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转番木瓜环斑病毒复制酶基因番木瓜的多重定性检测 总被引:1,自引:0,他引:1
为监测和管理转基因番木瓜华农1号的商品化生产、销售,建立了相应的转基因定性检测方法.选用木瓜蛋白酶作为番木瓜的内源对照基因,建立对转基因番木瓜PRSV-Rep基因、外源CaMV35S启动子序列、NOS终止子序列和NPTⅡ基因的常规PCR检测体系.退火温度为40~60℃时,都分别扩增出了清晰的目的基因.单基因常规PCR检测转基因模板量的下限为5×10-7g.建立的三重PCR检测技术,检测了包括NPTⅡ、Rep和CaMV35S;NPTⅡ、Rep和Nos;NPTⅡ、Rep和Papain等3个组合.建立了NPTⅡ、ReP、CaMV35S和Nos4个基因的四重PCR检测技术. 相似文献
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番木瓜环斑病毒海南分离物全基因组结构分析 总被引:2,自引:0,他引:2
从感病的海南番木瓜叶片中提取总RNA,经RT-PCR和RACE方法分段扩增番木瓜环斑病毒(PRSV)全基因组序列.序列拼接结果显示,PRSV中国海南分离株(HaiNan-P)基因组除3'-末端polyA尾巴外,由10323个核苷酸组成,编码3343个氨基酸.同源性分析表明,HaiNan-P编码的氨基酸序列与GenBank中公布的11株PRSV同源性为89.8%~93.2%,略高于全长核苷酸的82.3%~89.1%.P1蛋白编码区同源性较低,仅为65.4%~80.1%,而HC-Pro、CI及CP同源性相对较高.运用MEGA 3.1软件、NJ法绘制系统进化树,分析结果显示,PRSV分离株类群分化与地理分布有一定的相关性. 相似文献
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番木瓜环斑病毒的提纯研究 总被引:2,自引:0,他引:2
详细报道了影响番木瓜环斑病毒(PRV)粗提纯效果的几个主要因素(繁殖寄主种类,有机澄清剂,分散剂,病毒浓缩前的去渣离心力,浓缩病毒的超离心力等)的最佳选择,繁殖寄主以角葫瓜最好。该研究综合上述最佳选择而拟定的一次差速离心和一次30%蔗糖硫酸连续密度梯度离心3h的简单程序较好地提供了PRV提纯的病毒有典型核蛋白紫外吸收曲线,A260/A280=1.68,提纯产量为2.56mg/100g西葫芦病叶,所 相似文献
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华南番木瓜病毒病及环斑病毒株系调查鉴定 总被引:9,自引:0,他引:9
根据田间调查、病毒粒子和内含体形态,血清反应,寄主范围和症状,昆虫介体,物理性质,潜育期等试验结果,认为华南4省区的番木瓜病毒病只有PRV一种,根据在西葫芦上的症状特点,将PRV初步区分为4个株系,即Ys,Vb,Sm和Lc。在313份标样中,它们单独所占比例分别为40.57%,10.22%,0.64%,4.47%Ys+Vb(复合侵染)占44.08%这表明Ys为优势株系,Vb次之,Lc和Sm发生少分 相似文献
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华南番木瓜病毒病及环斑病毒株系的调查鉴定 总被引:15,自引:0,他引:15
根据田间调查、病毒粒子和内含体形态、血清反应、寄主范围和症状、昆虫介体、物理性质、潜育期等试验结果、认为华南4省区的番木瓜病毒病只有PRV一种。根据在西葫芦上的症状特点,将PRV初步区分为4个株系,即Ys、Vb、Sm和Lc。在313份标样中,它们单独所占比例分别为40.57%,10.22%,0.64%,4.47%,Ys+Vb(复合侵染)占44.08%,这表明Ys为优势株系,Vb次之,Lc和Sm发生少分布不广。研究结果还表明,以前有人报道的PMaLV实则是本研究的Vb,而不是一个新病毒。 相似文献
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番木瓜环斑病毒株系的生物学和血清学研究 总被引:8,自引:0,他引:8
本文对华南地区番木瓜环斑病毒的Ys,Vb和Sm3个株系和夏威夷HA5-1弱株系的生物学和血清学等进行了进一步的研究。确证了PRV在华南地区至少有3个株系。在株系间亲缘关系方面,华财3个株系间的关系较密切,而与HA5-1株系的较疏远。在西葫芦植株体内增殖和运转,Sm株系病毒增殖和运转最快,在体内的浓度最高;Vb次之;Ys再次之;而HA5-1则更次之。 相似文献
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华南地区番木瓜环斑病毒和畸型花叶病毒调查鉴定研究 总被引:1,自引:0,他引:1
调查鉴定了广州、南宁、厦门和福州市番木瓜病毒病病原种类,发现都是由番木瓜环斑病毒引起的,未发现番木瓜畸型花叶病毒。 相似文献
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【目的】研究海南南瓜上番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)的全基因组特征及系统进化情况,为南瓜病毒病的综合防控提供依据。【方法】通过DAS-ELISA和RT-PCR等方法,检测采自海南澄迈桥头镇疑似感染PRSV的南瓜叶片中是否存在PRSV,采用分段扩增测序方法拼接获得PRSV-HnPumpkin基因组,利用NC-BI中的BLAST工具、DNAStar和MEGA 6.06软件进行序列分析及系统关系树构建。【结果】DAS-ELISA和RT-PCR检测结果表明,采自海南澄迈桥头镇疑似感染PRSV的南瓜叶片中存在PRSV(PRSV-HnPumpkin)。PRSV-HnPumpkin基因组全长为10 327nt,具有典型的PRSV基因组结构特征,含有1个开放阅读框,编码1个含有3 345个氨基酸的多聚蛋白。PRSV-HnPumpkin与已报道的其他PRSV分离物核苷酸和氨基酸之间的相似性分别为80.6%~95.1%和90.7%~97.9%。系统关系分析表明,PRSV-HnPumpkin与亚洲分离物处于同一组中,且与我国台湾分离物亲缘关系较近。【结论】获得了PRSV-HnPumpkin全序列,但其进化来源有待进一步探讨。 相似文献
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转基因番木瓜抗病性测定和纯合系的获得 总被引:4,自引:0,他引:4
分别对转番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)复制酶基因(Trp)的T3、T4代番木瓜(Carica papaya L.)品系在苗期进行攻毒试验和PCR分子生物学分析.结果表明,在苗期T3、T4代分子检测阳性株均高抗PRSV的Ys株系,证实Trp基因能够在后代中稳定遗传.除品系Trp-6-2外,其它所有T3、T4代自交植株仍有基因分离.Trp-6-2的自交株和其T4杂交后代,苗期攻毒试验均表现抗病,PCR检测复制酶基因均为阳性,所转基因没有发生分离,可以初步推定Trp-6-2为转基因的纯合系.大田病情调查结果表明,T3代在定植田间的前5个月内,转基因植株均高抗PRSV.但在定植5个月后发现一个转基因品系38株中有3株表现发病. 相似文献
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将携带茁-甘露聚糖酶基因manA 的转基因FVB 原代小鼠与“生型FVB 小鼠进行繁殖得到F1代,通过
PCR 和Southern blot 鉴定出F1代转基因小鼠。提取转基因小鼠腮腺、舌下腺、下颌下腺、心脏、肝脏等组织的总RNA,
通过RT-PCR 检测出manA 在转基因小鼠的腮腺和舌下腺组织特异性表达。进行定量PCR 验证出manA 基因在302
号家系小鼠的舌下腺中表达量最高,证明茁-甘露聚糖酶基因manA 在转基因小鼠的腮腺和舌下腺特异性表达成功。
对转基因小鼠唾液进行收集测定茁-甘露聚糖酶活性,在302 号家系中检测到酶活性较高。通过代谢试验测定饲料
中粗蛋白、粗纤维和粗脂肪的消化率,结果显示,与非转基因小鼠相比,302 号家系转基因小鼠对饲料中粗蛋白、粗纤
维的表观消化率无明显差异,而粗脂肪的消化率得到显著提高;304 号家系转基因小鼠对饲料中粗蛋白、粗脂肪、粗
纤维消化率方面均无明显差异。 相似文献
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马志杰 《中国农业大学学报》2019,24(7):79-86
为了解牦牛基因组和转录组研究现状,以"牦牛、基因组、转录组和高通量测序"为关键词,对2012—2018年的研究进展进行文献检索。研究发现:在牦牛基因组研究方面,已有研究对牦牛基因组进行了首次测序和重测序分析,构建了基因组"草图"和变异图谱,比较了家、野牦牛及与其他物种间全基因组水平上的异同,阐释了牦牛高原适应的遗传学机制,探究了牦牛的驯化和群体历史发展动态,初步揭示了牦牛与普通牛种间杂交渐渗状况,并对部分性状(如角、多肋性状)进行了全基因组关联分析和遗传机理揭示;在牦牛转录组研究方面,已有研究对牦牛睾丸、卵巢、心脏等多个组织器官及不同发育阶段的卵母细胞和胚胎细胞进行了转录组分析,发掘出一批潜在的与牦牛经济性状及一些生物学变化相关的差异表达基因。为推动牦牛分子育种进程,应进一步利用高通量测序技术获得牦牛大数据,继续完善牦牛全基因组结构。 相似文献
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