吉林白鹅GH基因和IGF-Ⅰ基因PCR-RFLP研究

为研究生长激素及其相关基因在不同肉鹅群体中的多态性,以GH和IGF-Ⅰ基因为研究对象,对吉林省肉用鹅群体的225个个体进行PCR-RFLP（Restriction fragment length polymorphism,限制性片段长度多肽）分析.结果发现：吉林白鹅生长激素（GH）和类胰岛素样生长因子均未发现多态性.     

浙东白鹅和四季鹅GH基因外显子多态性分析

以浙东白鹅和四季鹅为试验材料,采用PCR-SSCP技术,对鹅GH基因5个外显子序列进行多态性分析.结果表明:鹅GH基因外显子2和4发现了4个SNP多态位点,分别为外显子2的C39T、C74T突变和外显子4的T291C、G297A突变,其中C74T突变为错义突变,其他3个均为同义突变.在GH基因外显子2 SNP位点上,浙东白鹅和四季鹅分别以等位基因D和A为优势等位基因;在外显子4 SNP位点上,2个鹅群体均以等位基因A为优势等位基因.在外显子2和4多态位点上,浙东白鹅和四季鹅均处于Hardy-Weinberg平衡.     

西藏绒山羊GH基因的PCR-RFLP检测及其与生产性状的相关性

利用PCR-RFLP标记技术及序列分析,对245只西藏绒山羊的GH基因的多态性位点进行检测.结果发现:GH基因在西藏绒山羊群体中存在HaeⅢ内切酶位点多态性,存在AA、AB和BB三种基因型,基因型频率分别为0.012、0.610和0.378,PIC=0.339,属于中度多态,经x2适应性检验,该位点处于Hardy-Weinberg不平衡状态(P＜0.05).AB基因型和BB基因型与生产性状相关性分析结果表明,基因型和性别的互作,对研究群体的十字部高、毛长和产绒量有极显著的影响(P＜0.01).由此可见,GH基因的HaeⅢ内切酶位点可能是影响西藏绒山羊生产性状的主效QTL或与之紧密连锁,可作为西藏绒山羊生产性状的辅助选择标记.     

南江黄羊GH基因的PCR-RFLP与早期生长发育的相关分析

本研究以90只南江黄羊为材料,对山羊GH基因（gGH）部分片段进行了PCR-RFLP分析,并对GH基因的PCR-RFI,P与早期生长发育性状的相关性进行了研究。结果表明扩增产物片段长度为985bp,包括gGH内含子3、4以及外显子3、4、5的全部序列。分别用限制性内切酶FokⅠ和AciⅠ酶切分析扩增产物,均具有多态性,其中内切酶FokⅠ酶切产生GG、GA和AA3种基因型,频率分别为0．522、0．289和0．189,等位基因G的频率（0．666）高于等位基因A（0．334）;AciⅠ酶切产生CC、TC和TT3种基因型,频率分别为0．467、0．322和0．211,等位基因C的频率（0.628）高于等位基因T（0.372）。x^2检验结果表明2种限制性内切酶产生的基因型频率在群体中都处于Hardy-Weinberg非平衡状态。进一步对gGH的PCR-RFLP与早期生长发育的相关分析表明,FokⅠ酶切位点具有GA基因型的个体和AciⅠ酶切位点具有TC基因型个体的各年龄阶段体重、体高和体长的最小二乘均值均显著或极显著高于其它基因型的个体（0．05〈P〈0．01或P〈0．01）。     

吉林白鹅小肠形态学发育规律

应用组织切片技术对11～53日龄吉林白鹅小肠绒毛高度、绒毛宽度、隐窝深度和肌层厚度进行测定。结果显示,小肠各段绒毛高度及宽度随日龄增加整体上呈增长趋势,空肠绒毛最长,回肠绒毛高度、宽度在39日龄达到峰值,早于空肠和十二指肠。回肠隐窝深度11～53日龄随日龄增加而增加,十二指肠和空肠隐窝深度在39日龄达到峰值,39～53日龄变浅。小肠各段肌层厚度与日龄呈正相关,回肠的肌层厚度在46日龄达到高峰,十二指肠和空肠的肌层厚度在53日龄达到高峰。小肠各段绒毛高度/隐窝深度的比值随日龄增加而增加,53日龄时空肠的绒毛高度/隐窝深度的比值最高。     

吉林白鹅α干扰素基因的原核表达及抗血清的制备

采用PCR方法扩增了吉林白鹅α干扰素（JL-GolFN—α）成熟肽编码序列,将IFN—α片段定向插入原核表达载体pGEX-6p-1中,构建重组质粒pGEX—IFN—α,将重组质粒转入大肠杆菌BL21（DE3）的感受态细胞里,在IPTG诱导下表达可溶性的融合蛋白（GST—IFN—α）。SDS—PAGE、Western—blot检测结果表明,重组吉林白鹅IFN—α融合蛋白（rJL—GoIFN-α）的分子量大小约为43ku,表达量占菌体总蛋白的25％。重组吉林自鹅仅干扰素,经谷胱甘肽Sepbarose-4B亲和柱层析纯化后,经过透析复性,得到纯化的目的蛋白,含量可达0．25mg／mL。将复性蛋白免疫新西兰白兔3次,制备高滴度的鹅IFN—α抗血清。本实验表达和纯化了鹅的IFN—α,并制备了兔抗鹅的IFN—α抗血清,为下一阶段鹅α干扰素重组蛋白的应用奠定了基础。     

牛类胰岛素生长因子IGF-I基因研究

采用PCR-SSCP和PCR-RFLP技术分析了类胰岛素生长因子1（IGF-I）基因5’侧翼区、第5外显子、第2外显子在南阳牛、鲁西牛、中国西门塔尔牛3个牛品种中的遗传多态。结果表明在IGF-I基因的5’侧翼区、第5外显子上未发现PCR-SSCP或PCR-RFLP遗传多态；在第2外显子中发现PCR-SSCP多态，有3种基因型AA型、AB型、BB型。对第2外显子的多态片段测序分析表明；在35bp处有碱基A→G的突变，248bp处有碱基C→T的突变，256bp处有碱基A→G的突变；35bp、248bp的碱基突变都是无义突变，而256bp处碱基A→G的突变为有义突变，使谷氨酸变为甘氨酸。     

皖西白鹅与朗德鹅垂体中GH基因表达的研究

本试验旨在研究生长激素对皖西白鹅与朗德鹅相关生长性能的影响。选择90日龄的皖西白鹅和朗德鹅各20只，于屠宰后称量每只鹅的屠体重，并将垂体组织在存入液氮后，采用半定量逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）的方法，以B—actin为内参，对其组织中GHmRNA表达量进行比较分析，并分别对两种鹅的屠体重进行相关性分析。结果表明：朗德鹅与皖西白鹅的屠体重（3029．25±269．455 vs 2920．313±457．604）差异不显著，并且公母之间均无显著差异。朗德鹅垂体中GHmRNA表达显著高于皖西白鹅（1．188±0．172 vs 0．744±0．289，p〈0．05），屠体重与GH mRNA的表达无显著相关。试验提示：GH mRNA表达量与两种鹅生长性能无明显关系，鹅的生长主要取决于生长激素的靶机制。     

吉林白鹅羽毛(绒)生长发育规律的研究

本试验对吉林白鹅羽毛(绒)生长发育规律进行了研究。分别在34、44、54、64日龄随机抽取15只试验鹅,以颈部放血法屠宰后,采集翅部、背部、腹部、尾部羽毛(绒),主要测量羽毛的羽轴、羽枝、羽根及羽绒的长度。结果表明,羽毛的生长是一个渐变的过程,不同部位的羽毛成长速度不同,换羽时间也不一致;同一部位的羽绒、羽枝、羽轴随着日龄的增长,变化趋势基本一致,而羽根的变化趋势与羽绒、羽枝、羽轴的相反。     

吉林白鹅(农安籽鹅)品种特性研究

本文较详细地报道了吉林白鹅的品种特性 :体型外貌特征及体尺体重、生长发育规律、产肉性能、产蛋性能、产绒性能、肥肝性能及某些经济性状的遗传参数。结果表明 :吉林白鹅早期生长发育较快 ,其中 2 ,3周龄最快 ;在放牧为主补饲为辅的条件下 ,年均产蛋 60～ 80枚 ,在科学饲养条件下 ,年均产蛋 1 2 5枚 ;含绒率冬季可达 2 4 2 %;成龄体重、产蛋数、绒毛重、肥肝重的h2 分别为 0 57,0 2 8,0 4 1 ,0 52。吉林白鹅的高产蛋性能和含绒率 ,是世界鹅品种中非常罕见和宝贵的高产基因 ,经过进一步系统选育提高 ,可以成为国内外杂交配套系的理想母本。     

吉林白鹅消化道纤维分解菌的鉴定

选择54日龄吉林白鹅(肉用),无菌刮取盲肠内壁黏膜,筛选菌株进行分离培养,应用DNS法测定酶活力,通过菌株生化试验及16S rDNA测序同源性比较,鉴定出具有产纤维素酶特性的菌株,利用PCR进行筛选,基因组部分测序,结果经序列BLAST比对,确定其部分序列与无芽孢杆菌同源性达到99%,初步鉴定为无芽孢杆菌属。     

吉林白鹅胫骨生长发育及钙磷沉积规律的研究

本研究运用Logistic和Gompertz两种非线性生长模型对不同日龄吉林白鹅胫骨生长发育进行拟合分析,并研究了胫骨钙磷沉积、灰分含量的变化规律.结果表明,两种模型均能较好的拟合吉林白鹅胫骨的生长发育规律,拟合度为0.980～0.999.14、24日龄胫骨生长速度极显著的高于其他各日龄(P＜0.01),钙及灰分含量与其他各日龄相比差异极显著(P＜0.01);64日龄胫骨各项物理指标显著高于54日龄(P＜0.05),54～64日龄胫骨钙磷及灰分含量均有所下降但差异不显著(P＞0.05).同日龄胫骨两端钙磷及灰分含量与骨干相比差异显著(P＜0.05).总体而言,吉林白鹅胫骨在1～24、54～64日龄时出现两个快速生长期;前一快速生长期内胫骨钙磷沉积速度快、灰分含量不断增加,之后钙磷沉积减慢,灰分含量仍不断增加;54日龄以后胫骨钙磷及灰分含量下降;胫骨两端钙及灰分低于同日龄骨干钙及灰分,两端磷含量则高于同日龄骨干磷含量.     

吉林白鹅大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

为了指导临床合理使用药物 ,有效防治鹅大肠杆菌病 ,采取病鹅的肝、心血作细菌的分离培养 ,经革兰氏染色、镜检和多种糖发酵试验以及VP、MR试验 ,鉴定该细菌为大肠杆菌 ;采用试管液体二倍稀释法进行药敏试验 ,测定了 10种药物对鹅大肠杆菌分离株的最小抑菌浓度 ,从中筛选出最有效的抗大肠杆菌药物。     

马DRD4基因部分序列克隆和PCR-RFLP分析

克隆了马DRD4基因完整第1内含子及部分第1、2外显子序列,并用StuⅠ限制性内切酶通过PCR-RFLP技术检测了包括引入品种、培育品种和地方品种6个类型共270匹马的DRD4基因部分序列多态性。用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳将酶切产物分离,并用银染法显色。结果经StuⅠ内切酶消化表现出多态,由3种共显性等位基因控制,出现了6种基因型;经Hardy-Weinberg平衡检验,乌审马（WS）、巴而虎马（BH）和乌珠穆沁马（WZ）（P〉0.05）达到平衡,而其余均未达到平衡（P〈0.05）。     

太湖鹅与皖西白鹅胸肌IGF-I和MSTN的表达及其与屠宰性状相关性分析

本研究旨在探讨IGF-I、MSTN对鹅骨骼肌生长的影响。以太湖鹅和皖西白鹅为研究素材,采用多重荧光竞争性PCR和酶联免疫方法,测定鹅70日龄胸肌中IGF-I、MSTN的mRNA和蛋白表达情况,并与屠宰性能做相关性分析。结果证实,70日龄时太湖鹅体重、胸肌重极显著小于皖西白鹅,但是胸肌率没有差异,并且品种间在体重和胸肌重上存在性别差异;胸肌IGF-I和MSTN的mRNA、蛋白表达均无品种差异,并且在品种间也不存在性别差异;同一品种的公母鹅相比较,太湖鹅公鹅胸肌IGF-I mRNA表达显著高于母鹅;除了胸肌IGF-I的含量与MSTN的mRNA表达和蛋白含量呈显著正相关,胸肌IGF-I、MSTN的mRNA表达和蛋白含量相互之间均无显著相关性,鹅胸肌IGF-I mRNA表达量和胸肌率、胸肌重、体重呈显著负相关,皖西白鹅胸肌中MSTN的表达与体重呈强的负相关。结果提示,70日龄时鹅胸肌生长正负调节基因IGF-I与MSTN的表达无品种特异性,二者表达水平处于一个动态平衡之中,特别参与了70日龄皖西白鹅的生长调控。     

吉林白鹅毛囊发育及IGF-1、EGF基因对其发育调控的影响

旨在研究吉林白鹅毛囊发育以及IGF-1、EGF基因对毛囊发育过程调控的影响。选择保存7d内的吉林白鹅种蛋300枚,饲养到出雏后28d。分别在孵化期23(E23),27(E27)d,出雏后0,1,4,7,14,21,28d取样,共9个处理组,将E23作为对照组,每个处理6个重复,采用单因素完全随机试验设计,测定初级毛囊和次级毛囊密度、毛球直径、IGF-1、EGF基因在皮肤中的相对表达量。结果表明,吉林白鹅E23~28d,初级毛囊密度显著降低(P0.05),初级毛囊毛球直径显著增加(P0.05),次级毛囊密度显著增加(P0.05),次级毛球直径显著增加(P0.05)。吉林白鹅胸部为主要产绒部位。吉林白鹅E23~28d皮肤中IGF-1、EGF基因相对表达量显著增加(P0.05)。IGF-1和EGF基因可以促进次级毛囊的发育,对吉林白鹅毛囊发育起到了调控的作用。     

四川白鹅MTP基因的组织表达特性研究

本研究采用RT-PCR方法以四川白鹅(Anser cygnoides)为研究材料,探讨了1、10、13、14和16周龄肝脏、小肠、脑、胸肌、腹肌、腹脂、皮脂和心脏等组织中微粒体甘油三酯转运蛋白(MTP)基因的表达特性.结果显示:1周龄,MTP基因只在小肠组织中表达;10周龄,除在肝脏、小肠组织中,首次发现脑组织为MTP基因特有表达组织;MTP基因在肝脏和小肠中的表达量随周龄增加呈逐步上升趋势;1～13周龄,小肠＞肝脏(P＜0.05);14～16周龄,小肠＜肝脏(P＞0.05);填饲期,肝脏组织中MTP表达无显著变化(P＞0.05),而小肠组织MTP表达水平却显著升高(P＜0.05).结果表明MTP基因在四川白鹅脂肪沉积和转运过程中具有极重要的调控作用.     

不同纤维源日粮对吉林白鹅生产性能和小肠发育影响的研究

为研究不同纤维源日粮对吉林白鹅生产性能和小肠发育的影响,选用21日龄吉林白鹅64只,随机分成2组,每组4个重复,每个重复8只,分别饲喂玉米秸秆和黑麦草目粮,饲养4周。结果表明:在饲粮代谢能和粗蛋白水平相同条件下,黑麦草组吉林白鹅饲料增重比显著低于玉米秸秆组(P0.05),39、46、53日龄黑麦草组十二指肠绒毛高度显著高于玉米秸秆组(P0.05),且在39日龄时,黑麦草秆组十二指肠隐窝深度和肌层厚度均显著高于玉米秸秆组(P0.05),两处理组空肠和回肠隐窝深度与肌层厚度差异不显著(P0.05)。结果提示,与玉米秸秆日粮相比,黑麦草日粮饲喂吉林白鹅可获得较好的生产性能,其可通过调节小肠绒毛高度、隐窝深度和肌层厚度进而影响十二指肠的发育。     

南阳牛IGF-2基因PCR-RFLP分析

利用PCR-RFLP技术和限制性内切酶Bsr I对85头南阳牛类胰岛素样因子2(IGF-2)进行了分析。结果表明：南阳牛在该位点检测到两种等位基因A和B,其基因频率分别为0．5471和0．4529。A等位基因包括185bp和32bp两个片段,B等位基因包括118bp、67bp、32bp三个片段。南阳牛在该位点处于Hardy-Weinberg平衡状态。