木本经济植物苦丁茶组培增殖研究

本文报道了苦丁菜组培中获取无菌材料的方法及组培增殖中的主要影响因素，选择合适的材料，取材季节和灭菌手段可以较蝗建立苦丁茶的初级培养，试验表明：用市售白砂糖和自来水配制的ＭＳ培养基并添加细胞分裂素６－ＢＡ１．０～４．０ｍｇ．Ｌ＾－１，即可让苦丁菜快速增殖，而生长素ＮＡＡ对苦丁茶组培增殖没有促进效应，为加快繁殖速度并获取更多的可生根苗，较低的光照强度（１０００ｌｘ左右）和较低的培养基硬度（０．２％琼脂     

冬青科苦丁茶化学成分研究

苦丁茶主要成分是多酚类、蛋白质，氨基酸，维生素类等，未检出儿茶素和咖啡碱，苦丁茶中氨基酸由１６种水解氨基酸组成含有７种人体必需氨基酸和１种婴儿必需氨基酸，维生素Ｅ含量较高，Ｚｎ、Ｓｅ、Ｇｅ等有益元素含量较多且均衡，是一种理想的保健饮料。     

沙冬青生根组织培养的研究

以沙冬青无菌苗的茎尖为材料，采用Ｍｓ及改良的Ｍｓ培养基，对不同激素进行试验。结果表明：ＩＢＡ在沙冬青的生根组织培养中是必须的，且以０．２ｍｇ／ＬＩＢＡ为最佳浓度；活性炭对沙冬青生根有抑制作用；改良后的１／３Ｍｓ培养基优于１／４Ｍｓ培养基。     

4种(品种)冬青属植物组织培养的研究

以4个冬青属植物品种的腋芽为外植体,研究不同外源激素对冬青属植物离体快繁的影响,并筛选出适合4种(品种)冬青属植物试管苗快繁的培养基.结果表明:(1)在初代培养试验中,4种(品种)冬青属植物污染控制难易不同,"金皇帝"阿尔塔冬青污染率最低,为8.33%;(2)4种(品种)冬青属植物的继代增殖培养基不同,适合"金皇帝"阿尔塔冬青和"金心"阿尔塔冬青的培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L,适合"蓝少女"冬青和"金宝石"钝齿冬青的培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+IBA 0.05 mg/L;(3)4种(品种)冬青属植物试管苗生根培养基为1/2MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.4 mg/L,平均生根率达83.33%.     

苦丁茶树微繁殖技术的研究

以苦丁茶树腋芽为外植体进行培养，诱导腋芽萌发，产生丛芽，同时，试管内外结合法诱导生根，并大田移栽．结果表明：ａ．初代培养以Ｂ５＋ＢＡ２ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ３０．５ｍｇ／Ｌ固体培养基诱导腋芽萌发较好；ｂ．Ｂ５＋ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＺＴ０．２ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ３０．２ｍｇ／Ｌ固体培养基能诱导大量丛芽产生；ｃ．适当剪除叶片并去掉顶芽能促进腋芽萌发；ｄ．小苗在附加ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ，ＩＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ，或ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ，ＩＢＡ０．２ｍｇ／Ｌ的１／２ＭＴ，１／２Ｂ５培养基上培养１０～１５ｄ，插入蛭石上发根，成苗快；ｅ．土壤保湿、避免强光照，是小苗成活的关键．     

北美冬青‘奥斯特’茎段组织培养技术研究[ ]

摘要：为建立北美冬青‘奥斯特’组培植株再生体系,以茎段为材料,探讨枝条部位、接种方式、生长调节剂等对‘奥斯特’组培再生的影响。结果表明：北美冬青‘奥斯特’的最佳增殖培养基为MS+ 4.0 mg?L-1 ZT + 0.2mg?L-1 IBA,其最高增殖系数为3.27,且芽丛生长旺盛;接种茎段上部茎段新梢诱导率和增殖系数显著低于茎段中部和下部,垂直接种要优于水平接种。最佳生根培养基为1/2MS+ 0.4mg?L-1 IBA,生根率为45.2%,根系较长且健壮。关键词：北美冬青‘奥斯特’;组织培养;茎段;增殖;生根     

苦丁茶树体矮化及高产型树冠塑造技术

本文以乔木型苦丁茶树树体矮化理论为指导，以多年研究结果为依据，介绍了获得高产优质高效益的关键──树体矮化及高产型树冠塑造技术措施。     

冬青苦丁茶氨基酸分析

氨基酸对苦丁茶口感、香味以及营养价值均有重要影响,采用岛津ＬＣ－４Ａ高效液相色谱仪分析了湖南、海南、广西广东的商品冬青苦丁茶以及广西大新小明山林场种植的冬青苦丁休树老叶的氨基酸组分及其含量,结果表明：苦丁茶游离氨基酸与水解氨基酸种类相同,为１７种;苦丁茶游离氨基酸含量低,仅３４．２４－１１９．９３ｍｇ／１００ｇ,其中,以组氨酸占绝对优势,占部量的９０％左右,苦丁茶水解氨基酸含量较高,达４．３８－     

与苦丁茶冬青雄性性状连锁的RAPD标记

通过正交试验设计对影响苦丁茶冬青RAPD-PCR反应的5种因素4水平进行优化试验,最终确定苦丁茶冬青RAPD—PCR的最佳反应体系为：在25μL反应体系中,DNA模板20ng,Mg2＋ 2．5mmol·L-1,引物浓度为0．3μmol·L-1,Taq聚合酶浓度为2．0U,dNTPs浓度为200μmol·L-1。最佳的RAPD-PCR扩增程序为：94℃预变性5min,然后94℃变性30s,36℃退火30s,72℃延伸120s,进行40个循环,最后72℃延伸10min;4℃保存。然后通过RAPD技术筛选了91条随机引物,共计有24条引物能在雌／雄DNA／样品池间显示多态性,其中引物S164和S191分别扩增得到2个雄性特异标记S164—900和S191—800。经多次重复实验,RAPD标记均能在雄性个体中稳定出现,故此标记可应用于苦丁茶冬青性别的早期鉴定。     

苦丁茶冬青多糖乙醇分级纯化及其理化性质研究

为了研究苦丁茶冬青多糖醇沉规律及产物理化性质。通过热水浸提和不同浓度乙醇分级沉淀,得到乙醇终浓度为20%、40%、60%和80%的4种苦丁茶冬青多糖组分,即ICP-1、ICP-2、ICP-3和ICP-4。比色法检测各多糖组分总糖、糖醛酸、蛋白质和总酚含量;高效凝胶渗透色谱法进行相对分子质量的测定;紫外和红外光谱扫描考察各组分的光谱性质。结果表明:ICP-1、ICP-2、ICP-3和ICP-4总糖含量分别为19.21%、34.91%、37.70%和30.21%,糖醛酸含量分别为5.04%、44.90%、24.20%和5.84%;凝胶渗透色谱图表明:ICP-2和ICP-3为高纯度均一组分,分子量为440.440与348.279 ku;4种多糖组分在280 nm处均有吸收峰,说明均为糖蛋白质化合物。红外结果显示,各组分均为吡喃糖环构型。以上结果表明,乙醇分级沉淀的方法可用于分级纯化制备组分均一、纯度较高的苦丁茶冬青多糖组分。     

超临界CO2萃取技术分离和纯化苦丁茶中熊果酸的工艺

对超临界CO2萃取苦丁茶中熊果酸的工艺进行了研究,并采用酸碱沉淀法纯化萃取液。结果表明：在以无水乙醇作为夹带剂,CO2流量为20L·h-1,萃取温度为45℃,萃取压力为30MPa,萃取时间为3h的萃取条件下,萃取效果最好,萃取率可达0．453％,最终能得到加=21．44％纯度的熊果酸粗品。该工艺优于传统的熊果酸提取方法,适于产业化生产。     

苦丁茶不同提取物的体外抑菌作用研究

［目的］研究苦丁茶不同粗提物的抑菌效果。［方法］采用试管二倍稀释法和纸片扩散法,对金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌进行体外抑菌试验,并测定其最小抑菌浓度（MIC）、最小杀菌浓度（MBC）和抑菌环直径。［结果］粗提物1抑菌效果较强,高于粗提物2和粗提物3,对金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌的MIC分别为3.91和31.25mg/ml。［结论］苦丁茶的不同粗提物均有不同程度的抑菌作用,为苦丁茶开发成新型、安全的抑菌剂提供参考。     

脱蛋白工艺对苦丁茶冬青叶多糖提取率的影响

采用乙醇对苦丁茶冬青叶进行脱脂,水提醇沉方法得到苦丁茶冬青叶粗多糖。采用Sevag法去除多糖中的蛋白质,研究了除蛋白次数对多糖及蛋白质含量的影响。结果表明,苦丁茶冬青叶多糖采用Sevag法脱蛋白3次以后再继续脱蛋白意义不大。     

与苦丁茶炭疽病抗性基因连锁的RAPD标记

为了研发出与苦丁茶炭疽病抗性基因紧密连锁的RAPD-SCAR特异标记,本研究中首先利用92条RAPD随机引物对苦丁茶冬青中已知对炭疽病高抗或高感的不同种质材料进行RAPD分析,并从中寻找到4个与苦丁茶炭疽病抗性基因紧密连锁的RAPD特异标记特异性片段S69-300,S227-300,S227-2000和S247-400。后续的研究可对这些RAPD特异片段进行回收,扩增和测序,并将测序结果作为开发与苦丁茶炭疽病抗性基因紧密连锁的SCAR标记的基础。     

苦丁茶不同提取物的体外抑菌作用研究（摘要）

[目的]研究苦丁茶不同粗提物的抑菌效果。[方法]制备了3种苦丁苯粗提物。粗提物1：称取苦丁茶50 g,加500 ml去离子水浸泡10 h,加热至沸腾,文火2h,过滤。药渣再加3～5倍去离子水煎煮,方法同上,重复3次。合并3次提取液,用旋转蒸发仪浓缩成50 ml,即每1 ml相当于含生药1.0 g,粗提物2：称取50 g干粉（用中药粉碎机粉碎后过80目）,加500 ml去离子水,水浴80℃恒温振荡3 h,离心,取上清液,浓缩,加3倍体积无水乙醇,离心取沉淀,用去离子水配成50 ml溶液。粗提物3：称取50 g干粉,加500 ml 90%乙醇,采用回流提取法,同流时间3 h,回流次数3次,合并3次提取液,过滤,用旋转蒸发仪浓缩成50 ml。粗提物1、粗提物2、粗提物3分装于棕色试剂瓶,封口,于-20℃冰箱中保存,使用前121℃高压灭菌20 min采用试管二倍稀释法和纸片扩散法,对金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌进行体外抑菌试验,并测定其最小抑菌浓度（MIC）,最小杀菌浓度（MBC）和抑菌环直径。[结果]粗提物1抑菌效果较强,高于粗提物2和粗提物3,对金黄色葡萄球菌与大肠埃希菌的MIC分别为3.91 mg/ml和31.25 mg/ml。粗提物1对金黄色葡萄球菌的抑菌作用效果最好,抑菌能力最强,抑菌作用为高敏,抑菌环直径达（17.46±0.40）mm,对大肠埃希菌的抑菌作用为中敏,但比粗提物2、粗提物3好;粗提物2对这2种菌的抑菌能力都较差,均为低敏,特别是对大肠埃希菌,抑菌环直径只有（6.30±0.16）mm。粗提物3对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的抑菌作用相差不大,都为中敏。粗提物1不但抑菌效果好,且其提取方法、步骤简单,仪器设备价格低,同时不产生废气,可为临床应用上提供支持并带来方便。粗提物3需使用有机溶剂,大量使用容易产生三废,给环境带来一定的危害。考虑到抑菌能力及成本、环保和简便等因素,采用提取粗提物1的方法在生产上比较实用。[结论]苦丁茶的不同粗提物均有不同程度的抑菌作用,为苦丁茶开发成新型、安全的抑菌剂提供了参考。     

红果冬青快繁技术的研究

以红果冬青当年生嫩枝茎段为外植体进行组织快繁试验。结果表明∶红果冬青的最佳诱导培养基为MS+0.2 mg/L NAA+0.9 mg/L BA,增殖培养基为MS+1.5 mg/L BA+0.5 mg/L IBA,生根培养基为1/2MS+1.0 mg/L IBA+0.3 mg/L NAA,生根率达到97.5%。经生根的试管苗移栽于蛭石(V)∶珍珠岩(V)∶泥炭(V)=2∶2∶1混合基质,控制温度20～30℃,相对湿度85%～90%,保湿20～25 d,其间适当遮阴,成活率可达91%。     

苦丁茶鲜叶加工技术研究

以冬青冬冬青属苦丁茶种植物春叶的嫩叶和老叶为原料,采用锅炒杀青、锅炒加盐杀青、蒸青３种加工工艺制成成品茶,分析了各处理对成茶品质的影响,结果表明：嫩叶处理浸提液与老叶处理浸提液的化学尬发含量及种类不同,老叶蒸青浸提液中含有嫩叶蒸青浸提液中没有的成分Ｆ,嫩叶处理浸提液各化学成分含量高于老叶处理;蒸青处理、锅炒另盐杀青处理苦丁茶浸提液的苦味、亮度、色泽和提高水浸出物,各化学成分的浸出量有利;锅炒杀青处     

应用SCAR标记技术对苦丁茶炭疽病抗性进行早期鉴定的构想

讨论了苦丁茶冬青的经济价值及其抗炭疽病育种的必要性和紧迫性;论述了RAPD-SCAR和AFLP-SCAR双重分子标记对苦丁茶抗炭疽病育种的重要意义,以及对苦丁茶冬青炭疽病抗性基因成功进行SCAR标记所必须完成的主要研究内容和必需解决的关键问题;提出了研究方案,并对其可行性进行了分析;预测了此项研究工作的预期结果,并就RAPD-SCAR和AFLP-SCAR双重分子标记技术应用于苦丁茶冬青的抗炭疽病育种工作的创新意义进行了探讨。