中草药制剂TF-103抗鸡柔嫩艾美尔球虫病的临床试验

鸡球虫病是一种广泛而危害性极大的寄生虫病,特别是雏鸡的发病率、死亡率都较高.目前该病的防治主要依赖化学药物,但由于使用化学药物病原体易产生耐药性,且在可食性产品中的药物残留会危害人类的健康.因此,人们愈来愈重视毒副作用相对较小的、使用安全的中草药抗球虫制剂.TF-103是一种以中药白头翁(Pulsatilla chinensis)为主药组成的纯中药抗球虫方剂.在反复筛选及正交试验优化组方的基础上,经多次药效学和工艺学研究开发的新型中药抗球虫产品,本品毒性极低[1,2],且抗鸡球虫活性稳定.本次试验是在前期工作的基础上,对三批中试产品进行了抗鸡柔嫩艾美尔球虫病的临床放大试验研究,目的是为了验证生产工艺的稳定性和临床应用的有效性.     

硝唑尼特混悬液对鸡柔嫩艾美尔球虫病治疗效果研究

采用人工接种柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊的方法复制鸡球虫病模型,检测发病率、死亡率、存活率、增重量等指标,研究硝唑尼特混悬液对鸡球虫病的临床治疗效果.结果显示,高、中、低剂量的硝唑尼特抗球虫指数分别为163.6、168.3、137.9;硝唑尼特混悬液与癸氧喹酯对照组相比差异显著(P＜0.05),与妥曲珠利对照组相比差异不显著(P＞0.05);硝唑尼特混悬液高剂量组和中剂量组差异不显著(P＞0.05),抗球虫指数为中效,低剂量组的抗球虫指数为低效.试验证明,硝唑尼特混悬液对鸡柔嫩艾美耳球虫病具有一定的治疗效果,有望开发为新的抗球虫药物.     

球虫散防治鸡柔嫩艾美尔球虫病试验

试验观察了中药制剂球虫散分别以0．5％、1％和2％添加于饲料中的抗鸡柔嫩艾美尔球虫效力，结果发现将球虫散按1％以上添加于饲料中其抗球虫指数达到180以上，具有高效抗球虫作用。由于中药具有毒性低、残留少等优点，在防治鸡球虫病方面具有很好的应用前景。     

中药复方对鸡柔嫩艾美尔球虫病的疗效观察

通过人工感染预防试验和治疗试验,对由常山、青蒿等5种中草药按特定配比组成的中药复方的抗球虫效果进行了试验观察。试验结果表明,以常山和青蒿为主药的该中药复方对柔嫩艾美耳球虫在预防和治疗上均有较好的效果。     

球虫散防治鸡柔嫩艾美尔球虫病试验

本试验观察了中药制剂球虫散分别以0.5%、1%和2%添加于饲料中的抗鸡柔嫩艾美尔球虫效力,结果发现将球虫散按1%以上添加于饲料中其抗球虫指数达到180以上,具有高效抗球虫作用,由于中药具有毒性低、残留少等优点,在防治鸡球虫病方面具有很好的应用前景。     

球必治防治鸡柔嫩艾美尔球虫病试验

本试验观察了球必治饮水剂以３０００,５０００和７０００倍稀释,让鸡自然饮用的抗鸡柔嫩艾美尔球虫效力,结果发现将球必治饮水剂按５０００倍稀释分别于鸡感染球虫前２天和感染后１天给药的抗球虫指数均在２００以上,说明其对鸡柔嫩艾美尔球虫病有很好的预防和治疗作用,是较好的抗球虫药,值得推广。     

纯中药制剂"球宁"对鸡柔嫩艾美尔球虫病的疗效试验

用纯中药制剂球宁(由青蒿、仙鹤草、硫磺等组成)防治鸡球虫病。结果表明纯中药制剂球宁对鸡球虫病有良好的防治作用，以1％添加剂量组最好，ACl为199．6．并能提高增重率。     

抗球虫中药方剂对柔嫩艾美尔球虫感染鸡的疗效研究

为研究中药方剂对鸡感染柔嫩艾美尔球虫的疗效,试验将80只AA肉鸡随机分为4组,除空白对照外,其余各组经口感染混合孢子化球虫卵囊;第3组按5%剂量拌料添加中药,第4组按0.06%的比例拌料添加磺胺氯吡嗪钠。试验中药方剂抗球虫指数(ACI)为167.4,属中效抗球虫药。结果表明,该中药方剂可以用于鸡球虫病的防治。     

中药抗柔嫩艾美尔球虫机制研究

根据中兽医理论和鸡球虫病的特点，用纯中药组方，经组方药效筛选试验，选用抗球虫效果最佳的组方进行抗球虫机制研究，结果表明，所选中药组方具有明显的抑制未孢子化柔嫩艾美尔球虫卵囊的成熟，对孢子化孵囊具有杀灭作用，并且使外周血液中淋巴细胞尤其是Ｔ淋巴细胞增多，提高免疫器官中Ｔ和Ｂ淋巴细胞的数量和活性，从而提高机体的免疫能力，证明了该组具有高效抗球虫效果。     

中草药复方制剂对鸡柔嫩艾美耳球虫的疗效研究

对用常山、苦参等组成的中草药复方制剂进行了抗球虫效果的研究。试验共分5组，即中药1组、中药2组、地克珠利组、感染不给药组和不感染不给药组。试验结果表明：中药1组、中药2组、地克珠利组的抗球虫指数分别为174.8、154.5、183.0。中药1组具有中等抗球虫效果。     

不同中药复方抗鸡柔嫩艾美耳球虫的效果观察

采用人工感染发病的方法，对由常山、柴胡、青蒿、白头翁、地榆、黄芪等10多味中草药，按照不同的组成和配比组成的12个不同中药复方的抗鸡柔嫩艾关耳球虫的效果进行了试验观察。结果方6和方12效果最佳，抗球虫指数分别达到131．13和132．15，较感染不给药组分别提高了138．85％和140．71％；存活率也均达100％；相对增重率分别为71．13％和73．15％，较感染不给药组分别提高了17．23和19．25个百分点。     

中草药微生态制剂对鸡柔嫩艾美耳球虫防控效果的研究

为探究中草药微生态制剂对鸡柔嫩艾美耳球虫预防效果,将200只1日龄白羽肉鸡随机分成5组,分别为中草药微生态制剂组、磺胺药组、地克珠利组、不感染不用药组、感染不用药组。将各种药物按照有效添加量与饲料混合,中草药微生态制剂组的有效添加量为2g/kg,地克珠利组的有效添加量为1g/5kg,持续添加20d后,用柔嫩艾美耳球虫分离株孢子化卵囊感染鸡,再持续添加8d,磺胺药组的有效添加量为2g/kg,在感染球虫后持续使用3d,检测抗球虫指数、细胞因子水平、肠道病理变化等指标评价其抗球虫效果。结果显示:相较于磺胺、地克珠利,中草药微生态制剂能够降低鸡的死亡率,抗球虫指数能达到176.57,显著提高了IFN-γ、IL-2、IgG、SIgA表达水平,降低盲肠病变损伤程度,说明该中草药微生态制剂可有效防控鸡球虫病。     

益生菌对柔嫩艾美耳球虫感染鸡保护效果研究

接种柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)孢子化卵囊和益生菌,以血便记分、存活率、体增重和抗球虫指数为指标,探讨益生菌的抗球虫活性。在接种第7天后检测结果显示,益生菌抗球虫指数为137,能降低球虫感染鸡的血便记分,减轻鸡盲肠组织病理学结构的损伤,提高球虫感染鸡体增重和存活率,提示益生菌可以辅助应用于临床球虫病的防治。     

中草药复方防治肉鸡骨病的研究

为探明中草药复方对肉鸡骨病的防治效果,本研究选用160只1日龄健康科宝肉鸡,随机均分为8组,分别饲养至30和60日龄,由当归、枸杞、山药等8味中草药组成复方制剂,将中草药复方以高（0.6%）、中（0.4%）、低（0.2%）3个剂量组进行治疗试验,同时设置对照组饲喂基础饲粮,分别于30、60日龄时称重,采用生化分析仪检测骨代谢相关血液生化指标维生素D受体（VDR）、骨钙素（OT）、骨保护素（OPG）、碱性磷酸酶（ALP）,通过万能试验机进行三点弯曲试验,以弹性模量、屈服强度和最大应力为指标检测胫骨的骨强度,运用实时荧光定量PCR方法检测胸椎、腿软骨组织中骨保护素（OPG）、骨形态发生蛋白-2（BMP-2）、成骨细胞转录因子2（Runx-2）、细胞核因子κB受体活化因子（RANK）、细胞核因子κB受体活化因子配体（RANKL）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）基因mRNA表达量的差异。结果显示,与对照组相比添加复方中草药组试验鸡后体重略增加;60日龄时血清中VDR、OT、OPG、ALP含量显著或极显著提高（P<0.05;P<0.01）;肉鸡的胫骨骨强度指标（弹性模量、屈服强度和最大应力）显著增加（P<0.05）,且弹性模量、屈服强度、最大应力3个指标均表现为30日龄高于60日龄,与血液生化指标相符;复方中草药可显著促进OPG、BMP-2、Runx-2基因表达（P<0.05）,显著抑制TNF-α、RANK、RANKL基因表达（P<0.05）。综合试验结果,兼顾活重和骨强度相关指标,复方中草药高剂量组是改善科宝肉鸡骨骼特性最优配方,且中草药复方通过提高血清中VDR、OT、OPG、ALP含量,调控OPG/RANK/RANKL系统维持骨吸收和骨形成两者动态平衡,促进骨形成的重要通路BMP-2/Smads/Runx-2中BMP-2和Runx-2基因的表达,同时抑制TNF-α基因表达,以达到改善科宝肉鸡骨骼特性,最终有效防治肉鸡的骨病。     

中草药复方防治雏鸡沙门氏菌病的研究

为了探明中草药复方对雏鸡感染肠炎沙门氏菌（S. Enteritidis）的防治效果,本研究选取黄连、鹿蹄草、白头翁等23味中草药组成的复方中草药制剂进行体外和体内抑菌试验。体外抑菌试验中草药复方的抑菌直径为17.4 mm,说明沙门氏菌对其高度敏感。体内抑菌试验中,将中草药复方以低（0.1%）、中（0.3%）、高（0.5%）3个剂量进行治疗试验,结果表明,肠炎沙门氏菌感染后,与对照组相比,3个试验组均极显著提高了试验鸡的成活率（P<0.01）,显著降低了试验鸡的料重比（F/G）（P<0.05）,中、高剂量组的平均日增重（ADG）显著高于对照组（P<0.05）,中剂量组的平均日采食量（ADFI）显著低于对照组（P<0.05）。3个试验组试验鸡的脾脏指数、白细胞数量（WBC）、血小板计数（PLT）、免疫球蛋白A（IgA）、IgG、IgM、补体C4含量均显著低于对照组（P<0.05）,而胸腺指数、法氏囊指数、红细胞数量（RBC）、血红蛋白浓度（HGB）、红细胞压积（HCT）均显著高于对照组（P<0.05）。实时荧光定量PCR结果显示,抗菌肽基因（CATH1、CATH2、CATH3）在脾脏、胸腺和法氏囊中的表达量均不同程度地高于对照组。综合试验结果,日粮中添加中草药复方可以降低雏鸡感染肠炎沙门氏菌后的死亡率,提高雏鸡的免疫能力和抗菌能力,改善生长性能,其中,中剂量组（0.3%）的防治效果最佳。     

通扬球虫清对鸡球虫病的疗效试验

测定了通扬球虫清对鸡球虫病的疗效,三批试验结果显示,通扬球虫清高剂量组(甲基三嗪酮37.5mg/L饮水浓度,8天)和中剂量1组(甲基三嗪酮25mg/L饮水浓度,8天)的抗球虫指数始终在高效水平;中剂量2组(甲基三嗪酮25mg/L饮水浓度,2天)和通扬独霸组(地克珠利0.5mg/L饮水浓度,8天)的抗球虫指数相近,也属高效抗球虫范围;通扬球虫清低剂量组(甲基三嗪酮12.5mg/L饮水浓度,8天)的抗球虫指数属中等有效水平。综合各项指标及与通扬独霸组的药效相比,通扬球虫清在临床上选用25mg/L饮水浓度,连续饮用2天或2天以上切实可行。     

柔嫩艾美耳球虫拉沙里菌素抗性虫株的实验室诱导

采用实验室建立抗性虫株的方法,用４０、６０、７５、１０５、１２５、１３５μｇ／ｇ梯度的拉沙里菌素作用于柔嫩艾美耳球虫盐霉素敏感株和盐霉素抗性株,经过１５次继代,诱导产生了对１３５μｇ／ｇ拉沙里菌素的抗药性虫株。在同一诱导条件下,盐霉素敏感株和盐霉素抗性株对拉沙里菌素产生抗药性的时值和强度没有差异。     

地克珠利对球虫感染雏鸡血清抗氧化功能的影响

选择120只14日龄雏鸡,随机分为对照组(Ⅰ)、感染组(Ⅱ)和地克珠利组(Ⅲ),每组40只.除Ⅰ组外,其余每只鸡口服感染8.0x104个E.tenella孢子化卵囊,分别于感染后第0、3、6、9、12天,每组随机取鸡5只,心脏采血,对血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量进行测定.结果表明,与Ⅰ组比较,Ⅱ组血清SOD活性在感染后3、6、9 d极显著降低(P《0.01),GSH-Px活性在感染后6 d下降显著(p《0.05),MDA含量和CAT活性均表现不同程度的升降,但差异不显著(p》0.05).在感染高峰期(6 d),Ⅲ组血清SOD、GSH-Px、CAT活性虽然与Ⅱ组的差异未达显著水平,但分别较其提高了7.33%、19.82%和52.08%,MDA含量降低了14.58%,且GSH-Px、CAT活性与MDA含量与Ⅰ组比较差异不显著.提示地克珠利在一定程度上能增强球虫感染鸡的抗氧化能力.     

内源性NO在雏鸡球虫感染中的作用

以腹腔注射途径给予感染柔嫩艾美耳球虫 (E.tenella)雏鸡细菌脂多糖 (L PS)和地塞米松 (Dex) ,用铜离子活化镉还原法检测血清 NO- 2 水平 ,并通过测定 NBT阳性细胞百分率、雏鸡增重、免疫器官的脏器系数、OPG值以及盲肠病变记分等指标 ,探讨了 NO在雏鸡感染球虫过程中的作用。试验结果表明 ,与空白对照组相比 ,给予 L PS可使 NBT阳性细胞百分率明显升高 (P<0 .0 1) ,并使盲肠病变及球虫感染引起的增重下降有所减轻 ,这提示 L PS对雏鸡具一定的保护作用 ;而给予 Dex不仅降低了感染雏鸡血清 NO- 2 的水平、NBT阳性细胞百分率、增重和胸腺的脏器系数 ,还增加了 OPG值和盲肠病变记分 ,说明在雏鸡感染球虫过程中 ,Dex会减少 NO的生成 ,并使雏鸡抗球虫免疫力下降。