白藜芦醇对山羊冷冻精液质量的影响

本实验旨在研究白藜芦醇对山羊冻精质量的改善效果。用假阴道法采集8只云上黑山羊精液,用添加不同浓度(0、0.1、1、10、20μmol/L)白藜芦醇的Optidyl稀释液稀释后进行细管分装,其中不添加白藜芦醇组为对照组。在5℃平衡4 h后,将细管于液氮蒸气中预冻,最后在液氮中保存1周。37℃水浴解冻后测定精子活力、顶体完整性、膜完整性和磷脂酰丝氨酸分布等指标。结果表明:与对照组相比,10μmol/L白藜芦醇冷冻组精子直线运动百分率和质膜完整性均提高(P<0.05);10μmol/L白藜芦醇抑制了冷冻解冻后精子ROS的产生(P<0.05);而20μmol/L白藜芦醇冷冻组精子解冻后直线运动百分率低于其他各处理组(P<0.05);白藜芦醇不能缓解冷冻解冻过程对精子总活力、顶体完整性和磷脂酰丝氨酸分布的不利影响。总之,冷冻稀释液中添加10μmol/L白藜芦醇可以改善山羊冻精质量,这可能与白藜芦醇的抗氧化特性有关;但过高浓度的白藜芦醇加重精子的冷冻损伤程度。白藜芦醇是否能提高山羊冻精的人工授精效果还有待进一步研究。     

新的绵羊精液冷冻保护液

众所周知,家畜精液在冷冻状态下一般能保存25年以上,但在养羊实践中冻精配种始终没有广泛应用,这是锦羊精液的特殊性和绵羊的生理特点决定的。绵羊精子冷冻处理后,在2万倍显微镜下观察,形态学发生显著变化,细胞浆和细胞膜脱离,形成空泡,继而崩解,发生这一现象的原因被认为是低渗保护液的不良作用。     

绵羊冷冻精液研究进展

随着肉羊产业化、工厂化的发展,冷冻精液人工授精技术亟待应用于生产中.绵羊精液冷冻保存技术虽然得到了快速发展,但目前仍处在试验研究或小范围的应用阶段.因此,绵羊精液冷冻技术还需要深入、系统的研究.文章从绵羊精液冷冻保存稀释液中的添加剂、冷冻速率、冷冻-解冻对绵羊冷冻精液品质的影响,精液输精对受胎率的影响等方面进行了综述,为精液冷冻保存研究提供一定参考.     

降低绵羊冷冻精液配种成本的试验

<正>绵羊冷冻精液配种技术的研究,早在50年代国外已经开始,我国也在70年代中期,由国家组织攻关,并于1982年取得了情期受配母羊产羔率56.4％的成果。但是,直到90年代的今天,无论在国内还是在国外,绵羊冷冻精液配种技术仍不能在生产中普及应用,其根本原因就是每产一只羔羊的成本太高。就以56.4％的产羔率计算,就需7元以上,甚至高达10元以上(按情期2次或3次输精,每次用2粒冻精,每粒1元计算,下同)。导致这项技术无法在生产中应用。为了解决这个难题,我们从1989年至1992年度,试图通过对冻精不同方法的处理,得到生产单位可以接受的最低配种成本,促使这项技术早日转化为生产力,为提高我国绵羊品质作出努力。     

降低绵羊冷冻精液配种成本的试验

<正>绵羊冷冻精液配种技术的研究,早在50年代国外已经开始,我国也在70年代中期,由国家组织攻关,并于1982年取得了情期受配母羊产羔率56.4％的成果。但是,直到90年代的今天,无论在国内还是在国外,绵羊冷冻精液配种技术仉不能在生产中普及应用,其根本原因就是每产一只羔羊的成本太高。就以56.4％的产羔率计算,就需7元以上,甚至高达10元以上(按情期2次或3次输精,每次用2粒冻精,每粒1元计算,下同),致使这项技术无法在生产中应用。为了解决这个难题,我们从1989年至1992年度,试图通过对冻精不同方法的处理,得到生产单位可以接受的最低配种成本,促使这项技术早日转化为生产力,为提高我国绵羊品质作出努力。     

稀释液中添加半胱氨酸对绵羊冷冻精液品质的影响

在绵羊冷冻精液稀释液中添加0mmol／L、2．5mmol／L、5．0mmol／L、7．5mmol／L4个不同梯度的半胱氨酸,通过测定解冻后的精子活率、畸形率、顶体完整率、质膜完整率以及各项酶（SOD、GSH、GSH-PX、CAT和MDA）的活性来确定最适添加量。结果表明,添加5．0mmol／L的半胱氨酸组的精子活率和顶体完整率均极显著高于对照组和其他组（尸〈0．01）,而畸形率显著低于对照组和其他试验组（P〈0．05）;各项酶指标中,5．0mmol／L半胱氨酸组SOD和GSH浓度与其余各组间差异不显著（P〉0．05）,MDA浓度极显著低于对照组和7．5mmol／L试验组（P〈0．01）,CAT和GSH-PX活性极显著或显著高于对照组和其他试验组（P〈0．01,P〈0．05）。说明冷冻稀释液中添加5．0mmol／L的半胱氨酸可有效保护精子免受过氧化物的损害。     

The Effects of Resveratrol on the Quality of Frozen Sheep Semen

The effects of resveratrol on the quality of frozen-thawed sheep semen were studied in this study.Semen was collected from six Yunnan semi-fine wool sheep using artificial vagina.The semen was diluted with the Optidyl extender supplemented with resveratrol with a concentration of 0,0.1,1,10,or 20 μmol/L,followed by loading into plastic straws and equilibration at a low temperature.Then,the straws were pre-frozen in liquid nitrogen vapor,followed by storage in liquid nitrogen for 30 days.After thawing for 30 seconds in a 37 ℃ water bath,the parameters including sperm motility,acrosome integrity,membrane integrity,distribution of phosphatidylserine (PS) and ROS were measured.The results showed that the post-thaw sperm total motility,progressive motility and the rate of sperm with curved tail were 76.14%±0.97%,43.56%±0.91% and 43.24%±1.68% in the 10 μmol/L resveratrol group,respectively,which were significantly higher than those in the other groups (P<0.05).However,when the concentration of resveratrol in the freezing extender was 20 μmol/L,the post-thaw total motility,progressive motility and the rate of sperm with curved tail were 21.78%±0.79%,25.23%±1.34% and 4.84%±0.68%,respectively,which were significantly lower than those in the other groups (P<0.05).The acrosome integrity of sperm frozen in the 10 μmol/L resveratrol group was best,which was 50.47%±0.91% and significantly higher than the other treatments (P<0.05).The results of PS distribution showed that the percentage of viable sperm in the 10 μmol/L resveratrol group was 46.43%±2.95%,and significantly higher than that in the 20 μmol/L group (31.14%±3.56%,P<0.05),but there was no significant difference with the other groups (P>0.05).In addition,the PS labeling rate of sperm in the 20 μmol/L resveratrol group (39.82%±3.38%) was significantly higher than those of the other groups (P<0.05).In terms of ROS production,this study demonstrated that the rate of viable sperm (ROS and PI were negative) in the 10 μmol/L resveratrol group (63.57%±0.71%) was significantly higher than that of the other groups (P<0.05),while the rate of viable sperm (32.45%±1.42%) in the 20 μmol/L resveratrol group was significantly lower than those of the other groups (P<0.05).In conclusion,the post-thaw quality of sheep semen could be improved after the addition of resveratrol to the freezing extenders,which might be related to the antioxidant properties of resveratrol.But,the cryoprotective effects of resveratrol dependents on its used doses,and the optimal concentration was 10 μmol/L based on this present study.However,excessively high concentration of resveratrol could aggravate cryodamage on sperm.In addition,the protective effects of resveratrol on sheep sperm still needs to be verified by in vitro fertilization and artificial insemination.     

绵羊精液冷冻保存研究进展

绵羊精液保存技术目前虽然已进入生产应用阶段,但冷冻精液人工授精受胎率低仍是限制绵羊冷冻精液进行生产推广的重要因素。目前,对于绵羊精液冷冻的研究主要集中在冷冻稀释液组分和冷冻程序等方面。文章针对国内外有关绵羊精液冷冻保存稀释液、冷冻程序、解冻方法和冷冻损伤等研究进展作一综述,旨在对今后精液冷冻保存研究提供一定的参考。     

Study on the Role of AMPK Activator in Cryopreservation of Sheep Semen

This study aimed to investigate the effects of AMPK activators metformin (Met) and acadesine (AICAR) on sheep semen cryopreservation. Firstly, Met and AICAR with different concentrations (0, 100, 200, 300, 400, 500 μmol·L^-1) were added into the frozen diluent. After freezing and thawing, the optimal concentration (400 μmol·L^-1 Met, 200 μmol·L^-1 AICAR) were selected based on sperm motility, motion performance and membrane integrity; Secondly, the collected semen was froze using different frozen diluents (control group:diluent; Met group:diluent + 400 μmol·L^-1 Met; AICAR group:diluent + 200 μmol·L^-1 AICAR). After thawing, the sperm AMPK protein expression, acrosomal enzyme activity, metabolic index, mitochondrial function and antioxidant enzyme activity were examined. The results showed that the addition of 400 μmol·L^-1 Met and 200 μmol·L^-1 AICAR could significantly improve sperm motility, motion performance and membrane integrity(P<0.05) after thawing. In 400 μmol·L^-1 Met group, the total sperm motility, acrosome integrity rate and plasma membrane integrity rate were 43.20%, 91% and 46%, respectively. Compared with the control group, the level of AMPK phosphorylation in the sperm of the Met and AICAR groups was significantly increased after thawing (P<0.05), the acrosome enzyme activity of sperm was significantly increased(P<0.05); the pyruvate level was significantly decreased (P<0.05), the lactate dehydrogenase activity, lactic acid content, and ATP content were significantly increased(P<0.05). Compared with the control group, the dilution of Met group and AICAR group was more conducive to maintain mitochondrial membrane potential (P<0.05), increase ATPase and antioxidant enzyme activity (P<0.05). The addition of appropriate concentrations of Met and AICAR could improve semen quality of cryopreservation in sheep.     

AMPK激活剂在绵羊精液冷冻保存中的作用研究

旨在研究AMPK激活剂二甲双胍（metformin,Met）和阿卡地新（acadesine,AICAR）对绵羊精液冷冻保存效果的影响。本研究首先在冷冻基础稀释液中分别添加不同浓度（0、100、200、300、400、500 μmol·L^-1）的Met和AICAR,冷冻解冻后根据精子活力、运动性能和结构完整性指标筛选出最佳的添加浓度（400 μmol·L^-1 Met、200 μmol·L^-1 AICAR）;然后分别使用不同的冷冻稀释液（对照组：稀释液;Met组：含400 μmol·L^-1 Met的稀释液;AICAR组：含200 μmol·L^-1 AICAR的稀释液）冷冻精液,解冻后检测精子中AMPK蛋白表达、顶体酶活性、代谢指标、线粒体功能以及抗氧化酶活性。结果表明,稀释液中添加400 μmol·L^-1 Met和200 μmol·L^-1AICAR均可显著提高解冻后精子活力、运动性能及精子结构完整性（P<0.05）,其中400 μmol·L^-1 Met组精子总活力达43.20%,顶体完整率为91%,质膜完整率为46%。与对照组相比,Met组和AICAR组解冻后精子中AMPK磷酸化水平显著升高（P<0.05）;顶体酶活性显著提高（P<0.05）;丙酮酸水平显著下降（P<0.05）,乳酸脱氢酶活性、乳酸以及ATP含量均显著升高（P<0.05）;与对照组相比,Met和AICAR组稀释液更有利于维持线粒体膜电位（P<0.05）,提高ATP酶（P<0.05）以及抗氧化酶的活性（P<0.05）。添加适当浓度的AMPK激活剂可以提高绵羊精液冷冻保存的效果。     

小尾寒羊精液保存技术研究

为了充分发挥种公羊的生产潜力,快速扩繁优良群体,本实验以取材方便的小尾寒羊为实验动物,对其精液采用室温、低温和细管法冷冻3种保存方法进行了研究。结果表明:在低温(4±0.5)℃条件下稀释保存小尾寒羊精子,显著优于室温(23±2)℃条件下的保存效果。其中采用II液低温保存绵羊精子的时间和活率(168 h,0.35)显著优于III液(72 h,0.30)I、V液(48 h,0.35)和I液(18 h,0.42)。而采用III液冷冻保存绵羊精液,其解冻后活率(0.532±0.004)极显著高于IV液(0.470±0.003)I、液(0.445±0.004)和II液(0.432±0.012)3种冷冻稀释液(P<0.01)。4种冷冻稀释液冷冻解冻后的精子,均能在室温下6 h内保持0.35以上的活率。     

稀释液中添加棉子糖对冻融后绵羊精液品质的影响

本试验目的是研究稀释液中添加不同浓度的棉子糖对冻融后绵羊精液品质的影响。选用10只健康乌珠穆沁种公羊,采集精液经检验合格在37 ℃下混匀,精液样品平均分成5份,用含有0、5、10、15、20 mmol/L的不同浓度棉子糖稀释液稀释。采用0.25 mL细管法冷冻,将冷冻后的细管精液置于37 ℃水浴锅中解冻15 s后进行相关指标评价及酶(SOD、GSH、MDA、GSH-Px和CAT)的测定。结果表明,当棉子糖的添加量为15 mmol/L时精子活率显著高于对照组(P＜0.05),畸形率显著低于对照组(P＜0.05),弯尾率显著高于对照组(P＜0.05),SOD活力显著提高(P＜0.05),MDA也显著低于对照组(P＜0.05)。     

番茄红素对秦川牛精液冷冻保存及鲜精品质影响

旨在探究番茄红素对秦川牛精液冷冻保存和新鲜精液品质的影响,为番茄红素作为新型精液稀释液添加剂和种公畜日粮添加剂提供依据。本研究采集3头年龄3~5岁健康状况良好秦川种公牛的新鲜精液混合,用0、1、2、3、4 μmol·L^-1浓度的番茄红素稀释液冷冻保存;利用计算机辅助分析仪、低渗肿胀检测法、花生凝集素荧光标记检测法、罗丹明荧光检测法等检测精子的运动性能、顶体完整率、质膜完整性、线粒体活性和抗氧化性能;在秦川种公牛日粮中添加15 mg·kg^-1 BW番茄红素,检测饲喂前后秦川种公牛的新鲜精液品质和血清抗氧化指标。结果表明,在秦川牛精液冷冻保存过程中添加番茄红素可以显著提高冷冻-解冻后精子的活力、顶体完整率、质膜完整性和线粒体活性以及抗氧化酶CAT和GSH-Px酶活性,显著降低精子中MDA含量,且番茄红素的最适添加浓度为2 μmol·L^-1(P<0.05);饲喂15 mg·kg^-1 BW番茄红素后,与饲喂之前相比,秦川种公牛的精子活力显著提高(P<0.05),精子畸形率显著降低(P<0.05),血清中抗氧化酶SOD、CAT、GSH-Px酶活性显著增加(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05)。综上所述,一定浓度的番茄红素对精子在冷冻过程中造成的精子损伤和秦川牛机体应激造成的繁殖性能降低具有良好的保护作用,这可能与番茄红素通过抗氧化作用减少精子在冷冻-解冻过程中的氧化损伤和提高动物机体的抗氧化能力有关。     

稀释液中添加N-乙酰半胱氨酸对猪精液冷冻保存效果的影响

本文以手握法采集的猪精液为试验材料,以解冻后精子的活率、顶体完整率、低渗膨胀率、运动学参数(VAP、LIN、ALH、BCF)和膜脂质过氧化反应为评定标准,旨在探讨N-乙酰半胱氨酸对猪精液冷冻保存效果的影响。结果表明,在冷冻稀释液中添加1mmol/L的N-乙酰半胱氨酸可以显著地提高解冻后精子的活率和顶体完整率,降低精子的低渗膨胀百分率。在运动学参数方面,只有VAP显著升高,而对其它运动学参数没有影响。在冷冻稀释液中添加N-乙酰半胱氨酸对膜脂质过氧化反应没有影响。     

线粒体靶向抗氧化剂Mitoquinone对湖羊冻精损伤的保护作用

旨在研究线粒体靶向抗氧化剂Mitoquinone（MitoQ）对湖羊冷冻精子的保护作用。本研究选择健康的成年种公羊精液,将其分成6等份。不含MitoQ者设为对照组（M0）,M1、M2、M3、M4和M5组分别为含50、100、150、200和400 nmol·L^-1MitoQ的添加组。精子经冷冻解冻后检测活率、活力、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性等精子质量指标,同时进行超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）等抗氧化指标检测。结果表明,当MitoQ添加的浓度为150 nmol·L^-1（M3组）时,其解冻后精子的活率、活力、质膜完整率、顶体完整率和线粒体活性最高,分别达55.00%、52.34%、48.32%、54.51%和51.28%,其线粒体活性显著高于其他组（P<0.05）。M3组解冻后精子的SOD和GSH-Px值分别为203.90 U·mL^-1和123.62 U·L^-1,两者均显著高于M0、M1、M4和M5组（P<0.05）;M3组解冻后精子的ROS和MDA值分别为298.34 U·mL^-1和4.99 nmol·L^-1,显著低于其他组（P<0.05）。当MitoQ的添加浓度提高至200（M4组）和400 nmol·L^-1（M5组）时,冻精质量开始下降,并表现为对精子的氧化损伤。在湖羊冷冻精液中,添加150 nmol·L^-1的MitoQ可显著降低精子氧化损伤,提高冻精品质,当MitoQ的添加浓度超过200 nmol·L^-1时对冷冻精子没有保护作用。