鸡免疫球蛋白G Fc(IgG Fc)片段的分离纯化及其抗血清的制备 Ⅱ.豚鼠抗鸡IgG Fc片段血清的制备

经硫酸铵盐析、DEAE 32-纤维素和Sephadex G 200柱色谱法分离得到纯化的鸡血清IgG。然后用木瓜蛋白酶水解IgG,再经DEAE 32-纤维素柱色谱纯化制得IgG Fc片段,并以IgG Fc片段免疫豚鼠制备豚鼠抗鸡IgG Fc血清。     

鸡免疫球蛋白(GIgG)轻链的分离纯化及其抗血清的制备

经硫酸铵盐析、柱色谱分离得到纯化的鸡血清IgG。继用2-巯基乙醇还原、碘乙酰胶烷化拆开IgG的轻、重链,再经Sephadex G100凝胶过滤柱色谱分离得到IgG轻链。以IgG轻链免疫家兔制得兔抗鸡IgG轻链抗血清。     

鸡产蛋下降综合症病毒快速纯化及其抗血清制备

为研制鸡产蛋下降综合症病毒（ EDS-76）检测用标准抗原及标准多抗血清,以EDS-76国际通用毒株AV-127株为抗原,进行了EDS-76病毒抗原纯化及多抗血清制备。研究表明,经氯仿抽提,并经PEG浓缩处理病毒的尿囊液可获得良好的纯化效果,纯化病毒背景干净,血凝效价达19Log2。以此研制出的鸡抗 EDS-76多抗血清血凝抑制效价达13Log2,间接免疫荧光效价达1∶2000,Western-blot试验分析表明该多抗血清可以识别两个分子大小在50 kD至85 kD之间的蛋白抗原,HI及IFA 试验发现所制备的特异性,多抗血清与12种常见禽病病原（ NDV、AIV-A、ALV-J、ALV、GPV、REV、MDV、IBV、CAV、IBDV、TMUV、REOV）均不反应。本研究建立的快速简便的EDS-76病毒纯化方法以及获得的抗EDS-76多抗血清,为进一步研制EDS-76标准抗原以及标准多抗血清提供了有效的方法与材料。     

鸡免疫球蛋白AFc(IgAFc)重链的分离纯化及其抗血清的制备

经硫酸铰盐析、柱色谱分离得到纯化的鸡胆汁免疫球蛋白A(IgA)。然后用木瓜蛋白酶水解IgA,再经DEAE_(52)—纤维素柱色谱纯化得到IgAFc重链。用IgAFc重链免疫家兔制得兔抗鸡IgAFc重链抗血清。     

猪IgM的分离纯化及其抗血清的制备

经硫酸锌盐析沉淀、Sephadex G-200凝胶过滤层析,分离纯化猪血清中IgM,得到了均一性较好的IgM,用此IgM免疫家兔制备了与IgG、IgA无交叉反应的特异性较强的抗IgM血清。     

鸡血清载脂蛋白AⅠ的分离纯化及其抗血清的制备

用磷钨酸沉淀制备鸡血清HDL，乙醇-丙酮混合液(体积比为1：1)脱脂后采用DEAE Sepharose CL-6B离子交换柱层析法分离鸡血清apoAⅠ，分离获得的apoAⅠ在尿素-SDS-PAGE电泳中呈现单一条带，其分子质量约为27788u。将提取的apoAⅠ对新西兰雄兔进行多次免疫，制备得兔抗鸡apoAⅠ抗血清，其效价为1：16。在免疫电泳和双向免疫扩散试验中抗血清均只呈现1条清晰沉淀带。试验结果表明，用磷钨酸沉淀法制备兔抗鸡apoAⅠ抗血清，过程简便，时间短且分离效果好。     

鸡Mx基因的表达及其抗血清的制备

Mx蛋白已被证明具有抗A型流感病毒、Thogoto病毒和水泡性口膜炎病毒等的生物活性.本研究通过PCR扩增,将Mx基因克隆至pMD18-T载体;经测序验证后将Mx基因克隆到原核表达载体pProExHTa和pcDNA3.1中.以构建的重组质粒pProExHTa-Mx转化大肠杆菌BL21,进行诱导表达,以切胶纯化方式回收了Mx融合蛋白,加佐剂乳化,免疫新西兰白兔制备抗血清;SDS-PAGE和western blot分析表明:Mx基因在大肠杆菌中以融合蛋白形式稳定表达,表达产物的相对分子量约80 ku,与预期值相符;抗血清能与Mx蛋白发生特异性反应.以真核表达重组质粒pcDNA3.1-Mx转染293T细胞,间接免疫荧光试验结果表明:原核表达蛋白免疫动物制备的抗血清与真核表达的Mx蛋白发生良好的免疫反应,表明用原核表达的Mx蛋白具有真核表达Mx蛋白相似的免疫学活性.抗血清的制备为鸡Mx蛋白的功能研究、Mx蛋白在转基因动物机体中表达的检测奠定了基础.     

鸡STARD3胞外域的原核表达及其抗血清制备

为获得鸡类固醇激素合成急性调节蛋白结构域3(STARD3)胞外域融合蛋白的特异性抗血清,采用人工合成方法获得鸡STARD3胞外域基因,利用pGEX6P-1质粒及BL21(DE3)进行原核表达,将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,利用Western blot及间接ELISA方法测定抗体特异性和效价。结果显示:获得了STARD3胞外域融合蛋白的特异性抗血清,效价大于1∶6 400。本试验为研究鸡STARD3蛋白功能奠定了基础。     

山羊甲状腺球蛋白的分离,纯化及抗血清制备

山羊甲状腺球蛋白的分离、纯化及抗血清制备陈创夫（新疆塔里木农垦大学畜牧兽医系，阿拉尔８４３３００）刘永庆，张远钰，王水琴（中国人民解放军农牧大学）梅文辉，高民（内蒙古畜牧科学院兽医所）甲状腺球蛋白（ＴｈｙｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎＴＧ）是一种糖蛋白，由甲状...     

丹顶鹤血清IgY的纯化及其抗血清的制备

利用分离的丹顶鹤血清,应用饱和硫酸铵沉淀法对血清中的IgY进行初步提取,然后通过DEAE-52纤维柱进行纯化,SDS-PAGE测定IgY的纯度,最后以纯化后的丹顶鹤IgY为免疫原常规免疫法制备兔抗丹顶鹤IgY血清。结果表明:提纯后的IgY经电泳检测在分子质量63ku和27ku处出现2条特异性条带,经扫描软件分析其纯度大于90%;常规免疫法制备的兔抗丹顶鹤IgY血清经免疫双扩散法测定效价为1∶32。     

鸡γ-干扰素基因原核表达及多抗血清的制备

将扩增的鸡γ-干扰素基因(CHIFN-γ)克隆至原核表达载本pET30a上,构建了重组表达质粒pET-30a-CHIFN-γ.将其转入大肠杆菌BL21(DE3)中,于37℃不同时间诱导表达,经SDS-PAGE分析表明该蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,且以可溶蛋白的形式存在.蛋白通过镍离子亲和树脂进行纯化,并作为免疫原制备兔抗CHIFN-γ多抗血清.Western-blotting结果表明目的蛋白与多抗血清有免疫反应性.     

鸡产蛋下降综合症病毒快速纯化及其多抗血清制备

为研制鸡产蛋下降综合症病毒(EDS-76)检测用标准抗原及标准多抗血清,以EDS-76国际通用毒株AV-127株为抗原,进行了EDS-76病毒抗原纯化及多抗血清制备。研究表明,经氯仿抽提,并经PEG浓缩处理病毒的尿囊液可获得良好的纯化效果,纯化病毒背景干净,血凝效价达19Log2。以此研制出的鸡抗EDS-76多抗血清血凝抑制效价达13Log2,间接免疫荧光效价达1∶2000,Western-blot试验分析表明该多抗血清可以识别两个分子大小在50 kD至85 kD之间的蛋白抗原,HI及IFA试验发现所制备的特异性,多抗血清与12种常见禽病病原(NDV、AIV-A、ALV-J、ALV、GPV、REV、MDV、IBV、CAV、IBDV、TMUV、REOV)均不反应。本研究建立的快速简便的EDS-76病毒纯化方法以及获得的抗EDS-76多抗血清,为进一步研制EDS-76标准抗原以及标准多抗血清提供了有效的方法与材料。     

猪抗克伦特罗(CL)抗血清的制备及其IgG纯化与鉴定

为了获得高特异性、高纯度的猪抗克伦特罗 (CL)IgG ,将克伦特罗跟牛血清白蛋白 (BSA)偶联后 ,选取 1 0头大×大×约三元杂交猪 (5头为免疫组 ,5头为对照组 ) ,用偶联物BSA CL对其进行免疫 ,来制备猪抗CL抗血清。以卵清蛋白 (OVA)跟CL的偶联物OVA CL为包被抗原 ,采用ELISA法测定抗血清效价和血清阻断率。结果表明 ,有 4头猪体内产生了抗CL抗体 ,且在第 2次加强免疫后达到最大 ,效价为 1∶2 0 0 0 0 ;而当血清稀释率为 1∶40 0 ,CL的PBS液浓度在 1 8× 1 0 - 4 ～ 7 0× 1 0 - 7之间时 ,其阻断率为 80 %～ 1 8%。随后用正辛酸 硫酸铵法对血清抗体进行纯化 ,经紫外吸收法测定和SDS PAGE电泳试验结果表明IgG成份得到了纯化 ,可用于进一步的免疫试验     

火鸡疱疹病毒（HVT）抗血清的制备及检测

制备２批抗火鸡疱疹病毒（ＨＶＴ）血清，无菌检验合格，与鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）、鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、鸡传染性法氏囊炎病毒（ＩＢＤＶ）和Ｒｅｏ无交叉中和反应。蚀斑减少试验结果表明当病毒含量为１０个、５个羽份／０．１ｍｌ时，中和后尚有一些蚀斑存在。病毒含量为３．３羽份／０．１ｍｌ或更低时，中和后未见典型蚀斑存在     

鸡传染性法氏囊病病毒VP2基因的融合表达及兔抗血清的制备

以鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)Gt株基因组RNA为模板,通过RT-PCR扩增VP2基因,经EcoR Ⅰ/Sal Ⅰ酶双酶切处理后与经相同酶切处理的pET30a原核表达载体连接,将酶切、PCR及序列鉴定正确的阳性重组子转化E. coli DE3菌,经IPTG诱导,表达的VP2蛋白通过Ni-NTA树脂纯化后,免疫新西兰白兔,制备兔抗血清,并对其进行间接ELISA、IFA和Western blot分析.SDS-PAGE分析表明,在IVFG诱导下成功表达了约为50 kDa的His-VP2融合蛋白;间接ELISA检测制备的兔抗血清效价在1:25 600以上;IFA及Western-blot分析结果表明,其可特异性结合真核表达的VP2蛋白以及IBDV全病毒.研究结果提示,免抗VP2血清可用于VP2蛋白及病毒的检测,为进一步研究IBDV分子生物学功能提供了物质基础.     

不同免疫程序对制备狂犬病抗血清的免疫效果比较

设计了3种制备狂犬病抗血清的免疫程序，比较了它们的免疫效果。结果表明，在这3种免疫程序中，第2种免疫程序既取得了较能使人满意的抗体效价，动物死亡率亦较为适中，较好地兼顾到了成本付出与免疫血清品质两个方面，是一种比较符合实际工作需要的免疫程序。     

鸡球虫卵囊分离纯化与单卵囊制备技术的改进

鸡球虫病是严重危害和制约养鸡业发展的寄生虫病之一,凡是有养鸡的地方就有不同程度的鸡球虫病发生,特别是在集约化养鸡场,其发病率可达到50%～70%,死亡率也达20%～30%,严重时高达80%.对鸡球虫卵囊的分离纯化及单卵囊的制备工作是进行球虫病研究分析的主要工作,也是必备的工作.同时,球虫卵囊的分离技术是鉴别球虫的种类和建立球虫的纯种体系、调查某地区内球虫种类和获得球虫的纯种体系的重要手段,对进一步研究球虫的致病性、药物效应、产生的耐药性和禽体对球虫的免疫性、以及对抗球虫药的开发和球虫疫苗研制有重要意义.在结合科研实践的基础上对鸡球虫卵囊的分离纯化及单卵囊制备的操作方法进行改进,改进后提高了虫卵的回收率及单卵囊制备成功率,减化了工作流程.     

鸡、鸭SIgA的分离纯化及其抗体制备

黏膜免疫系统是机体抵抗病原微生物入侵的第一道防线,由于黏膜免疫比传统免疫途径更少产生动物应激,接种方便并可产生有效免疫保护,其在预防动物传染性疾病的良好应用前景而日益引起人们的关注。分泌型免疫球蛋白A分子(SIgA)是黏膜免疫的主要效应因子,它不仅可防止病原微生物在