志贺菌分子生物学检测方法研究现状

志贺氏菌又称痢疾杆菌,是细菌性痢疾的病原菌。多年来,志贺氏菌引起的鸡腹泻对养鸡经济效益的影响很大,已引起高度重视。着重介绍了志贺氏菌分子生物学检测方法的研究现状,为临床诊断治疗志贺氏菌引起的腹泻病提供可靠依据。     

志贺氏菌病发病机制的研究进展

志贺氏菌也称痢疾杆菌,属于革兰氏阴性细胞内致病菌,主要侵害结肠,引发炎症并形成溃疡,可引起频繁的粘液性血性腹泻,儿童和幼龄动物有较高的感染率和死亡率.目前志贺氏菌病的临床治疗很困难,对志贺氏菌病发病机制的研究可为临床治疗提供理论依据,本文从志贺氏菌的胞内入侵机制、分子机制和免疫机制等方面概述志贺氏菌病发病机制的研究进展.     

志贺氏菌RAPD鉴定方法的建立

[目的]为志贺氏菌食源性疾病的流行病学溯源和疫情控制提供理论依据。[方法]利用5个随机引物对4种不同来源的志贺氏菌进行RAPD扩增,并对得到的扩增图谱进行聚类分析。[结果]5个随机引物中,引物S3、S5表现出较好的多态性。在引物S5的扩增图谱中,志贺氏菌属中各菌均有1条600 bp左右和1条1 000 bp左右的共同谱带,而利用该引物扩增其他属细菌,扩增谱带很少或没有。这说明引物S5对志贺氏菌属细菌是特异性的。根据引物5的聚类分析结果,可将8株志贺氏菌分成4个类群。除宋内氏志贺氏菌外,其他3种6株菌间的相似系数均为1.00,与传统的血清型分型结果完全一致。[结论]采用引物S5的RAPD反应可用于志贺氏菌的快速检测。     

应用聚合酶链反应快速检测试验猴沙门氏菌和志贺氏菌

根据Genebank提供的沙门氏菌invA基因序列和志贺氏菌ipaH基因序列设计引物,分别建立了检测2种致病菌的PCR方法。应用于检测临床试验猴粪便样品85份,检出沙门氏菌阳性3份,志贺氏菌阳性9份,阳性检出率分别为3.5%和10.6%。试验证明建立的沙门氏菌和志贺氏菌PCR检测方法特异性强、敏感性高,适用于试验猴临床粪便样品的快速检测。     

一例志贺氏菌测量审核分析

[目的]通过样品的分离鉴定,提升检测能力,确保检测结果的真实性和可靠性,增加检测经验。[方法]根据样品指导书和标准GB 4789.5—2012,分离编号分别为19-A766和19-A835的2个测量审核样品,并进行生化鉴定和血清学鉴定,同时使用全自动微生物鉴定仪(VETEK 2 COMPACT)进行确认。[结果] 19-A835 25 mL样品中未检出志贺氏菌,19-A766 25 mL样品中检出志贺氏菌;测量审核结果为满意结果。[结论]此次测量审核结果丰富了检测人员的检测经验,提高了检测能力,为进一步完善食品检测工作打下坚实基础。     

志贺氏菌致婴儿败血症死亡的菌株分离与鉴定

志贺氏菌痢疾我省近来有暴发流行的趋势，１９９６年在我省顺德市与惠州市就连续发生二起暴发流行［１，２］；志贺氏菌败血症极为罕见特别是婴儿，主要是因为志贺氏菌只局限于侵犯肠粘膜上皮细胞层和粘膜上层极少穿透肠粘膜进入下层。最近作者发现有婴儿由此菌所致的痢疾...     

人源志贺氏菌对雏鸡的人工感染试验

为了弄清人源志贺氏菌是否可以传播给鸡,从而为志贺氏菌在人-禽传播中的可能性提供科学依据,用不同剂量的鸡源鲍氏志贺氏菌、人源鲍氏志贺氏菌和人源福氏志贺氏菌通过腹腔注射人工感染雏鸡。结果发现,各试验组雏鸡均有不同程度的病变发生,甚至出现死亡病例,且从雏鸡体内分别回收到原接种的3株细菌。这说明了鸡源志贺氏菌的可能来源及有发生人鸡互传的可能性。     

一株志贺氏菌分离株对肉鸡致病性试验

从感染志贺氏菌的肉鸡肠道黏膜中分离出一株强致病性的志贺氏菌分离株,以健康肉鸡为目标进行致病性研究。使用SS琼脂培养基从感病肉鸡中分离出31株志贺氏菌分离株,按照同一剂量(107 CFU)以灌喂的方式对30日龄肉鸡进行感染,筛选出强致病性分离株。使用强致病性分离株通过不同剂量灌喂30日龄肉鸡,对细菌致病性进行研究。结果:分离得到一株强致病性志贺氏菌分离株BDS8,在以5×10⁸ CFU的量对30日龄肉鸡进行灌喂后,从2h开始出现腹泻直至24h并未恢复,在10-15d内出现死亡,解剖后器官出现严重炎症病变及肠道明显出血。结论:志贺氏菌分离株有较好的致病性,成功感染了健康肉鸡,为后续使用不同方法治疗感染志贺氏菌的肉鸡建立了基础。     

软腐欧文氏菌致病性的研究进展

由Ecc,Ech,Eca三种主要病原菌引起的软腐病是世界农业生产上危害很严重的病害之一。目前,对软腐欧文氏菌与植物的互作在世界范围内的大量研究,已经为深入揭示其致病的分子机理提供了有效帮助,并将为软腐病的有效防治提供新的思路和手段。文章将就软腐欧文氏菌的重要致病因子、致病过程中病原菌与植物的基因表达等作综述。     

志贺菌多重耐药性研究进展

 一般认为志贺菌产生耐药性与抗菌药的结构和作用机制有关，并通过质粒携带的耐药基因扩散耐药性，同类结构药物或作用机制相似的药物具有部分或全部交叉耐药性。然而，近几年随着分子生物学手段的不断应用，人们开始从更多层面来认识志贺菌的耐药性。细菌对不同结构类别或不同作用机制的抗菌药物都能产生耐药性，即多重耐药（multi drug resistance）。本文就志贺菌耐药机制的研究进展进行了综述。     

食品中单核细胞增生李斯特氏菌的检测方法研究进展

单核细胞增生李斯特氏菌是一种重要的食源性致病菌,广泛分布于自然界。针对目前单核细胞增生李斯特氏菌的检测现状,总结了4种现行有效的常用检测方法,并对各种检测方法的优缺点进行了分析比较。实时荧光定量PCR检测技术,可精确定量、反应迅速、信号重复性好、灵敏度和特异性高,不需要凝胶电泳过程,避免了扩增产物对环境造成的污染问题,将是未来分析检测发展的一个主要趋势。     

青枯雷尔氏菌致病机制及其相关基因的研究进展

阐述青枯雷尔氏菌致病基因以及它们之间的相互调节。由于青枯雷尔氏菌的复杂性,进而发展了许多青枯雷尔氏菌分子鉴定技术,并且对青枯雷尔氏菌的鉴定逐渐走向快速、便捷和灵敏高的趋势。青枯雷尔氏菌基因组约5.8Mb,具有高(G+C)含量和约5 120个可能的编码基因;它是由3.7Mb的染色体和2.1Mb的大质粒所组成,主要的致病因子有Ⅲ型hrp分泌系统产物、胞外多糖、细胞壁降解酶(包括果胶质酶以及纤维素酶等),其涉及的基因主要包括hrp基因簇、avr基因、毒性基因;青枯雷尔氏菌通过Ⅲ型分泌系统(T3SS)、II型分泌系统(T2SS)等分泌系统将多种毒性因子输送到胞外使寄主植物致病。同时,T3SS和T2SS之间也是相互影响的。上述致病因子的协调作用是由一个复杂的网络调节系统控制的,并以PhcA调节基因的启动和转录为核心,自动而精密地调节有关致病基因的表达及关闭,从而控制细菌的生长状态。     

食品中单核细胞增生李斯特氏菌快速检测方法的建立

建立了食品中单核细胞增生李斯特氏菌快速、敏感、特异的PCR快速检测方法。选取hlyA基因作为靶序列设计1对引物,在单核细胞增生李斯特氏菌中能扩增出356 bp的预期片段,大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌的扩增结果均为阴性,表现出极好的单增李斯特菌种特异性。纯培养的检测极限为46个细菌。用该方法对36份食品样品进行检测,检测结果与分离鉴定方法完全相符,表明该方法可适用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌的快速检测。     

单核细胞增生性李斯特氏菌快速检测技术研究进展

单核细胞增生性李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,IM)是主要食源性致病菌之一,可以引起严重的李斯特菌病.日益受到人们的重视,各种快速检测技术也迅速发展.综述了在单增李斯特菌检测时基于常规培养、分子生物学、免疫学和传感器的快速检测技术,并进行了探讨.     

志贺菌ipaH基因PCR检测方法的建立及应用

为了掌握青海省4种食源性动物体内志贺菌的分布情况,针对志贺菌属侵袭性质粒抗原H基因(invasive plasmid,ipaH)设计1对特异性引物,建立志贺菌的PCR检测方法,优化反应体系,检测该方法的敏感性和特异性,并将该方法应用于临床样本检测。结果表明,建立的PCR方法能特异性扩增志贺菌ipaH基因,而沙门氏菌、大肠杆菌、葡萄球菌、枯草杆菌、变形杆菌等均未扩增出条带;最低检测限值为1.8 pg/μL。在临床样本检测中,100株疑似菌株的阳性率为62.00%,其中牦牛源75.00%(3/4),鸡源35.29%(12/34),羊源44.44%(8/18),猪源88.64%(39/44);新鲜鸡粪和羊粪的阳性率分别为91.67%(11/12)和90.91%(10/11)。这说明试验所建立的PCR方法具有良好的敏感性和特异性,可应用于志贺菌的实验室诊断;4种动物体内均不同程度带菌,在临床诊断和治疗时不可忽视该菌的致病作用。     

志贺氏菌噬菌体ΦDS8对患病肉鸡的治疗及其肠道菌群的影响

志贺氏菌是一种常见的肠道致病菌,其引起的细菌病是危害公共卫生的人畜共患病之一。随着抗生素的滥用,志贺氏菌耐药性的问题难以控制,急需新的方法来解决,采用噬菌体杀灭耐药性细菌已日益受到重视。本研究建立肉鸡感染志贺氏菌模型,分别采用感染前2 h灌喂噬菌体液预防和感染2 h后灌喂噬菌体液两种方法对肉鸡进行治疗。灌喂志贺氏菌2 h后的肉鸡均出现腹泻状况,粪便中志贺氏菌含量最高达到1×10⁷ CFU·g^-1,优势菌群含量大幅下降,有害菌群占比上升。噬菌体治疗后,肉鸡粪便中噬菌体含量上升,志贺氏菌含量下降,粪便性状及肠道菌群恢复正常,且肉鸡存活率100%。没有噬菌体治疗的肉鸡存活率60%,解剖观察发现器官病变明显。噬菌体ΦDS8在治疗志贺氏菌株感染方面有良好的效果,其作为抗生素替代产品有较好的应用价值和前景。     

鸭疫里默氏菌多价疫苗研究进展及其效力检测方法

鸭疫里默氏菌病对鸭类养殖业造成严重危害,总结鸭疫里默氏菌多价疫苗的研究进展和效力检测方法,阐述多价疫苗的构建、免疫效果评价等方面的研究进展,旨在为鸭疫里默氏菌多价疫苗的研究与应用提供参考。     

3种单增李斯特氏菌快速检测方法的比较

【目的】确定适用于不同条件下快速检测单增李斯特氏菌的方法。【方法】以单增李斯特氏菌标准菌株CMCC54004和市售盐水鸭、凉拌菜为研究对象,按照国家食品安全标准(GB 4789.30-2010)对检测样品进行选择性增菌培养,选择阴性样品进行人工布菌,比较单增李斯特氏菌蛋白条检测法、CPA恒温扩增法以及实时荧光PCR方法的检测效果,并以传统平板分离法进行验证。【结果】蛋白条检测法操作简单但灵敏度低,最低检测限为106cfu/mL;实时荧光PCR方法灵敏度高,最低检测限为101 cfu/mL,但操作繁琐,对操作技术及实验室条件要求较高;CPA恒温扩增方法灵敏度相对较高,最低检测限为105 cfu/mL,操作相对简单。【结论】实时荧光PCR方法适合灵敏度要求高、且具备良好实验条件时使用;CPA恒温扩增法适于对灵敏度要求不高、实验室条件简单的基层实验室使用。     

环介导等温扩增技术快速检测志贺氏菌的研究

[目的]利用环介导等温扩增技术快速检测志贺氏菌。[方法]以志贺氏菌侵袭性质粒抗原H基因（ipaH）作为靶序列,设计引物,优化Mg2＋浓度、Bst酶浓度等反应条件,建立LAMP反应体系。[结果]确定了环介导等温扩增技术检测志贺氏菌的适宜反应条件;该法检测志贺氏菌的灵敏度为62 cfu/ml。[结论]该研究初步建立了一种利用LAMP快速检测志贺氏菌的方法,为食品中志贺氏菌快速检测构建了一个技术平台。