花生体细胞胚胎诱导和植株再生研究

以花生成熟种胚为外植体,在ＭＳ附加不同激素（２０ｍｇ／Ｌ２,４－Ｄ或５ｍｇ／Ｌ Ｐｉｃｌｏｒａｍ）的培养基上黑暗培养,胚性愈伤组织发生率和产胚量无明显差异,在ＭＳ＋５ｍｇ／Ｌ Ｐｉｃｌｏｒａｍ培养基上,胚性愈伤组织发生率和产胚量和品种类型有关,珍珠豆型花生品种胚性愈伤组织发生率和产胚量高于普通型花生品种。体胚在ＭＳ＋１０ｍｇ／Ｌ ＢＡ培养基上苗再生达３６．３％－７７．８％,再生小苗在ＭＳ＋０．３ｍ     

快中子辐照对花生种子胚小叶植株再生的影响

以花生品种花育22号的成熟饱满种子为试材,采用14Mev不同剂量的快中子(0、9.7、14和18Gy) 进行辐照处理。处理后的种子经表面杀菌后,取胚小叶作为外植体先后在添加2,4-D 和BAP 的培养基上进行培养,诱导体胚形成及其萌发和植株再生。结果表明,体胚诱导率和植株再生率因辐照剂量的不同表现出明显的差异,随辐照剂量的增加,外植体形成体胚的频率及再生植株的频率明显降低。推断快中子辐照花育22号的适宜剂量为9.7~14.0Gy。再生小苗经无菌嫁接驯化后移栽田间,得到了成熟种子。           

花生幼叶芽诱导和植株再生研究

从萌发9－10d的花生幼嫩叶片上切取中段作外植体，接种MS＋BA 3mg/L NAA 0.8mg/L AgNO3 2mg/L诱芽培养基，12－14d后产生丛生芽点，芽诱导率达78．9％，平均每外植体产生9个丛生芽。4周后转至MS BA 3mg/L AgNO3 2mg/L诱导芽伸长，诱导生根后获得再生植株。     

花生去子叶幼胚的丛生芽诱导和植株再生

授粉后２５－３０天的花生幼胚，去子叶后，在ＭＳ２（ＭＳ＋ＢＡ１．０ｍｇ／Ｌ＋ＣＨ３００ｍｇ／Ｌ＋ＰＶＰＰ０．３％＋椰计５０ｍｌ／Ｌ＋蔗糖４％＋琼脂０．８％）培养基中，置３００ｌｕｘ弱光和２０℃±１℃条件下，培养２１－２８天，能有效地产生丛生芽；在ＭＳ２中诱导培养后的去子叶幼胚的生长点切去，在改良无激素培养基（ＭＳ１）中培养１４天，转入ＭＳ３（ＭＳ＋ＢＡ６．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．４ｍｌ／Ｌ＋Ｄ－生物素０．１ｍｇ／Ｌ＋ＣＨ３００ｍｇ／Ｌ＋酵母浸出物２００ｍｇ／Ｌ＋椰计５０ｍ／Ｌ＋ＰＶＰＰ０．３％＋蔗糖２．５％＋琼脂０．８％）培养基，置２５℃±１℃，３５００ｌｕｘ光照条件下培养２１－２８天，８０％的外植体分化出丛生芽，继而长成无根带叶小苗．．平均每外植体产生８．１个丛生芽，最多可达４０个．诱根后小苗移植田间８０％植株成活并开花结实。品种（系）间差异不显著。     

园艺植物体胚发生及植株再生技术研究

通过无患子科荔枝,龙眼,天南星科白鹤芋,火鹤芋,花叶芋,芭蕉科香蕉,葫芦科西瓜甜瓜甜兰科卡特兰,大花蕙兰,石竹科满天星,康乃馨等５０多个品种品系体细胞胚胎发生的诱导技术研究,探索出园艺植物获得体细胞发生的两种。途径。第一途径由外植体先诱导出愈伤组织然后产生胚状体,此途径的技术关键在于前期必需在附加高浓度２,４－Ｄ的培养基上作激发培养,如荔枝,天星,康乃馨,火鹤芋,香芋等可由引途径产生体胚。第二种途     

西洋参的胚状体发生与植株再生

用通过低温阶段的西洋参(panaxquinquefolium L.)种胚,先在MS+24—D(0.5—2.0mg/l)+CA(500—2000mg/l)的培养基上诱导出愈伤组织,继代培养2代,在胚性愈伤组织上发生胚状体,然后接在y2MS+6—BA0.5mg/L培养基上成长为绿色小苗,经过壮苗培养6个月,主根直径0.4厘米,盆栽成活。     

花生胚小叶的离体再生及筛选压力选择

以花生胚小叶为外植体,优化离体再生条件,通过对再生苗进行筛选,为外源基因的遗传转化提供实验依据。研究表明,不同基因型胚小叶的再生能力差异显著,在供试基因型中中花8号不定芽诱导率和成苗率最高,且外植体状态最好。中花8号胚小叶再生的最佳诱导培养基为MSB + 6-BA（4.5mg/L）+NAA（1mg/L）+AgNO3（2mg/L）,最佳诱导培养时间为21d。对中花8号再生苗进行筛选浓度实验,草丁膦（PPT）为20mg/L时,可筛选出抗性苗;300mg/L的卡那霉素（Km）可用于较小幼苗筛选,而对较大幼苗则需将Km的浓度提高至400mg/L以上。     

铁兰体细胞胚的诱导及植株再生

以铁兰无菌苗为外植体,研究不同激素配比对铁兰胚性愈伤组织诱导及体细胞胚形成的影响,并对体细胞胚的发生过程进行形态学观察.结果表明:2,4-D对铁兰胚性愈伤组织的诱导具有重要作用,诱导铁兰胚性愈伤组织的最适2,4-D浓度为2.0 mg/L;胚性愈伤组织在含ABA的培养基上可分化形成体细胞胚.形态及解剖学观察表明,愈伤组织既可以产生于外植体的外层细胞,又可产生于外植体的深层细胞.体细胞胚的形态发生经历了与合子胚形态发生相似的阶段,即经过球形胚、子叶形胚等.胚经过萌发、芽的伸长和生根后形成再生植株.     

从大豆幼胚诱导器官发生再生植株

采用MSO培养基诱导了大豆(G.max L.)幼胚的器官(不定芽)发生,最高诱导频率达90％。再生植株移入土壤巳经获得种子。诱导器官发生的适宜幼胚长度为5～6mm。提高培养基中微量元素的浓度能大幅度地提高诱导频率,但并非所有微量元素都需要高浓度。被试的所有基因型表现了基本相似的反应。再生培养物可保持一年以上而不丧失植株再生能力。     

花生未成熟胚培养与植株再生

采用MS、B_6、White、Norstog四种培养基及六种植物激素,配制成多种培养基,对授粉后20—25天的花生幼胚进行离体培养和再生研究。结果显示:MS、B_6为幼胚离体培养和发育较好的培养基。MS BA1.0mg/L(单位下同) NAA0.05 GA_20.02 CH600 PVP0.2％ 蔗糖5％能有效促进幼胚发育成熟。小苗通过MS BA2.0 PP_(333)0.2 CH600的壮苗培养后在1/2MS大量元素 MS微量元素及有机物 NAA2.0 BA0.1 CH400 蔗糖2％中培养,诱根率高达96.6％。小苗移栽14天内保持饱和湿度其成活率为80％。再生植株在自然条件下能开花、结实。     

花生胚轴丛生芽的诱导和植株再生

以花生胚轴为外植体,接种于ＭＳ２（ＭＳ＋ ６－ ＢＡ１０ｍ ｇ／Ｌ＋ ＮＡＡ０８ｍ ｇ／Ｌ＋ 蔗糖３％ ＋ 琼脂０７％ ）培养基上,２５℃±１℃和３５００Ｌｕｘ 光照条件下培养,约２０ 天,８３％ 的外植体分化出丛生芽。平均每个外植体产生６４ 个丛生芽,最多可达３０ 个,由此得到的再生苗生长正常、健壮,生根后植株移栽易成活。本文就外植体日龄、激素配比及外植体接种极性等对丛生芽发生产生的影响进行了讨论。     

从大豆幼胚诱导胚胎发生再生植株

采用MS基本培养基附加高浓度的生长素(2,4—D或NAA)成功地诱导了大豆(G.max)未成熟胚的体细胞胚胎发生。2,4—D的诱导效果明显优于NAA。细胞分裂素对体细胞胚胎发生有抑制作用。适宜的维生素B1浓度为0.4ppm。体细胞胚胎发生频率随蔗糖浓度(1.5—9％)的提高而降低。体细胞胚胎经历诱导、成熟和发芽三个阶段成功地发育成完整植株。再生植株移入土壤已经获得种子。     

大豆体细胞胚再生植株的研究

以球形期大豆体细胞胚为材料,对其进行继代增殖、萌发及再生植株的研究.结果表明,大豆体细胞胚每隔15-20天分割成3mm左右的小块在MS培养基附加10-20 mg/L 2,4-D的固体培养基以及弱光条件下,可以继续增殖,继代增殖能力强,扩繁系数为3n(n为继代培养次数);大豆体细胞胚性组织先在含有活性碳的培养基上培养,能提高其萌发率以及正常胚率,1个月以后转移到无活性碳的培养基,又能提高其再生速度以及再生率.     

提高玉米胚性细胞系诱导再生植株的研究

本实验以玉米G35×31、Tf幼胚培养的胚性细胞系为材料,用8114、MS和MN6、MB四种培养基诱导胚性细胞系再生绿苗,结果以MB培养基诱导率最高,为93.3%;在以不同激素配比的培养基进行愈伤组织的生根培养,KT1.0mg/L(单位下同)+6BA0.5+NAA0.5+IBA 2的激素组合诱导生根效果最好,而其他三种激素组合未出现分化生根现象。     

花生幼叶组织培养及有效植株再生

以花生品种白沙果成熟种胚发芽7 d的幼叶为外植体,对花生体细胞胚胎发生和植株再生进行了研究,并建立了其高效再生体系.将幼叶切成1 mm×1 mm,接种在添加1～3 mg/L 2,4-D和1～5mg/L BAP的MS培养基上进行培养,获得了高频率的胚胎发生丛(89%～96%).将带有胚胎发生丛的愈伤组织分别转移至添加10 mg/LBAP或添加3 mg/L BAP和1 mg/L ABA的MS培养基上进行培养,57%～100%的胚胎发生丛产生体细胞胚(简称体胚);当将其进一步转移至添加3 mg/L BAP和1mg/L ABA或添加BAP(4,10 mg/L)的MS培养基上进行培养时,体胚萌发,再生植株.植株再生率最高可达96%.     

多胚水稻单细胞培养再生植株

1980年我们筛选获得了4个具有遗传特性的多胚水稻品系,并通过细胞胚胎学研究首次发现并证实上述品系中存在着低频率的不定胚。为了对多胚水稻和无触合生殖现象进行单细胞水平的分析研究以及进行单细胞诱导、引变和筛选工作,对多胚水稻单细胞培养的探索是很有必要的。本研究因供试材     

龙眼胚性悬浮细胞原生质体培养及其体胚发生再生植株

以“红核子”、“东壁”、“十二月龙眼”等龙眼品种的胚性悬浮细胞为起始材料分离原生质体,采用液体浅层培养、包埋悬浮培养等方式,进行原生质体培养与植株再生研究。研究结果表明,海藻酸钙包埋悬浮振荡培养(50r/min)是龙眼悬浮细胞原生质体培养的适宜培养方式,在含有多种生长调节剂的改良MS培养基(MP6)上,再生小克隆的形成频率可高达5%;采用龙眼胚性愈伤组织体胚诱导、成熟和萌发的优化方案,原生质体再生小克隆分化子叶形胚状体的频率达100%,萌发植株的频率一般大于45%。