松材线虫rDNA的测序和PCR-SSCP分析

 本文为克服形态鉴定的不足,用分子生物学的方法鉴别松材线虫。线虫核糖体DNA(r DNA)的内部转录间隔区(ITS1)区(约308bp)的测序结果显示:松材线虫种内区别很小,不超过1bp;拟松材线虫种内区别较大,最大达7bp;这2种线虫的种间区别为32~39bp。根据以上测序结果,本文结合单条线虫DNA的提取技术,对14个松材线虫和拟松材线虫样本进行了单链构象多态性(PCR-SSCP)分析,结果表明PCR-SSCP分析技术可明确区分这2种线虫,该技术可为单条松材线虫的鉴定提供一套灵敏而可靠的方法。     

利用RAPD研究松材线虫和拟松材线虫亲缘关系

 用RAPD技术对18个松材线虫株系、8个拟松材线虫株系基因组DNA多态性进行研究。在事先优化的条件下,用15个随机引物进行PCR扩增,一共扩增出165条谱带,多态性为91.5%。通过聚类分析,结果表明:松材线虫和拟松材线虫种间和种内都表现出很大的差异性,但种间差异大于种内差异,因而松材线虫和拟松材线虫应为2个独立的种。     

松材线虫不同虫态发育通路表达与蛔甙成分差异

松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)是一种对我国林业危害极大的外来入侵种,具有繁殖力强,扩散范围广的特点.为探究松材线虫的发育调控机制,本研究通过转录组分析和实时荧光定量PCR技术,比较了不同虫态松材线虫发育差异表达基因及功能富集分析.利用LC/MS技术检测了松材线虫代谢物中的蛔甙成分及含量...     

区分松材线虫和拟松材线虫的生化及分子鉴别方法

本文从蛋白质，激素，脂类及核酸等不同的角度，概述了松材线虫和拟松材线虫的一些生化和分子鉴别方法及其优缺点。其中以DNA为基础的分子诊断技术（如对rDNA中ITS区的PCR-RFLP等）系目前较稳定可靠的鉴别方法；而以蛋白质为基础的单克隆抗体技术对于正确，快速地鉴别两种线虫也有极大的潜力。     

松材线虫病取样部位及检测技术初探

本文介绍了从松材线虫病疫木的不同高度进行取样和分离,通过传统病原形态学方法进行检测和计数的技术,探讨松材线虫在松树体内的数量分布情况,从而提高松材线虫的检出率和缩短检疫时间.     

分子生物学技术在松材线虫研究中的应用

根据松材线虫(Bursaphlenchus xylophilus)分子生物学的研究基础,以及基于不同的研究目的,对松材线虫不同DNA区域,包括基因组DNA、线粒体DNA、核糖体DNA和卫星DNA研究做了综述,并分析、比较一些常用的分子生物学技术在松材线虫研究中的适用性,以及在生物防治研究中的进展。     

松材线虫口岸检疫方法

通过2001～2007年在南京机场、新生圩等3口岸现场采集的695批次木材料样本进行检疫,4次发现了松材线虫;总结了切合口岸实际的松材线虫检疫方法;针对口岸上截获松材线虫时常出现仅有幼虫的问题,研究了用真菌进行单异活体培养和松材线虫罹病木保湿法培养松材线虫的两种快速培养方法;9种真菌选择培养松材线虫效果表明,灰葡萄孢是培养松材线虫的最有效真菌,盘多毛孢等用作培养松材线虫也有一定效果.     

rDNA-ITS-PCR技术在植物寄生线虫分子诊断中的应用

20世纪80年代以来,分子生物学技术在各个研究领域得到广泛应用,分子诊断也成为植物线虫学研究的新途径,内转录间隔区ITS是位于线虫的遗传物质特别是核糖体DNA(rDNA)上18S和28S基因之间的区域片段,一般而言它在生物种和亚种间变化较大,用PCR技术扩增ITS区,可通过酶切、克隆、测序等来揭示线虫种间或群体间的差异,从而进行植物病原线虫种的快速分子鉴定.目前,国外rDNA-ITS-PCR技术已在许多重要的植物线虫如剑线虫、胞囊线虫、根结线虫、松材线虫、拟松材线虫、马铃薯金线虫、马铃薯白线虫、茎线虫等的分子诊断中广泛应用.     

松材线虫检测鉴定技术研究进展

松材线虫是全球十分关注的检疫性线虫，对松林危害巨大。该文介绍了松材线虫的研究背景，以及形态学和分子生物学检测鉴定技术的最新进展，并对口岸松材线虫鉴定流程提出建议。未来，快速、便捷的线虫智能识别和等温扩增技术将取得广泛应用。     

松材线虫种群遗传多样性AFLP标记的建立及其应用

 松材线虫是极具危险性的外来入侵生物,其引起的松材线虫病,目前正在我国部分地区迅速扩展和蔓延,对我国林业生产造成了严重的经济损失。开展松材线虫的种群遗传学研究,是了解其成功入侵和爆发成灾内在机理的重要途径。但迄今为止,尚未找到很有效的分子标记方法来检测松材线虫入侵种群的遗传变异。本文采用AFLP分子标记技术,通过对各反应体系和反应条件的优化及对多态性引物组合的筛选,成功地建立了松材线虫的AFLP分子标记实验体系,并筛选出52对高效多态性的引物组合。应用4对引物对27个松材线虫种群样品进行遗传多样性检测,结果表明,AFLP是进行松材线虫种群遗传学研究的一种很灵敏和可靠的分子标记。此外,本文还对AFLP技术在松材线虫研究中的应用前景进行了讨论。     

Duplex PCR 快速检测松材线虫

利用duplex PCR技术对松材线虫(Bursaphelenchus xylophilus)与拟松材线虫(B. mucronatus)的rDNA部分核苷酸序列扩增.根据松材线虫与拟松材线虫的ITS1序列区别,设计出特异性引物,检测松材线虫的存在;在5.8S,28S保守序列区设计通用引物,检测伞滑刃线虫的存在.     

拟松材线虫尾部形态多样性研究

本文对14个拟松材线虫群体和2个松材线虫群体进行了研究,研究表明拟松材线虫群体尾尖突平均长度为3.28～5.82μm,尾形有6种,主要为亚洲型和欧洲型两种。拟松材线虫和松材线虫的交合伞复杂多样,共有12种类型,两者的交合伞没有明显差别,都由2种或2种以上形态构成。交合伞的多样性和不确定性表明,以此作为一个主要分类特征是不恰当的。     

日本松材线虫和南京松材线虫对雪松和马尾松的致病性研究

用来自日本的木质包装材料上截获的松材线虫和南京松材线虫进行对雪松Ｃｅｄｒｕｓｄｅｏｄａｒａ和马尾松Ｐｉｎｕｓｍａｓｏｎｉａｎａ的致病力试验，发现日本松材线虫能使４～５年生雪松苗２０％发病，１０％左右枯死，而南京松材线虫则没有致病力；１０年生雪松对两种松材线虫具有高度抗性。这两种松材线虫都能使马尾松中度感病和１０％左右的枯死     

感染松材线虫病松树滑刃目线虫调查

 本研究首次在全国范围内调查感染松材线虫病松树体内滑刃目线虫的种群组成,包括种类记述和数量组成分析。结果表明:在300份样品中共分离得到10种滑刃目线虫,隶属于3科、4属,其中有2个国内新记录种;它们是松材线虫、拟松材线虫、霍夫曼尼伞滑刃线虫、薄荷滑刃线虫、大核滑刃线虫、小麦长尾线虫(国内新记录种)、爱尔密那长尾线虫(国内新记录种)、李氏长尾线虫、吴氏长尾线虫和外滑刃科线虫一种;描述并且图示比较它们的形态特征。种群数量组成分析表明:松材线虫在感病松树体内占据绝对的优势,削弱了松树线虫群落组成的多样性,即线虫群落结构趋向单一化。研究还表明,利用长尾属线虫的捕食习性来控制中国松材线虫病的流行与危害值得进一步探索与研究。     

木质包装中松材线虫的实时荧光PCR检测

松材线虫是进境木质包装中的重要检疫对象之一。本研究以进境木质包装中截获的12种伞滑刃属线虫,包括4种不同来源的松材线虫、3种不同来源的拟松材线虫、豆伞滑刃线虫、大尖尾伞滑刃线虫、阿苏里伞滑刃线虫、伯氏伞滑刃线虫及拟小刺伞滑刃线虫为材料,进行实时荧光PCR检测。结果显示,仅松材线虫可观察到明显的荧光强度变化,而其他线虫的荧光强度没有变化。通过研磨样品的方法,提取单条松材线虫的DNA,进行实时荧光PCR试验,检测成功率为100%,且不论是雄虫、雌虫或幼虫均能检测出来。该研究对于我国口岸进境木质包装中松材线虫的检测具有一定的实际意义。     

松材线虫组DNA条形码筛选

本文基于Gen Bank中登录的14种松材线虫组线虫的28S、18S和ITS部分基因DNA序列,利用遗传距离法及分子生物学方法评价其各自作为松材线虫组DNA条形码序列的适用性。结果显示,28S(拟松材线虫不分亚种)、28S(拟松材线虫分亚种)、18S和ITS的基因序列种内成对遗传距离平均值分别为0.0071、0.0030、0.0007、0.0043,种间成对遗传距离平均值分别为0.0476、0.0454、0.0052、0.1556,其中28S、18S基因序列种内及种间距离存在一定程度的重叠,ITS具有一定程度的Barcoding gap。3个基因序列构建的NJ进化树显示,28S、ITS构建的系统进化树具有较高的节点支持率,可以有效将14个松材线虫组线虫分离成独立分支,而且28S可以有效鉴别出拟松材线虫的2个亚种;基于18S基因构建的进化树不能对吉拉尼伞滑刃线虫、日本冷杉伞滑刃线虫、拟松材线虫进行有效区分。因此,28S、ITS区具有一定的遗传距离间隔以及相对较高的物种识别率,可以作为松材线虫组线虫候选条形码基因。     

拟松材线虫携带的可培养微生物种群研究

以云南松濒临枯死木为对象,利用贝尔曼漏斗法获得植物寄生性线虫,借助形态学和PCR-RELF相结合的方法鉴定出拟松材线虫,在此基础上,对其所携带的可培养微生物进行了分离纯化和鉴定,证实拟松材线虫共携带26种细菌和4种真菌,所携带可培养微生物随着拟松材线虫人工培养代数的增加,其多样性下降,人工培养3次以后,微生物的种类从30种降到9种。未纯化线虫致病性显著高于继代培养线虫,继代培养次数越多,致病性下降越快,说明体表可培养微生物参与了拟松材线虫的致病过程。     

松材线虫的远距离传播及其检疫问题

松材线虫Bursaphelenchus xylophilus从一个寄主个体(一株树、一段圆木等)向另一寄主个体的转移依赖昆虫介体。至今发现有24种昆虫可携带松材线虫,已证实其中有6种天牛可通过下述方式传播松材线虫萎蔫病:从病死树中羽化出的天牛感染松材线虫,在补充营养取食和产卵时     

ganA在路德维希肠杆菌杀松材线虫中的功能解析

生防微生物已被用于防控松材线虫病,但其杀线防病的分子机制尚不明确。本研究发现,经路德维希肠杆菌AA4处理后,松材线虫的校正死亡率达85%以上,菌株AA4能够显著减轻松树幼苗上松材线虫病的发生。为了探究AA4抑杀松材线虫的分子机制,本研究采用DNA同源重组技术,构建了菌株AA4 β-半乳糖苷酶基因ganA的敲除突变体,并对ganA在AA4抑杀线虫中的功能进行了解析。研究结果表明,敲除ganA后,突变体菌株抑杀松材线虫与防治松材线虫病的效果均显著降低,菌株的运动性与其在线虫上的定殖能力亦显著减弱。此外,与野生型菌株相比,gan A敲除突变体菌株限制线虫运动的能力显著减弱。因此,gan A可能通过调控AA4定殖松材线虫与限制线虫运动的能力,在AA4抑杀松材线虫中发挥重要功能。     

进境木包装松材线虫检疫应把握的关键技术

进境木包装松材线虫检疫 ,所采用的技术一般都是沿用植物线虫学的常规技术 ,作为检疫性的一项专门技术还缺乏系统的研究。我们在检疫工作的实践中 ,经过多年的探索和不断创新 ,形成了一套具有口岸特色的、快捷高效的松材线虫检疫鉴定技术。本文就有关的几个关键技术问题进行初步的总结。1　选择合适的取样对象极为重要理论上讲 ,受松材线虫侵染后的病木 ,松树停止分泌树脂、水分疏导严重受阻 ,从而使罹病松木较干燥。因此 ,通常被松材线虫侵染的病木较健木轻。而在检疫工作的实践中我们发现 ,截获到松材线虫的包装木含水量往往较大 ,较干燥…