禽流感快速诊断方法研究进展

禽流感最显著的生物学特征之一就是亚型众多。而且不同亚型或血清型之间无交叉反应性或反应性低,这使得禽流感的诊断监测工作较为困难,对AIV的快速、准确、特异的诊断非常必要本文就禽流感快速诊断方法的研究进展进行了概述,以期为禽流感的早期诊断和及时防治提供一定指导。     

导致猪腹泻的原因与应对措施

猪腹泻问题在猪场频发,导致猪只成活率低、饲料转化率低、增重慢等,猪腹泻病传播速度快、单独感染或交叉混合感染严重,诊断与防治困难,文章分析了导致猪腹泻的原因,概述了防治措施。     

猪传染性胸膜肺炎的诊断与控制

猪传染性胸膜肺炎是胸膜肺炎防线杆菌而引起的一种猪的呼吸道传染疾病,这种病的血清型比较多,并且每个血清型之间又缺乏很好的交叉免疫的保护能力,所以患上这种病之后,想要进行有效的诊治比较困难。文章从四个方面综述猪传染性胸膜肺炎疾病的诊断和控制。     

锦鲤疱疹病毒单交叉引物等温扩增检测方法的建立

本文根据锦鲤疱疹病毒(Koi herpes virus,KHV)保守的DNA聚合酶(Sph)基因,设计一组单交叉扩增引物,以构建的Sph基因重组质粒作为标准DNA模板,采用单交叉引物等温扩增技术(Single cross priming amplification,SCPA)进行扩增及优化反应体系,并结合核酸试纸条技术(Nucleic acid test strip detection method),建立了快速可视化检测锦鲤疱疹病毒的单交叉引物等温扩增检测方法(KHV-SCPA)。KHV-SCPA法可在63℃下60min内实现循环扩增,扩增产物经凝胶电泳呈现梯形条带,可特异性地检测出KHV,灵敏度较之常规PCR方法提高约1000倍。结合核酸试纸条检测技术,在3~5min内可对反应产物进行可视化检测。KHV-SCPA检测方法不依赖昂贵的仪器设备与专业技术人员,可应用于锦鲤疱疹病毒的现场快速检测中,为锦鲤疱疹病毒病的准确快速诊断和有效防控提供了技术支撑。     

凡纳滨对虾红体病病原菌间接ELISA快速检测方法的研究

以凡纳滨对虾红体病病原菌副溶血弧菌为抗原,免疫兔获得高免血清,建立一种快速检测凡纳滨对虾红体病病原菌副溶血弧菌的ELISA技术。采用棋盘滴定法确定抗原和抗血清的最适工作浓度分别为106CFU·mL-1和1∶2000;病原菌检测灵敏度为每孔104CFU;抗血清与其它细菌标准菌株的交叉反应结果均呈阴性;阻断实验中的阻断率达75.88%;交叉反应和阻断实验结果表明该方法具有较高的特异性。将该方法标准化后检测了30份人工感染后的凡纳滨对虾和健康凡纳滨对虾,阳性检测率分别为93.3%和13.3%,表明该技术不仅能够检测已发病的凡纳滨对虾,而且能够检测带菌的凡纳滨对虾,这对于水产养殖业中疾病的早期诊断有着重要意义。     

猪传染性胸膜肺炎的综合防治技术

近几年来孟连县发生多起以肺炎、胸膜炎,肺部病变明显,胸腔中有粉红色血样液体,鼻腔、喉头、气管、支气管中充满泡沫状血样粘性渗出物为特征的传染病,抗生素使用存在着诊断不确切和细菌的耐药性问题,进而防治成本增大。虽然对该病及其病原菌已做了广泛而深入的研究,在疫苗及诊断方法上已取得一定的成果,因该病菌血清型众多,各血清型之间很少有交叉免疫保护作用,故疫苗的应用也受到了一定的限制,目前为止,还没有很有效的措施控制该病。就该病病原学、流行病学、临床症状、病理变化、鉴别诊断、防治措施等几方面进行分析,希望能对该病的防治起到一定的作用。     

猪附红细胞体病研究进展

附红细胞体病是附红细胞体感染人和动物而引起的一种人畜共患传染病,主要由吸血昆虫传播,该病主要特征是贫血,也可能和其他疾病混合感染而表现不同交叉症状。本病广泛分布于世界各国,并呈扩大趋势,对养殖业和人类健康造成严重威胁。本文根据国内外文献从病原学、流行病学、临床症状、病理变化、诊断和防治、体外培养等生物特性方面,综述该病研究现状,旨在降低发病率,提高生产效益。     

水产动物6种主要病原菌与抗血清的免疫交叉反应

采用ELISA、试管凝集、Western-blot等方法,分析了鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、哈维氏弧菌(V. harveyi)、溶藻胶弧菌(V. alginolyticus)、副溶血弧菌(V. paraheamolyticus)、迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)和荧光假单胞菌(Psedomonas fluorescens)等水产养殖中主要病原细菌与抗血清之间的免疫交叉反应.结果表明,弧菌属细菌之间的交叉反应程度比较大,而与其他两属的细菌之间存在的交叉反应程度小,或不存在交叉反应;Western-blot分析结果显示,哈维氏弧菌、溶藻胶弧菌和副溶血弧菌抗血清分别与其他3种弧菌在分子量为135.6 kD和121.5 kD;95.6 kD,48.4 kD,39.2 kD和34.9 kD;55.1 kD的蛋白带处存在交叉反应,而这些分子量的蛋白带与其他两属的抗血清均不发生反应.     

斑点叉尾肠败血症(ESC)PCR诊断方法的建立

由爱德华氏细菌引起的肠败血症(ESC,又称爱德华氏病)是影响斑点叉尾养殖最大的疾病。为快速和准确的诊断该疾病,本研究以NCBI公布的爱德华氏细菌eip基因(GeneBank登录号为AF037441)为模板序列,设计种特异性诊断引物,成功建立了用于斑点叉尾肠败血症病原菌的PCR检测方法。研究结果表明,该方法能够直接从发病斑点叉尾脑、肝、脾和肾组织中检测到爱德华氏菌,检测的最低量为21个细菌;同时,该诊断方法与I型荧光假单胞菌、点状产气单胞菌点状亚种、鳗弧菌、温和气单胞菌、肠型点状产气单胞菌、柱状黄杆菌、嗜水气单胞菌、河弧菌、豚鼠气单胞菌及海豚链球菌等常见水产病原菌无交叉反应。临床样品检测证明,本研究所建立的PCR检测方法可以用于斑点叉尾肠败血症的快速诊断。     

一种简便、快速检测鸡毒支原体的PCR方法

鸡毒支原体(MG)是造成鸡慢性呼吸道疾病的主要病原菌。通常采用血清学方法诊断该病,由于存在非特异性交叉反应,这给临床诊断带来困难。为解决MG快速诊断问题,该研究根据已发表的鸡毒支原体种特异性序列FMG-2合成一对引物(MG1,MG2),用PCR方法检测MG。结果表明,该PCR方法对MG能特异性扩增732bp目的片断,而对照菌(大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等)却不能扩增出目的片段。PCR产物经测序,其序列与Genbank序列同源性为98.86%。用PCR方法检测60份感染样本,其阳性检出率为80%,而用传统的分离培养方法检出率仅为50%。     

应用酶联免疫吸附法检测暴发病病原—嗜水气单胞菌的研究

作者制备了暴发病病原——嗜水气单胞菌TPS—30株的免、鸡抗血清,在此基础上建立了双抗体夹心酶联免疫吸附法。该法可测出10ng抗原,对点状气单胞菌、温和气单胞菌等菌株不发生交叉反应,且能有效地测出人工感染白鲫中的病原体,整个过程可在1.5h内完成,是一种有前途的暴发病快速诊断方法。     

养殖鱼源嗜水气单胞菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制

为研究体外诱导敏感嗜水气单胞菌耐药后,其敏感性变化与基因突变、外排作用的关系,实验选取对氟喹诺酮类药物敏感的养殖鱼源嗜水气单胞菌临床分离菌株为研究对象,分别在含亚抑菌浓度恩诺沙星(EN)和诺氟沙星(NF)的培养基上逐步诱导培养,以获得高耐药菌株;对诱导菌株gry A和par C基因进行扩增和测序分析;测定诱导菌对诱导药物和16种非诱导药物的最小抑菌浓度(MIC)及添加外排泵抑制剂N-甲基吡咯烷酮(NMP)后的MIC值变化;并对诱导菌交叉耐药情况进行比较分析。结果发现,诱导后菌株对EN和NF的MIC分别提高了409.6和4096倍,对非诱导氟喹诺酮类药物和其他类药物的MIC也有较大变化;药物诱导后各菌株gyr A基因和par C基因编码的氨基酸QRDRs区发生了典型的点突变:Gyr A发生Ser83→Ile变化,Par C发生Ser87→Ile/Arg变化;添加NMP后,所有诱导菌株对两种药物的MIC值均有不同程度的下降;诱导后菌株交叉耐药情况与菌株密切相关,其中3和8号诱导菌株对16种非诱导药物均无交叉耐药反应,而EN诱导菌株对氨基糖苷类和利福霉素类药物基本未产生交叉耐药反应,NF诱导菌株对除庆大霉素以外的氨基糖苷类和利福霉素类药物基本未产生交叉耐药反应,所有诱导后菌株均对四环素类和氯霉素类药物产生较严重的交叉耐药。研究表明,嗜水气单胞菌对氟喹诺酮类耐药存在靶基因位点突变及主动外排作用等多种耐药机制;且应慎重考虑在防治耐药菌株引发病害时,交叉耐药情况对选择治疗药物的影响。     

挪威和俄罗斯商谈巴伦支海的捕鱼权问题

挪威和俄罗斯就巴伦支海的捕鱼权问题进行了近十年的谈判。争论的最大焦点是两国专属经济区中的交叉海域。由于双方在过去均作出了妥协,在交叉海域作业的渔船不受对方法律的约束。可是,许多外国渔船利用这个空子在巴     

现代分子生物学技术在水产动物疾病诊断上的应用

水产动物的疾病的诊断方法多种多样，传统的方法有直接培养法、组织切片观察法及超薄切片的电子显微镜观察，免疫学方法包括了血清学反应、单克隆抗体检测、多克隆抗体检测等，以及其衍生方法（如酶联免疫吸附实验）。这些方法对疾病诊断暴露了不少弊端，或是费时费力，或是准确性不甚满意。免疫学方法虽比传统方法在许多方面有了较大进步，也存在不少问题。血清学反应特异性不甚满意，容易出现交叉反应。抗体在体内的形成往往需要一段时间，抗体检测很难用于早期诊断，而且抗体一旦产生，即使病愈后还可能长时间存在，阳性结果还不能做出确…     

应用葡萄球菌A蛋白协同凝集试验快速检测3株鱼类致病菌

本试验用富含葡萄球菌Ａ蛋白的国际标准菌株ｃｏｗａｎＩ分别标记３株引起民鱼类致病的荧光假单胞菌、鳗弧菌和鲁克氏耶尔森菌的特异高兔血清制成ＳＰＡ诊断液，建立了检测估摸力的协仙凝集试验。将待检病料增减１６－１８ｈ用该法检测３ｍｉｎ可判定结果，比常规玻片敏感２５－５０倍；经交叉试验和重复性试验，表明特异性强，敏感性高可重复性好，一具有简便快速经济等特点。适用于基层鱼场，可用于淡水鱼类病原菌的快速鉴定，疫情     

欧洲鳗黏膜免疫球蛋白单克隆抗体的制备及其特性分析

应用杂交瘤单克隆抗体技术制备了8个分泌抗欧洲鳗（Anguilla anguilla）黏膜免疫球蛋白的单克隆抗体细胞株,并对这些单克隆抗体的特性进行了分析。结果显示,8株单抗中IgM有2株,IgG,和IgG2。各有3株;所有单抗均与欧洲鳗黏膜免疫球蛋白呈ELISA反应阳性,腹水抗体滴度为在10^4～10^6之间。进一步实验证实,这些单抗与供试的10种水产动物常见病原菌均无交叉反应;其中3株单抗与欧洲鳗血清IgM有不同程度的交叉反应;4株单抗与黏膜免疫球蛋白有交叉反应,其中2株单抗交叉反应较弱。以上结果提示,欧洲鳗黏膜免疫球蛋白和血清IgM之间既有各自独特的抗原决定簇,又有共同抗原位点,证实欧洲鳗黏膜抗体在抗原性方面有别于血清IgM。成功制备的这8株单抗可用于鳗黏膜免疫球蛋白的检测及其结构和功能分析,为欧洲鳗黏膜免疫的进一步研究提供工具。[中国水产科学,2008,15（3）：511-515]     

杀鲑气单胞菌的实时定量PCR检测方法的建立和应用

选取杀鲑气单胞菌A层A蛋白(VapA)保守序列,利用Primer Express2.0软件设计引物和探针.以ATCC标准株10倍系列稀释,通过血球计数板计数后进行实时定量PCR,制作标准曲线.通过SDS软件获得细菌数量(X)与Ct值的关系为:Ct＝-3.1574lgX 43.6841(相关系数R2=0.992).实时定量PCR的检测限为6个细菌.建立的方法对杀鲑气单胞菌典型株和非典型株具有较好的特异性,与其他细菌没有交叉反应.杀鲑气单胞菌实时定量PCR方法的建立,对于快速口岸检疫、临床诊断和疫病监测具有重要的应用价值.     

三疣梭子蟹多克隆抗体与4种经济蟹类血细胞交叉反应的研究

采用激光共聚焦扫描显微镜技术、免疫印迹技术和流式细胞术3种方法对鼠抗三疣梭子蟹血细胞多克隆抗体与黄道蟹、日本蟳、中华绒螯蟹、勘察加帝王蟹血细胞的免疫交叉反应进行分析。激光共聚焦扫描显微镜结果表明,该抗体与黄道蟹、日本蟳、勘察加帝王蟹、中华绒螯蟹血细胞均发生了免疫交叉反应,且发生反应的抗原决定簇均位于细胞膜上;流式细胞术测定该抗体与黄道蟹颗粒血细胞和透明血细胞交叉反应阳性率最高,分别为99.45%、98%,与中华绒螯蟹颗粒血细胞和透明血细胞交叉反应阳性率最低,阳性率分别为81.34%、78.56%;免疫印迹结果显示该抗体与日本蟳血细胞结合的蛋白分子量是80、38.5ku;与勘察加帝王蟹血细胞结合的蛋白分子量是80、93ku;与中华绒螯蟹血细胞结合的蛋白分子量是82、41、30ku;与黄道蟹血细胞结合的蛋白分子量是70、43ku。     

禽流感实验室诊断监测方法的应用及分析报告与预警

<正>禽流感(Avian influenza,AI)是由A型流感引起的禽类疫病。可感染包括鸡、火鸡、鹅等家禽以及野鸟、海鸟等。因为其引起的疾病形式多样,可分为无致病性、低致病性和高致病性(HPAI)的。HPAI一旦爆发,将对当地的养禽业造成毁灭性的打击,农业部将此病列为一类动物传染病。禽流感病毒有众多亚型,其中按血凝素(HA)分有15种,神经氨酸酶(NA)有9种,各亚型之间抗原抗体存在交叉反应,要做好该项疫病的诊断     

青岛地区常见鱼类过敏原的鉴定及其交叉反应研究

选择青岛地区喜食的阿拉斯加狭鳕、蓝点马鲛、大黄鱼、真鲷、鲑、大菱鲆、鲤 等7种鱼为研究对象,利用鱼类过敏患者血清,通过SDS-PAGE及免疫印迹方法对每种鱼的过敏原蛋白进行鉴定。利用兔抗鲅鱼小清蛋白多克隆抗体,通过间接ELISA和抑制性ELISA等对7种鱼的小清蛋白之间的交叉反应进行探讨。结果表明,青岛地区居民鱼类过敏原主要为48~57、33~41、28 及17 ku的蛋白,和传统公认的小清蛋白为主要过敏原的共识不同。而针对小清蛋白的交叉反应研究也表明,不同鱼类蛋白之间存在强烈的交叉反应。因此,虽然鱼类过敏原可能不同,但如果对以上7种鱼中的一种鱼过敏,最好不要食用其他任何一种鱼。