食品动物源沙门菌ESBLs和PMQR耐药基因流行特征分析

本研究对从猪、鸭和鹅分离的31株沙门菌进行耐药性分析,调查ESBLs基因和PMQR基因在沙门菌的流行分布特征.结果显示,31株沙门菌中只检测到CTX-M型ESBLs,3株携带blaCTX-M-14,3株携blaCTX-M-27基因;有13株携带blaOXA型均为窄谱blaOXA-1,6株携带blaTEM型也为窄谱blaTEM-1b.blaSHV、blaPER、blaVEB、blaGES等各型β-内酰胺酶基因均未检出.PMQR基因oqxAB和aac(6′)-Ib-cr检出率最高分别为39%和26%.4株鸭源和1株猪源沙门菌中都检测到qnrA基因,而qnrD基因仅在一种猪源沙门菌中检出.qnrB、qnrC、qnrS、qepA等基因均未检出.研究发现有19株沙门菌同时携带β-内酰胺酶和PMQR,其中一株鸭源沙门菌同时携带CTX-M-14 ESBLs和CMY-2 AmpC酶;有7株同时携带4-5种β-内酰胺酶和PMQR基因.     

奶牛牧场养殖环境中产ESBL耐药菌的流行特征

本研究旨在探索奶牛养殖环境中产超广谱β-内酰胺酶（extended-spectrum beta-lactamases，ESBL）耐药菌的流行特征。2020-2021年，采集6个内蒙古和宁夏牧场共160份牛奶、乳区皮肤拭子和环境来源的多种类型样本，分别进行了β-内酰胺酶检测、产ESBL耐药菌的分离鉴定、药敏试验以及菌株的全基因组测序。结果显示：24份奶样的检测结果显示，各牧场β-内酰胺酶阳性率为75%~100%。其中，5个牧场的153份样本共分离出6种产ESBL耐药菌，这些产ESBL耐药菌对阿莫西林（100%）、头孢噻肟（91.0%）和头孢他啶（78.2%）均具有较高耐药率；全基因组显示，14株产ESBL大肠杆菌携带多种耐药基因，以bla_CTX-M（100%）携带率最高。通过对内酰胺酶阳性奶样进行分析，发现造成牧场奶样β-内酰胺酶阳性的主要菌株是产ESBL鲍曼不动杆菌，并且该耐药菌携带有bla_CTX-M、bla_TEM、bla_OXA型β-内酰胺类耐药基因。本研究明确了内蒙古和宁夏牧场养殖环境中产ESBL耐药菌的流行特征，并对造成内蒙古1个牧场牛奶内酰胺酶阳性原因进行了追溯研究。     

鸡肠毒综合征致病菌的自动生化鉴定及药敏分析

用全自动微生物鉴定系统（VITEK-32）对引起鸡肠毒综合症的病原菌进行了鉴定,并做了β-内酰胺酶（BLA）、超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）、AmpC酶的检测和药敏试验,测定了药物的最小抑菌浓度（MICs）。经过鉴定分离的6株致病菌中3株为大肠杆菌,另外3株分别为阴沟肠杆菌、假单胞菌、柠檬酸杆菌。经检测6株致病菌均为BLA阳性且对大部分抗生素耐药较严重,β-内酰胺酶抗生素／抑制剂或抗生素的联合用药能部分恢复药物对细菌的敏感。     

55株鸡大肠杆菌超广谱β-内酰胺基因的检测分析

通过ESBLs初筛实验方法和以blaTEM, blaSHV、blaCTX-M为引物的ESBLs耐药基因扩增,检测出55株大肠杆菌分离株有46株呈ESBLs表型,37株携带至少一种bla基因。其中26个分离株携带TEM基因,32个分离株携带CTX-M基因(16个CTX-M-15,10个CTX-M-55,6个CTX-M-3),没有分离到携带blaSHV基因的大肠杆菌。另外有9株不含blaTEM, blaSHV或blaCTX-M中的任何一个基因。结果显示多数大肠杆菌分离株呈产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)表型,ESBLs基因分型以TEM型、CTX-M型为主,45.6%的菌株同时携带两种基因。     

鸡源大肠杆菌分离鉴定及ESBLs与AmpC酶基因型检测及耐药性分析

为了解山西省范围内鸡源产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和头孢菌素酶（AmpC）大肠杆菌分离株的基因型及其耐药现状，本试验从呈现典型鸡大肠杆菌病临床症状的病料中分离、鉴定出68株符合鸡源大肠杆菌生物特性的流行菌株，采用K-B法与双纸片确认法对分离的68株大肠杆菌分别进行药敏试验和ESBLs、AmpC酶耐药表型的筛选；采用PCR方法检测了分离株中质粒介导的ESBLs、AmpC酶的基因型。结果显示，分离到的68株菌对22种抗菌药物均产生不同程度的耐药性，其中耐药谱达7耐以上的有66，占总分离菌株数的97.06%；呈ESBLs、AmpC酶阳性和两者均阳性的菌株数分别为57（83.82%）、19（27.94%）和16（23.53%）株；检测出ESBLs阳性菌株携带的耐药基因型包括bla_TEM、bla_OXA和bla_CTX-M-1/9，AmpC酶阳性菌株耐药基因型为bla_FOX型。研究结果表明，分离的68株鸡源大肠杆菌已对绝大多数种类抗菌药物产生耐药性，且产ESBLs和AmpC酶菌株已普遍流行。山西省鸡源大肠杆菌中流行的ESBLs基因型与国内其他地区相关报道大体一致，而检测到的bla_FOX型AmpC酶基因在国内报道相对较少。     

大肠埃希氏菌对β-内酰胺类抗生素耐药机制的研究进展

摘要：产β-内酰胺酶是大肠埃希氏菌对β-内酰胺类抗生素耐药的主要机制。本文主要综述大肠埃希氏菌产ESBLs、AmpCβ-内酰胺酶的分类及各类型酶对β-内酰胺类抗生素产生耐药性的机制。     

鸡源大肠杆菌AmpC型β-内酰胺酶的分子检测

为了解河南地区AmpC型β-内酰胺酶耐药基因在产16S rRNA甲基化酶鸡大肠杆菌的流行与分布,分别设计特异性引物对2005—2008年在河南地区病鸡的病料中分离保存的158株16S rRNA甲基化酶阳性鸡大肠杆菌进行聚合酶链式反应扩增。检测结果显示,在158株产16S rRNA甲基化酶鸡大肠杆菌中,CMY-2和DHA-1检出率分别为34.8%和36.1%。提示AmpC型β-内酰胺酶耐药基因在河南地区产16S rRNA甲基化酶鸡大肠杆菌中普遍存在。      

家禽中bla_(NDM)阳性大肠杆菌的筛查和传播特征分析

对从山东某养鸡场分离的29株鸡源大肠杆菌和从广东某兽医站采集的182份死禽器官样品筛查bla_(NDM)阳性大肠杆菌,采用药敏试验检测产NDM(New Delhi metallo-β-lactamase)大肠杆菌对14种抗菌药物的敏感性,PCR方法检测菌株携带的其他耐药基因;通过脉冲场凝胶电泳(pulsed filed gel electrophoresis,PFGE)分析菌株间的亲缘关系,并进一步进行接合转移/转化试验、Southern blot杂交以及复制子分型分析bla_(NDM)质粒特征。结果显示:在29株山东鸡源大肠杆菌和182份广东病死禽样品中分别检测到9株和22株bla_(NDM)阳性大肠杆菌,bla_(NDM)基因亚型包括bla_(NDM-1、)bla_(NDM-5和)bla_(NDM-9);药敏试验结果显示bla_(NDM)阳性大肠杆菌对β-内酰胺类抗生素普遍耐药,对其他多类抗生素耐药率也较高;PFGE分型表明,bla_(NDM)阳性大肠杆菌亲缘关系总体较远,在小范围内存在克隆现象;Southern blot和接合转移试验结果表明,所有菌株bla_(NDM)基因定位于质粒上,且大部分携带bla_(NDM)基因的质粒可进行接合转移,质粒为IncB/O、IncY、IncX3、IncHI2和IncI1-HI2型质粒。结果表明:bla_(NDM)阳性大肠杆菌在广东和山东某些地区流行较为严重,且多重耐药现象严重;bla_(NDM)基因主要通过接合转移方式进行水平传播,也存在小范围的克隆传播。     

野生草食动物源奇异变形杆菌的耐药性分析

为了检测从野生草食动物临床标本中分离的62株奇异变形杆菌对23种抗菌药物的体外活性以及这些杆菌产生超广谱β-内酰胺酶、AmpC酶、金属β-内酰胺酶的情况,正确指导兽医临床合理使用抗菌药物。用API-20E对分离获得的菌株进行鉴定,双纸片协同试验和确证试验筛选超广谱β-内酰胺酶,纸片扩散法检测AmpC酶,改良Hodge试验检测金属β-内酰胺酶,药敏试验采用标准的纸片扩散法。实验证实分离获得的奇异变形杆菌产酶率为25.8%（16/62）,其中超广谱β-内酰胺酶为16.1%（10/62）,AmpC酶为9.7%（6/62）、金属β-内酰胺酶为0%（0/62）。头孢曲松钠、头孢他啶、头孢吡肟、氨曲南、亚胺培南、头孢噻肟钠、丁胺卡那霉素和左氧氟沙星的敏感率大于80%。这说明产β-内酰胺酶的奇异变形杆菌在野生草食动物临床中占较大的比例,实验室需加强检测。三代头孢菌素、四代头孢菌素、氨曲南、亚胺培南、丁胺卡那霉素和左氧氟沙星是治疗奇异变形杆菌感染的首选药物。     

山东地区产CMY-2型β-内酰胺酶鸡源大肠杆菌的出现及相关特性研究

从山东省不同地区分离到126株鸡源大肠杆菌，利用PCR对CMY-2基因进行检测，其中15株呈CMY-2阳性；核苷酸序列分析结果表明，除JN10外，其余序列与GenBank中已发表的CMY-2序列完全相同；采用K-B法检测15株大肠杆菌对抗生素的敏感性，结果发现，菌株均耐头孢噻吩、头孢唑啉、头孢克洛、头孢克肟、氨苄西林、链霉素、四环素、氯霉素和甲氧苄啶／磺胺甲嗯唑，其中3株（JN5、JN9和HZ9）耐头孢曲松和头孢他啶，但所有菌株对头孢吡肟敏感；改良三维试验证实，15株大肠杆菌均产AmpC β-内酰胺酶，其中4株同时产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）；接合试验表明，携带CMY-2基因的质粒能在大肠杆菌间传递；脉冲场凝胶电泳（PFGE）排除了所有菌株来源于同一大肠杆菌克隆的可能性。本研究为探讨和解决细菌耐药性问题提供了重要的理论依据和研究基础，同时对了解山东地区大肠杆菌的耐药状况和耐药性散播情况提供了重要的信息。     

广东地区患病食品动物源大肠杆菌ESBLs和AmpC酶流行分布调查

质粒介导的超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）和AmpC酶广泛传播和扩散,导致全球范围内肠杆菌科细菌对超广谱头孢菌素类的耐药性发展迅速,引起人们高度重视。食品动物源大肠杆菌可作为耐药基因储库,对细菌耐药性在动物、环境和人之间的传播起着非常重要的作用。本研究从2009年患病的食品动物,包括鸡、鸭、鹅和猪,分离鉴定了315株大肠杆菌,调查ESBLs和AmpC酶在患病食品动物中的流行分布。经双纸片协同扩散实验筛选出61株ESBL阳性菌株,PCR检测共检测出8种blaCTX-M基因,分别为blaCTX-M-14/14b、blaCTX-M-79、blaCTX-M-65、blaCTX-M-27、blaCTX-M-15、blaCTX-M-24、blaCTX-M-98和blaCTX-M-13,其中检出率最高的为blaCTX-M-79,其次为blaCTX-M-14/14b。本研究还检测出1株新的SHV型酶,命名为SHV-135;PCR共检测出5株大肠杆菌携带质粒源CMY-型AmpC酶,其中2株鹅源大肠杆菌携带1个新型CMY酶,命名为CMY-64。本研究表明患病动物分离的大肠杆菌中ESBLs和AmpC酶存在复杂性和多样性,而且新型β-内酰胺酶检出日益增多,提示兽医临床应慎用β-内酰胺类抗生素。     

鸡肠杆菌科细菌-内酰胺酶和超广谱-内酰胺酶的检测及药敏分析

用全自动细菌鉴定系统对从临床分离鸡致病菌进行了鉴定,并进行了β-内酰胺酶（BLA）和超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的检测,同时测定了多种药物的最小抑菌浓度（MIC）。经鉴定9株致病菌中1株为沙门菌,8株为大肠杆菌;9株致病菌均为BLA阳性,其中有1株为ESBLs阳性;9株细菌对部分抗生素耐药,β-内酰胺类抗生素/β-内酰胺酶抑制剂或多种抗生素的联合用药能部分的恢复细菌对药物的敏感性。旨在为新药的开发提供依据。     

产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）乳牛乳腺炎大肠杆菌的检测及其基因型分布

为了解采自内蒙古和上海地区的产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）乳牛乳腺炎大肠杆菌的流行特点、耐药性和基因型分布,采用美国临床实验室标准化委员会（CLSI）2005年推荐的初筛及纸片确认方法对内蒙古地区的58株和上海地区的22株乳牛乳腺炎大肠杆菌进行了ESBLs的检测及耐药性分析,并采用PCR扩增和PCR产物测序方法对产ESBLs菌株进行基因分型。结果显示,内蒙古地区检出6株产ESBLs菌株,阳性率为10.34%,其中,有1株菌携带TEM-1基因,有1株携带CTX-M-14型基因,而有3株同时携带TEM-1型和CTX-M-14型2种基因,只有1株菌未检出上述基因。上海地区未检出产ESBLs菌株。结果表明,产ESBLs菌株多表现为多重耐药,对各种抗菌药物的耐药率明显高于非产ESBLs菌株。     

麻旺鸭源大肠杆菌耐药表型分析及β-内酰胺酶、PMQR基因检测

本研究旨在了解麻旺鸭源大肠杆菌对β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类、酰氨醇类、氟喹诺酮类和磺胺类药物的耐药情况以及β-内酰胺酶基因和质粒介导的喹诺酮耐药(plasmid-mediated quinolone resistance, PMQR)基因流行情况。从重庆市酉阳县4个麻旺鸭养殖场采集146份泄殖腔拭子样品,经选择性增菌和PCR扩增大肠杆菌特异性phoA基因分离鉴定大肠杆菌。采用纸片扩散法测定分离菌对25种抗菌药物的耐药性并检测分离菌株中的β-内酰胺酶基因和PMQR基因。结果显示：共分离到大肠杆菌146株。这些菌株对氨苄西林、头孢唑啉耐药严重,耐药率超过50%;对庆大霉素、阿米卡星、氧氟沙星完全敏感。分别有111株(76.0%)和83株(56.8%)菌携带至少1种β-内酰胺酶基因和PMQR基因,其中bla_TEM(74.0%,108/146)和qnrS(54.8%,80/146)基因最为流行。63株菌同时携带β-内酰胺酶基因和PMQR基因。麻旺鸭源大肠杆菌对常用抗菌药物存在耐药,且广泛携带β-内酰胺酶基因和PMQR基因。     

动物源大肠杆菌超广谱β-内酰胺酶与头孢菌素酶基因型分析

为了解重庆地区动物源大肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)及头孢菌素酶(AmpC)基因型的分布,利用初筛及表型确认方法,从临床分离的192株仔猪白痢大肠杆菌、65株奶牛乳腺炎大肠杆菌、69株鸡大肠杆菌中筛选出19株产ESBLs、6株产ArnpC酶大肠杆菌,并应用PCR扩增及PCR产物测序方法进行ESBLs及AmpC基因型分析.结果显示,重庆地区动物源大肠杆菌携带TEM型、CTX-M型、DHA-1型和CMY-2型基因的阳性率分别为2.15%、5.21%、0.61%和0.61%.其中,有5株同时携带2种基因.而DHA-1型基因为国内兽医临床首次检出,获得GenBank登录号为FJ386455.结果提示,重庆地区以TEM型和CTX-M型β-内酰胺酶为主,且产ESBLs与AmpC酶大肠杆菌为多重耐药菌株,需引起兽医临床的高度重视.     

新疆石河子市牛源大肠杆菌分离鉴定及对β-内酰胺类药物的耐药性分析

为调查石河子市牛源大肠杆菌对β-内酰胺类药物的耐药表型和耐药基因携带情况,采集健康牛群粪便,采用常规细菌分离鉴定方法并结合16S rRNA PCR检测方法进行分离鉴定;参考Clermont方法对分离菌株进行系统分子分群,采用PCR方法检测分离菌株的β-内酰胺类耐药基因blaCTX-M、blaOXA、blaSHV和blaTEM携带情况,通过K-B纸片法测定分离菌株耐药表型。结果显示：分离鉴定出100株牛肠道大肠杆菌分属于A、B1、C和F群;分离株对头孢唑林和阿莫西林的耐药率在50%以上,对氨苄西林、头孢氨苄与头孢吡肟的耐药率均在5%以下,所有分离株对头孢吡肟敏感;5株分离菌株检测到blaSHV基因片段,1株检测到blaCTX-M基因片段,所有菌株均未检测到blaOXA和blaTEM基因片段。结果表明,石河子市牛源正常大肠杆菌已少部分携带耐药基因,且对部分β-内酰胺类药物产生了耐药性。结果提示,应加快减抗政策的实施。     

鸡源大肠杆菌分离鉴定及ESBLs与AmpC酶基因型检测及耐药性分析

为了解山西省范围内鸡源产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和头孢菌素酶(AmpC)大肠杆菌分离株的基因型及其耐药现状,本试验从呈现典型鸡大肠杆菌病临床症状的病料中分离、鉴定出68株符合鸡源大肠杆菌生物特性的流行菌株,采用K-B法与双纸片确认法对分离的68株大肠杆菌分别进行药敏试验和ESBLs、AmpC酶耐药表型的筛选;采用PCR方法检测了分离株中质粒介导的ESBLs、AmpC酶的基因型。结果显示,分离到的68株菌对22种抗菌药物均产生不同程度的耐药性,其中耐药谱达7耐以上的有66,占总分离菌株数的97.06%;呈ESBLs、AmpC酶阳性和两者均阳性的菌株数分别为57(83.82%)、19(27.94%)和16(23.53%)株;检测出ESBLs阳性菌株携带的耐药基因型包括bla_(TEM)、bla_(OXA)和bla_(CTX-M-1/9),AmpC酶阳性菌株耐药基因型为bla_(FOX)型。研究结果表明,分离的68株鸡源大肠杆菌已对绝大多数种类抗菌药物产生耐药性,且产ESBLs和AmpC酶菌株已普遍流行。山西省鸡源大肠杆菌中流行的ESBLs基因型与国内其他地区相关报道大体一致,而检测到的bla_(FOX)型AmpC酶基因在国内报道相对较少。     

兔源大肠杆菌耐药性检测与分析

采用K-B法对89株兔源大肠杆菌进行了8种β-内酰胺类药物的药敏实验,采用普通PCR法检测全部菌株的ESBLs酶基因和多重PCR法检测AmpC酶基因。结果显示,山东省部分规模化兔场分离的大肠杆菌除对头孢噻肟(CTX)和头孢哌酮(CFP)的耐药率为0之外,对头孢呋辛(CXM)、青霉素G(PEN)、氨苄西林(AMP)、头孢曲松(CRO)、哌拉西林(PIP)的耐药率分别为30.33%、70.79%、65.17%、17.98%和12.36%;耐药基因检测结果显示,89株大肠杆菌中有38株未检出β-内酰胺类药物的耐药基因,占所检菌株的42.70%;44株仅携带一种耐药基因(23株携带产ESBLs酶基因,占25.84%;21株携带产AmpC酶基因,占23.60%);4株携带产ESBLs酶2种基因;2株同时携带产ESBLs酶和AmpC酶3种耐药基因,仅1株同时携带产ESBLs酶和AmpC酶4种耐药基因。结果提示兔源大肠杆菌对β-内酰胺类耐药未产生较为广泛的耐药性。     

大肠杆菌β-内酰胺酶耐药基因blaTEM,blaSHV,blaCTX-M三重PCR检测方法建立

本研究以我国大肠杆菌中常见的3种β-内酰胺酶耐药基因(bla,TEM blasHV和blaCTX-M)作为目的基因,设计3对特异性引物,建立了blaTEM,bla SHV和blaCTX-M耐药基因三重PCR检测方法.三重PCR反应体系为:10×PCR缓冲液2.5 μL,MgCl2(25 mmol/L) 2.5 μL,dNTP (2.5 mmol/L)4 μL,blaTEM,blasHV和blaCTX-M上下游引物(25 μmol/L)分别为0.25 μL、0.5 μL、1.0μL,Taq DNA聚合酶(2.5 U/μL)0.4μL,模板2.5μL,反应总体积为25 μL.反应参数为:94℃5 min,94℃50 s,55℃55 s,72℃1 min,32个循环,72℃延伸5 min.本方法的建立为大肠杆菌中β-内酰胺酶耐药基因的快速检测及分子流行病学调查提供了新的手段.     

青海地区畜禽源志贺菌产超广谱β-内酰胺酶和头孢菌素酶表型检测及基因型分析

为了解青海省不同动物源志贺菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和头孢菌素酶(AmpC)的基因型分布情况,对75株志贺菌进行表型筛选,PCR法确定其ESBLs和AmpC酶基因型.结果:酶表型筛选呈阳性菌株共50株,其中:1株为单产ESBLs阳性菌,42株为单产AmpC酶阳性菌,7株同时产ESBLs和AmpC酶.40株携带...