活率为５６．１％）；解冻温度则以２０℃、３７℃优于１０℃，成活率分别为５７．６％，５８．９％及３７．１％。试验二用０．７５Ｍ甘油十０．５Ｍ雨二醇及１．０Ｍ甘油＋０．５Ｍ丙二醇作为防冻剂，将胚胎降温至－２５℃后投入液氮，在２０℃水浴中解冻。结果两组胚胎的成活率均较高，分别为７９．０％和８０．０％（Ｐ＞０．０５）。     

影响牛胚胎克隆成功率因素的分析

胚胎细胞核移植是实现牛胚胎克隆的有效方法,是产生大量遗传基因相同动物最具潜力的技术。自从Ｒｏｂｌ等（１９８７）最先在牛上进行核移植偿试并获得成功之后,Ｗｉｌａｄｓｅｎ等（１９８９,１９９１）也相继取得了成功,使核移植程序逐步得到完善和改进。国内牛核移...     

影响牛胚胎采集效果的因素

本文在全面分析胚胎采集过程中的每个技术环节基础上,指出影响采胚效果的影响因素,并提出了相应的解决办法及应对措施.     

牛胚胎细胞克隆研究中存在的问题及产业化前景展望

基于现阶段细胞核移植技术产业化可能性研究的进展,本文重点对牛胚胎细胞核移植技术的研究效率、影响因素、存在问题和产业化前景进行了前瞻性的综述。     

牛精制冻过程中影响精子活力的技术环节

目前,虽然牛的冷冻精液配种技术业已普及,但是,在精液冷冻技术操作过程中,仍有一些影响牛精子活力的因素需要进一步探讨。实践证明,精液的处理程序对于精子的活力和受精力有着深刻的影响。下面,我就制冻过程中的若干环节及其对精子的影响作以简述,供参考。一鲜精的采集全国各公牛站均采用假阴道采精法,我们站对此进行了改造,即采用新软联式假阴道采精。经过多年的实践证明,这种软联式假阴道采精法,是一种较为先进的采精方法,并在全国一些公牛站应用。但是,也要特别注意二个问题;一是温度的变化,凡是接触精液的内胎、软联和玻璃器材的表面温度均应保持在30～35℃,否则精子的活力将受到影响;二是假阴道与公牛阴茎的长短要相等。假阴道比公牛的阴茎长或采精方法不当,会造成精液射在内胎上,因为这里温度较高,如温度达到45℃以上,精子将发生不可逆的损伤。在     

牛体外受精胚胎衍生干细胞能力影响因素的研究

以牛卵巢卵母细胞体外受精获取囊胚期胚胎，比较体外受精牛胚胎不同获取内细胞团的方法和不同培养液对体外培养胚胎干细胞能力的影响。结果表明，囊胚期胚胎不除去透明带而直接培养产生胚胎干细胞，初次克隆率为55％；胰酶法去透明带分离的内细胞团（ICM）培养产生胚胎干细胞，初次克隆率为90％。免疫外科法去透明带分离的ICM在4种不同的培养液中，初次克隆率分别为16．4％、11．5％、21．8％、18．2％，但是其分离的ICM经传代后形成的衍生细胞不易发生分化，经过4～6代的传代，仍然保持其完整的形态，说明免疫外科法是一种理想的牛ICM分离法，培养液为D20＋LIF（40ng／mL）可用于牛胚胎干细胞培养。     

浅析牛体内胚胎生产的影响因素

体内胚胎生产是胚胎移植的重要组成部分。最近几年,体内胚胎生产结合胚胎移植技术在良种牛快速扩繁领域里发挥了重要作用,但在生产中,效果仍不稳定。国内外很多学者对提高牛体内胚胎生产的稳定性做了大量研究,本文就国内外专家学者对影响牛体内胚胎生产的外在和内在因素进行了分析总结。     

奶牛胚胎分割和半胚移植技术的研究

以简易方法分割奶牛二分胚39对(78枚);成功率为94.8%(74/78枚);以20%犊牛血清PBS培养液37℃培养2小时,发育复圆率为68.9%(40/58),成对和半胚裸胚移植给黄牛受体的妊娠率为17.1%(6/35)。从而为提高胚胎利用率和生产同卵孪生犊提供了简易方法。     

影响锦江牛胚胎制作效果的因素分析

利用生物辅助保种技术(冷冻胚胎),探索影响锦江牛胚胎制作效果的因素,对牛个体膘情、经产牛、青年牛、胚胎制作时间等进行分析研究。结果显示:经产牛头均A、B级胚胎数、头均获卵数分别是青年牛的190%和181.3%;中上等体膘牛(3~4分)头均A、B级胚胎数、头均获卵数分别是上等体膘牛(4分)的3.1倍、2.3倍;A、B级胚胎数占获卵数的比例为68.2%,高于上等体膘的53.5%(P0.05)。结果表明:锦江牛冷冻胚胎制作效果与牛个体膘情密切相关,选择中上等体膘(3~4分)经产牛是最优选择。     

奶牛胚胎分割试验

本试验采集奶牛７日龄胚胎，应用显微操作仪０．２Ｍ蔗糖ＰＢＳ液中分割胚胎。结果获得８９．７％的（Ａ、Ｂ级）胚胎分割成功率，Ａ、Ｂ、Ｃ级胚胎的分割成功率分别为９６．２％，７５．４％、３２．１％，增加可用胚率分别为９２．５％，５０．８％、７．１％，两项指标三者Ａ均差异极显著（Ｐ＜０．０１），以分割Ａ、Ｂ级胚胎效果较好，胚胎发育阶段不影响胚胎分割成功率，操作者的分割技术熟练程度显著影响胚胎分割成功率。     

牛胚胎移植中影响胚胎质量的因素

胚胎移植整个操作过程要求相当严格。除了供体牛自身的营养状况和身体状况外,饲养管理、超数排卵处理、人工授精效果、微量元素以及天气状况等因素都可影响胚胎质量,现根据实践总结如下:1饲养管理不当,营养水平偏低用来作胚胎移植的供体牛,需加强饲养管理,在进行冲胚前1.5个月开始补饲,以提高牛自身的营养水平,增强体质。如果营养水平偏低,一方面容易造成超数排出的成熟卵母细胞发育不良,丧失受精能力;另一方面超数排卵的成熟卵母细胞与精子结合形成胚胎,但由于营养缺乏,生成的胚胎往往因营养供应不足而退化或发育迟缓。2超数排卵处理剂量不…     

试管牛胚胎的实验室生产过程

应用体外受精技术，可以有效地利用淘汰的高产奶牛和屠宰的青年母肉牛卵巢中的未成熟卵，大量、廉价地实验室生产胚胎。这对加速繁殖我国高产奶牛群和良种肉牛群，是一项行之有效的胚胎工程技术。根据国外实验室生产牛胚胎和我们实验室的实践，比较详细地叙述了体外受精牛胚胎（试管牛）的生产过程，包括卵母细胞的获得、培养，精子获能、体外受精以及受精后的胚胎培养、超低温冷冻保存与解冻后的胚胎移植     

胚胎分割技术的研究进展

摘要：胚胎分割是哺乳动物胚胎工程的重要组成部分。为细胞和胚胎的相关研究提供有力手段,是增加胚胎数目和生产同卵双胎或多胎,扩大优良畜种后代的一个有效方法。虽然胚胎分割还有许多尚未解决的问题,但其已表现出了广阔的发展前景。     

牛胚胎采集技巧

胚胎采集技术在胚胎移植的一系列复杂过程中占有重要位置,正确掌握和运用胚胎采集技术,是顺利获得胚胎、保证胚移成功的关键和基础。笔者从1985年开始从事牛胚胎移植工作,先后3次接受美国专家技术培训,进行胚胎采集模拟练习60多头次,参加正式胚移试验5次,在65头供体牛上进行的超排、采胚,采卵率(采卵数/黄体数)平均为78.6％。个人最好成绩是在10头供体牛上采得卵115枚,头均11.5枚,其中可用胚72枚,头均7.2枚,移植成活牛犊13头。现将胚胎采集的方法及技     

由牛体外受精胚胎分离胚胎干细胞

以DMEM＋15％NBS＋0．1mmol/Lβ－巯基乙醇＋0．01μmol/L亚硒酸钠＋10μg/L LIF＋10μg/L IGF－1作为培养液，以原代小鼠胎儿成纤维细胞为饲养层，利用8日龄牛体外受精胚胎获得了传3代的牛类胚胎干细胞（类ES细胞）。通过体外分析试验，对所得类ES细胞的多能性进行了鉴定。结果在培养2d后，牛类ES细胞分化形成了类似于扩张囊胚的结构，悬浮于培养液中。