低盐胁迫下条斑紫菜不同品系体细胞与壳孢子的耐受性差异

以条斑紫菜野生品系WT为对照,对条斑紫菜选育品系NY－001的体细胞与壳孢子阶段的耐低盐特性进行测定,结果表明：在正常盐度（2．6％）下培养14 d,WT、NY－001品系条斑紫菜的体细胞苗与壳孢子萌发体的存活率与分裂率均无显著差异;在1．5％下培养14 d,WT品系条斑紫菜体细胞的存活率、分裂率分别为62．8％、98．8％,而NY－001品系的存活率、分裂率则分别为77．4％、100．0％,WT品系的壳孢子存活率、分裂率分别为63．9％、96．8％,而NY－001品系的存活率、分裂率则分别为88．0％、100．0％;在0．8％盐度条件下培养14 d的WT条斑紫菜品系体细胞存活率分别为38．5％、88．6％,而NY－001品系的存活率、分裂率则分别为52．3％、99．6％,WT品系的壳孢子存活率、分裂率分别为44.5％、71．4％,而NY－001品系的存活率、分裂率则分别为76．2％、96．7％;在0．3％盐度条件下培养14 d的WT品系条斑紫菜的体细胞存活率、分裂率分别为30．2％、74．2％,而NY－001品系的存活率、分裂率则为33．3％、98．7％,WT品系的壳孢子存活率、分裂率分别为5．2％、28．8％,而NY－001品系的存活率、分裂率则分别为29．6％、85．2％。由结果分析可知：与野生品系相比,NY－001品系条斑紫菜具有较好的耐低盐潜力,可以在此基础上进一步选育,以选拔出适合低盐海区养殖的条斑紫菜新品种,为养殖生产服务。     

条斑紫菜壳孢子的抗生素敏感性研究

以往研究紫菜细胞对抗生素的敏感性时,常以叶状体的酶解单离体细胞为材料,但由于来自同一个叶状体的体细胞处于不同的分化阶段,离体培养时,体细胞的成活、再生和发育途径均不相同,从而无法准确地判断抗生素对紫菜离体细胞的生长和发育影响。以成活、萌发和发育途径等几乎一致的条斑紫菜壳孢子为研究材料,较系统地观察了3种抗生素对壳孢子的成活、生长和发育的影响。结果表明：卡那霉素能促进条斑紫菜壳孢子的萌发、生长和发育。加卡那霉素培养7 d,26%的壳孢子萌发体,其细胞数多于20个,比对照组多2倍,培养11 d和18 d,萌发体的平均长度分别为对照组的1.6倍和2.1倍。氨苄青霉素能显著地抑制条斑紫菜的壳孢子萌发、生长和发育,造成细胞的分裂速度减缓、叶状体发育异常。加氨苄青霉素培养7 d,80%的壳孢子萌发体的细胞数少于15个,培养11 d和18 d,各试验组的壳孢子萌发体的平均长度均显著低于对照组,并且随着氨苄青霉素浓度的提高,萌发体的平均长度下降。氯霉素对条斑紫菜的壳孢子具有强烈的致死作用。加氯霉素培养7 d,浓度大于100 μg/mL的各试验组的壳孢子萌发体全部死亡;培养11 d,低浓度组（50 μg/mL）的萌发体也全部死亡,90%以上的萌发体的细胞数小于5个。由此得出,氯霉素是开展条斑紫菜基因工程的理想抗性选择压力。     

温度对条斑紫菜不同品系壳孢子放散、萌发和附着的影响

研究了条斑紫菜RD-1和WT品系的贝壳丝状体在不同温度下的壳孢子放散量以及壳孢子萌发体对高温的忍耐力,结果表明:在18、23、24、25℃下,平均每个贝壳连续放散15 d的壳孢子总量,RD-1品系分别为8.4×106、4.5 ×106、6.1×105、0个,WT品系分别为7.0 ×106、2.7×106、3.9 ×105、0个,2个品系的壳孢子放散量均随着温度的升高而下降,在25℃下均不放散孢子.通过研究在同一温度下放散的壳孢子在不同温度下的萌发情况后发现,18℃下放散的壳孢子被分别置于4种温度条件(18℃、22℃、23℃、24℃)下培养15 d,RD-1品系的壳孢子成活率分别为90.9％、85.6％、59.7％、49.8％,分裂率均为100％;而WT品系的壳孢子成活率只分别为81.8％、32.0％、21.9％、15.1％,分裂率分别为99.7％、96.7％、80.3％、78.3％.在上述3组高温(22℃、23℃、24℃)下培养的WT品系的壳孢子萌发体均出现烂苗现象.以上结果表明:RD-1品系的贝壳丝状体对23℃高温有一定的耐受能力,它的壳孢子放散量基本优于WT品系,在24℃下也能大量放散壳孢子并且所放散的壳孢子能够正常生长发育,它的壳孢子和壳孢子萌发体对高温的忍耐力均比野生型品系好.所以,对这个品系进行继续选育,很有可能得到耐高温的品种,应用条斑紫菜的养殖生产.     

条斑紫菜自由丝状体的培养与观察

70年代后期,当我们研究坛紫菜(Porphyra haitunensis)自由丝状体直接采苗应用于生产取得成功的时候,黄海水产研究所王素平从事的条斑紫菜自由丝状体的培养与采苗,虽然在丝状体的生长发育方面做了不少工作,但由于丝状体生长发育成熟度差,孢子放散不集中,因而未能进行直接采苗试验。近几年仍有不少研究人员想解决条斑紫菜自由丝状体采苗问题,利用固相化技术把自由丝状体后期形成的膨大细胞.附着于网帘上培养,以期达到秋季放散孢子养成紫菜的目的。然而至今未见报告,也无应用于生产上的信息.可见条斑紫菜自由丝状体的直接采苗仍是有待解决的难题。     

移植量、光密度及温度对条斑紫菜 不同品系壳孢子放散量的影响

以条斑紫菜优良品系深丰1号、深丰2号及野生品系WT为试验对象,在条斑紫菜自由丝状体移植育苗过程中设置不同的自由丝状体移植量和光温条件,研究不同生态条件下条斑紫菜不同品系丝状体生长和壳孢子放散量情况。结果表明,贝壳丝状体营养生长阶段,10～50μmol/(m~2·s)范围内提高光密度或15～25℃范围内提高温度都能加快贝壳丝状体的营养生长,初始藻落密度提高,丝状体能更快布满贝壳表面,获得更高的藻落密度;条斑紫菜贝壳丝状体培养适宜的移植量、光密度、培养温度分别为100 mg/m~2、10μmol/(m~2·s)、20℃。     

光照、水温和密度对厚壳贻贝稚贝群聚性的影响

为研究光照、温度和个体密度对厚壳贻贝Mytilus coroscus稚贝群聚性产生的影响,分别在光照强度为0、10、20、60、200μmol/(m~2·s),海水温度为13、18、23℃,厚壳贻贝稚贝密度为5、10、20、30、50个/培养皿(相当于0.28、1.64、3.27、4.91、8.18个/mL)条件下,进行3因素交互作用试验。结果表明:厚壳贻贝稚贝密度与群聚率呈极显著正相关(r=0.736),密度越高稚贝的群聚率越高,群聚性越强;同样,光照对厚壳贻贝稚贝的群聚性具有极显著影响(P0.0001),但光照强度与群聚率呈极显著负相关(r=-0.675),光照越强稚贝的群聚率越低,群聚性越差;海水温度对稚贝的群聚性无显著性影响(P0.05);光照、密度和水温三者的交互作用极显著影响厚壳贻贝稚贝的群聚性(P0.0001)。本研究结果可为今后开展厚壳贻贝稚贝附着机制的研究及水产养殖稚贝中间培育提供理论基础和技术支撑。     

裙带菜室内人工育苗的研究

报道了裙带菜Ｕｎｄａｒｉａ ｐｉｎｎａｔｉｆｉｄａ９Ｈａｒｖｅｙ０Ｓｕｒｉｎｇａｒ室内人工育苗的研究结果。大连海区栽培裙带菜孢子放散温度范围为１４－２１℃,放散高峰１６．０－１８．５℃,放散量在６０００万／ｃｍ＾２以上。使用维尼纶绳采苗孢子水的最适浓度为６０个／视野,附着时间为２．０ｈ以上。配子体生长的适温范围为１８－２２℃,２３℃以上为配子体渡夏阶段,光照以３００ｌｘ为宜;     

条斑紫菜自由丝状体无性繁殖系快速培养及其养殖

本文报导了条斑紫菜(Porphyra yezoensis Ueda)自由丝状体快速培养并用固相化方法采苗下海养殖的试验，结果表明自由丝状体可以在较短的时间内快速生长发育成熟，用固相化方法采苗可以克服自由丝状体室内集中放散壳孢子困难的缺点，每网采200万枝壳孢子囊枝切段，其出苗情况，紫菜生长均达到生产要求，本试验为自由丝状体快速采苗应用于生产上提供了一条新途径。     

条斑紫菜自由丝状体无性繁殖系快速培养及其养殖

本文报导了条斑紫菜(Porphyra yezoensis Ueda)自由丝状体快速培养并用固相化方法采苗下海养殖的试验，结果表明自由丝状体可以在较短的时间内快速生长发育成熟，用固相化方法采苗可以克服自由丝状体室内集中放散壳孢子困难的缺点，每网采200万枝壳孢子囊枝切段，其出苗情况，紫菜生长均达到生产要求，本试验为自由丝状体快速采苗应用于生产上提供了一条新途径。     

条斑紫菜中无机砷含量及海区环境痕量砷的分析

通过分析我国条斑紫菜主产区紫菜产品中无机砷、栽培海区海水、沉积物中总砷含量在整个生产周期中的变化情况,初步探讨栽培海区环境中砷含量与条斑紫菜中砷含量的关系。于2012-2013年紫菜栽培季节,按实际生产的采收批次,分别采收条斑紫菜原藻、加工品,对样品中的无机砷含量进行测定与分析,并对栽培海区的海水及表层沉积物中总砷进行定量检测与分析。结果显示,江苏省条斑紫菜原藻样品中无机砷含量为0.22~0.70mg/kg,加工品中无机砷含量为0.12~0.32 mg/kg,原藻及加工品中的无机砷含量随生产阶段的推后呈下降趋势,完全符合国家食品安全限量标准;栽培海区海水总砷含量为0.000 83~0.004 91mg/L,在整个生产周期都低于国家养殖用水水质标准对砷的限量要求,栽培海区海水中的总砷与当地紫菜产品中的无机砷之间总体呈正相关关系;表层沉积物中总砷含量范围为15.435~58.900μg/g,与条斑紫菜中无机砷含量没有明显的相关性。     

高盐下条斑紫菜光合特性和S-腺苷甲硫氨酸合成酶基因表达的变化

为了研究条斑紫菜耐盐机理,对条斑紫菜叶状体进行了高盐胁迫处理,继而采用氧电极法测量了光合放氧速率和呼吸耗氧速率的变化,采用实时荧光定量PCR技术测量了S-腺苷甲硫氨酸合成酶(命名为PySAMS)基因的表达变化。结果显示藻体的光合与呼吸作用均受到高盐度海水的显著影响,随着盐度的增加,光合放氧率逐渐降低,呼吸耗氧率也逐渐降低。高盐度海水对PySAMS基因表达量也产生了显著影响,40和50盐度的海水诱导了PySAMS表达,但60至80盐度的海水却不同程度地抑制了PySAMS表达。据此推测,在面对较高盐度胁迫时条斑紫菜叶状体将逐步降低体内新陈代谢以度过不良环境。     

坛紫菜幼苗无性繁殖的再研究

坛紫菜（Porphyrahaitanensis）幼苗能否形成单孢子是我国多年来悬而未决的理论问题。本文对这一问题进行了反复、多方面的研究，特别是对于幼苗释放细胞的条件，细胞的发育分化趋势及超微结构作了重点研究，并将研究结果与真正放散单孢子的条斑紫菜（P．yezoensis）作了比较，发现在一定条件下坛紫菜幼苗能释放一种以前曾被认为是单孢子的细胞，它们的光学及超微结构、释放规律和发育趋势与坛紫菜酶解的营养细胞相同，而与条斑紫菜单孢子有明显差异。试验结果证明坛紫菜幼苗阶段不能产生单孢子。     

坛紫菜幼苗无性繁殖的再研究

坛紫菜(porphyra hairanensis)幼苗能否形成单孢子是我国多年来悬而未决的理论问题。本文对这一问题进行了反复、多方面的研究，特别是对于幼苗释放细胞的条件，细胞的发育分化趋势及超微结构作了重点研究，并将研究结果与真正放散单孢子的条斑紫菜(P.yezoensis)作了比较，发现在一定条件下坛紫菜幼苗能释放一种以前曾被认为是单孢子的细胞，它们的光学及超微结构、释放规律和发育趋势与坛紫菜酶解的营养细胞相同，而与条斑紫菜单孢子有明显差异。试验结果证明坛紫菜幼苗阶段不能产生单孢子。     

坛紫菜幼苗无性繁殖的再研究

坛紫菜(porphyra hairanensis)幼苗能否形成单孢子是我国多年来悬而未决的理论问题。本文对这一问题进行了反复、多方面的研究，特别是对于幼苗释放细胞的条件，细胞的发育分化趋势及超微结构作了重点研究，并将研究结果与真正放散单孢子的条斑紫菜(P.yezoensis)作了比较，发现在一定条件下坛紫菜幼苗能释放一种以前曾被认为是单孢子的细胞，它们的光学及超微结构、释放规律和发育趋势与坛紫菜酶解的营养细胞相同，而与条斑紫菜单孢子有明显差异。试验结果证明坛紫菜幼苗阶段不能产生单孢子。     

三十烷醇对绳江蓠（Gracilaria Chorda Holm）的生长与孢子萌发的影响

用三十烷醇的水溶液对绳江蓠藻体和孢子进行浸泡处理，结果表明，适宜浓度的三十烷醇对绳江蓠藻体的生长和孢子的萌发生长均有显著的促进作用。但对孢子的附着有不良影响，使也子的附着率明显降低。对藻体生长的适宜浓度为１－４ｐｐｍ，对孢子萌发生长的适宜浓度１－８ｐｐｍ。在使用中以１ｐｐｍ为宜。     

紫菜不同品系贝壳丝状体叶绿素荧光特性比较

随着紫菜遗传学研究的发展,紫菜育种手段趋于多元化,除了传统的选育方法外,诱变育种和种间杂交育种已成为紫菜育种的重要途径.以条斑紫菜绿色突变株(YM)、杂交重组品系Y-H1(F2代,显示条斑紫菜性状)、杂交重组品系Y-H2(F2代,显示条斑紫菜性状)、条斑紫菜栽培品系(YW)和坛紫菜栽培品系(HW)贝壳丝状体为材料,通过调制荧光技术对各丝状体叶绿素荧光进行测定.结果表明:所有供试紫菜贝壳丝状体最大量子效率(Fv/Fm)没有明显差别.HW和Y-H2贝壳丝状体实际量子效率(△F/Fm')略高于其他供试紫菜品系,YW与Y-H1品系在不同光照条件下的△F/Fm’相似,而YM明显低于其他株系;快速光曲线测定结果表明,随着光照强度的上升,所有紫菜贝壳丝状体相对电子传递速率(rETR)先上升,后逐步降低.低光照处理各品系在光照强度低于200μmol/(m2·s)时rETR没有明显差异,但随着光照强度的上升,Y-H2和HW的rETR高于其他品系;高光照处理下,Y-H2和HW藻体rETR高于其他品系,且YM藻体rETR值明显低于其他供试材料.通过最大量子效率、实际量子效率、相对电子传递速率等参数的测定,能够反映不同紫菜株系叶绿素荧光特征,进而为量化描述不同紫菜选育株系或栽培品系光合特征提供基础参考.     

浒苔规模化人工育苗技术研究

研究了浒苔(Ulva prolifera)人工育苗技术全过程。首先研究了室内育苗浒苔藻体孢子放散的最适温度及藻体密度,孢子附着及萌发的最适温度与光照强度,浒苔苗网下海养殖小苗最适长度。结果显示:浒苔在温度25℃、藻体密度为0.8 g/L时藻体放散孢子量最大,温度为20℃、晴天[光照强度300μmol/(m2·s)]时浒苔孢子附着及萌发效果最好,浒苔幼苗海区养殖的适宜藻体长度为1~3 cm。根据以上育苗技术参数,2013年12月10日至2014年1月26日,在浙江象山港河伯所村奉化益珍海藻科技有限公司进行了浒苔规模化人工育苗试验,并初步建立了浒苔规模化人工育苗技术。本次规模化育苗共用6.6 kg新鲜藻体,共放散了17.82×1010个孢子,平均每克藻体放散孢子量高达2.7×107个;共采苗2 000张苗帘(规格16 m×1 m),平均每张网帘附有8.64×107个孢子;网苗经20℃室内培育,7 d萌发达到最高峰,平均20棵苗/cm,小苗长度最长可达3 cm,达到出海养殖要求。育苗全过程共为45 d。该研究为浒苔规模化人工育苗技术建立奠定了坚实基础。     

坛紫菜自由丝状体移植育苗的初步研究

为建立有效的坛紫菜自由丝状体移植育苗技术,以坛紫菜的2个选育品系"申福1号"和"申福2号"及野生型品系为实验对象,初步研究了自由丝状体的移植量、移植后培养的光密度和温度对贝壳丝状体的生长和壳孢子放散量的影响,结果如下:当自由丝状体移植量为50～500 mg/m2,随着移植量的增加,贝壳丝状体的藻落数显著增加,但移植量如果超过100 mg/m2,贝壳丝状体的壳孢子放散量反而减少。培养光密度在10～50μmol photons/(m2.s)范围内,随着光密度的增加,贝壳丝状体的生长速度明显增快,但壳孢子的放散量却随着光密度的提高而减少。培养温度在15～25℃范围内,随着温度的升高,贝壳丝状体的生长明显加快;在15～20℃范围内,壳孢子放散量随着培养温度的升高而增加,在20～25℃范围内,壳孢子放散量反而随着培养温度的升高而减少。上述结果表明,在坛紫菜自由丝状体移植育苗中,过大的丝状体移植量、过高的培养温度和光密度均会导致贝壳丝状体的壳孢子放散量减少。     

海水盐度对鹿角海萝孢子生长发育及存活的影响

研究了海水盐度突变对鹿角海萝孢子、孢子发生体和盘状体的影响。释放于盐度为31的鹿角海萝孢子分别移入不同盐度海水(16、21、26、31、36、39)中进行附着及培育30d;鹿角海萝孢子发生体(孢子在盐度为31海水中附着24 h)和盘状体(孢子在盐度为31海水中附着5 d)则分别移入不同盐度海水(10、16、31、52、57)中培育20 d。结果表明,鹿角海萝孢子附着、生长发育和存活的最合适盐度范围为26~36;孢子发生体生长最适盐度范围为16~31,存活合适盐度范围为16~52;盘状体生长的最适盐度范围为10~31,存活的合适盐度范围为10~57。这些结果表明孢子不同萌发阶段对海水盐度突变的适应性不同。实验结果为鹿角海萝人工育苗及增养殖提供了参考。研究亮点:海水盐度是水生生物生长发育和生存的主要影响因子之一,有关盐度对鹿角海萝孢子附着及生长发育影响的文献极少。研究了海水盐度对鹿角海萝孢子附着、生长发育的影响且研究了孢子不同萌发阶段对海水盐度的适应性。为其人工育苗及增养殖提供有价值的基础资料。     

条斑紫菜丝状细菌附着症的初步研究

对附着在条斑紫菜上的丝状细菌进行了详细的观察,结果表明,丝状细菌为无色、不分枝的丝状体,成熟的菌丝呈串珠状.菌丝体的基部可以进入细胞壁的表层,但不能穿透细胞壁.从大量附着丝状细菌的藻体上分离得到了丝状细菌菌株YL,经感染试验证实发病症状与自然海区患病紫菜的症状一致,说明该菌为条斑紫菜丝状细菌附着症的致病菌.对菌株YL的形态及致病性的研究结果表明,该菌为需氧革兰氏阴性菌,不能水解淀粉,接触酶呈阳性,在淡水中不能生长.在固体培养基上形成指纹状菌落;在液体培养基中所形成的微生子可聚集成玫瑰花环样结构及绳结状拓扑结构,初步确定其为毛霉亮发菌(Leucothrix mucor).该菌最适生长条件为盐度25～35,pH值为7.5～8.5,温度为10～25 ℃.