鳗弧菌vah1缺失菌株构建及致病性评估

为了构建减毒鳗弧菌菌株,本文通过基因重组和Overlap PCR技术,敲除鳗弧菌中的毒力基因vah1,构建vah1缺失鳗弧菌菌株△vah1,缺失菌株△vah1的生长速率没有变化,溶血活性下降了9.5倍,生物膜形成能力下降。通过感染凡纳滨对虾,得出野生菌株的半数致死量为(3.16±0.8)×10_⁵ cfu/mL,缺失菌株△vah1的半数致死量为(9.77±0.5)×10_⁵ cfu/mL,缺失菌株的半数致死量提高了约3.09倍,在对虾体内的定植能力下降了约3倍左右,对凡纳滨对虾的肝胰腺细胞造成的溶解和空泡化的破坏程度下降了,引起凡纳滨对虾的免疫基因CAT、SOD、PO、LZM、ACP的表达水平低于野生菌株。△vah1鳗弧菌菌株为后续减毒疫苗菌株或抗鳗弧菌特异性免疫增强剂制备奠定基础。     

苹果籽油中植物甾醇抗氧化活性研究

【目的】研究苹果籽油中植物甾醇的抗氧化活性,为抗氧化剂的筛选及其清除自由基机理研究提供参考。【方法】以抗氧化剂维生素E（V_E）和2,6-二叔丁基对甲酚(BHT)为对照,采用1,1-二苯基-2-苦苯肼（DPPH）法、邻二氮菲Fe²⁺分光光度法、超氧阴离子自由基（O₂^-·）法,测定并分析了苹果籽油的2种植物甾醇抗氧化剂（样品T1和T2）对DPPH·、羟基自由基OH·及O₂^-·的清除能力。【结果】4种抗氧化剂清除自由基的能力不同,其对DPPH·的清除能力表现为苹果籽油甾醇样品T1（IC₅₀为6.7 μg/mL）>苹果籽油甾醇样品T2（IC₅₀为7 μg/mL）>V_E（IC₅₀为10 μg/mL）>BHT（IC₅₀为16 μg/mL）;清除OH·的能力表现为苹果籽油甾醇样品T2（IC₅₀为29 μg/mL）>苹果籽油甾醇样品T1（IC₅₀为30 μg/mL）>BHT（IC₅₀为60 μg/mL）>V_E（IC₅₀为85 μg/mL）;清除O₂^-·的能力表现为苹果籽油甾醇样品T1（IC₅₀为17 μg/mL）>苹果籽油甾醇样品T2（IC₅₀为19 μg/mL）>BHT（IC₅₀为21 μg/mL）>V_E（IC₅₀为35 μg/mL）。【结论】苹果籽油中的植物甾醇具有较强的体外抗氧化活性,对DPPH·、OH·、O₂^-·具有明显清除作用。     

pH胁迫对3种对虾存活率、离子转运酶和免疫酶活力的影响

比较研究了中国明对虾（Fenneropenaeus chinensis）、凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）和日本囊对虾（Marsupenaeus japonicus）在对照组（pH 8.2）、低pH胁迫组（pH 7.2）和高pH胁迫组（pH 9.2）养殖水体条件下的存活率、鳃离子转运酶（Na⁺-K⁺-ATPase）活力及血淋巴iNOS、PO、SOD、GSHPX、LSZ活性。结果表明：对照组3种对虾的存活率整个实验期间均为100％;低pH和高pH胁迫条件下,日本囊对虾存活率分别为96.7％和97.0％;凡纳滨对虾存活率分别为60.1％和54.6％,中国明对虾的存活率分别为58.6％和13.3％。对照组条件下,凡纳滨对虾鳃离子转运酶（Na⁺-K⁺-ATPase）活力最大,中国明对虾其次,日本囊对虾最小;在低和高pH胁迫条件下,中国明对虾鳃Na⁺-K⁺-ATPase活力变化幅度均比凡纳滨对虾大,日本囊对虾的变化幅度最小,并且3种对虾鳃Na⁺-K⁺-ATPase活力在高pH胁迫条件下变化幅度均较大。对照组条件下日本囊对虾和凡纳滨对虾血清中非特异性免疫酶活性均显著或极显著高于中国明对虾,且日本囊对虾的PO、SOD活力分别显著、极显著高于凡纳滨对虾;在低和高pH胁迫条件下,中国明对虾和凡纳滨对虾血清非特异性免疫酶的活力变化幅度均显著高于日本囊对虾。中国明对虾和凡纳滨对虾血清iNOS、SOD、GSHPX、LSZ活力在低pH条件下变化幅度较大,而PO活力在高pH条件下变化幅度较大。综合上述结果显示3种对虾相比,日本囊对虾对pH胁迫的耐受性较强,凡纳滨对虾次之,中国明对虾较弱。     

酵母提取物替代鱼粉对凡纳滨对虾免疫抗菌机能和溶菌酶mRNA及Toll受体mRNA表达的影响

以鱼粉含量为25%的饲料为对照组,分别用酵母提取物替代配方中15%、30%、45%和60%鱼粉,配制5组等氮、等能饲料投喂凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）(7.50±0.13) g 42 d,研究酵母提取物替代鱼粉对凡纳滨对虾血清免疫酶及鳃组织中溶菌酶mRNA及Toll受体mRNA相对表达量的影响,并进行溶藻弧菌（Vibrio alginolyticus）人工急性感染试验。结果表明：15%组血清溶菌酶（LSZ）活性显著高于对照组（P<0.05）,其余替代组与对照组无显著差异。酵母提取物部分替代鱼粉对凡纳滨对虾血清超氧化物歧化酶（SOD）活性和鳃组织中溶菌酶mRNA及Toll受体mRNA的相对表达量影响均不显著（P>0.05）;经溶藻弧菌人工急性感染后,24 h和48 h时 60%组累计死亡率显著高于对照组（P<0.05）,其余各替代组与对照组差异不显著（〖WTBX〗P〖WTBZ〗>0.05）,72 h和96 h时各替代组与对照组差异均不显著（P>0.05）。表明以酵母提取物替代凡纳滨对虾饲料中45%的鱼粉不会显著降低凡纳滨对虾的免疫抗菌能力。     

几种淡水鱼肌肉乙酰胆碱酯酶的盐析提取及农药敏感性研究

以鲢鱼、镛鱼和罗非鱼肌肉组织为材料,研究乙酰胆碱酯酶AChE的盐析提取方法及农药敏感性。结果表明,3种淡水鱼肌肉组织在55%硫酸铵饱和度时得到的沉淀酶总活力最高,乙酰胆碱酯酶的比活力分别达到0.264,0.263,0.221 U/mg,纯化倍数分别为1.222,1.277,1.190,回收率分别为27.626%,37.621%,26.441%。5种有机磷农药（敌敌畏,辛硫磷,马拉硫磷,乙酰甲胺磷,氧化乐果）对3种淡水鱼肌肉乙酰胆碱酯酶有抑制作用,其中罗非鱼AChE对敌敌畏最敏感,抑制中浓度I50为0.14μg/mL,对马拉硫磷最不敏感,抑制中浓度I50为11.202μg/mL     

凡纳滨对虾繁育相关基因Allatostatin-AR的克隆与表达分析

咽侧体抑制素主要抑制昆虫咽侧体保幼激素的分泌,是昆虫体内重要的神经肽,在甲壳动物体内可能参与繁殖发育的调节。本研究利用RACE PCR技术对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)A型咽侧体抑制素受体(Allatostatin-A receptor,AST-AR)基因进行克隆,获得全长为2 650 bp的cDNA,包括1 425 bp的开放阅读框,1 170 bp 5''非编码区,55 bp 3''非编码区,编码474个氨基酸,形成具有7个跨膜区的不稳定亲水性蛋白。同源性和系统发育分析结果表明凡纳滨对虾AST-AR基因与斑节对虾(Penaeus monodon)、美洲龙虾(Homarus americanus)同源性最高,亲缘关系最近。氨基酸多重序列比对结果显示AST-AR氨基酸TM7后C末端精氨酸在不同物种之间高度保守。实时荧光定量PCR结果显示,AST-AR基因在雌、雄凡纳滨对虾多个组织(眼柄、脑、胃、肝胰腺、鳃、性腺、肠、肌肉)中均有表达,除脑组织外AST-AR基因在雌性凡纳滨对虾中相对表达量高于雄性。在幼体发育中,AST-AR基因的相对表达量随发育阶段上升,同时该基因在不同群体仔虾生长对比实验中表达量差异显著。据此推测AST-AR基因参与凡纳滨对虾的繁殖、幼体发育、幼虾生长到成虾,基因表达基本贯穿凡纳滨对虾的一生。     

丹参内生细菌抗氧化及抗菌活性

对8株分离自陕西杨凌的丹参根部内生细菌进行抗氧化和抗菌活性研究,抗氧化活性采用DPPH法,抗细菌活性采用二倍稀释法,抗植物病原真菌采用抑制菌丝生长速率法。结果表明：8株内生细菌均具有抗氧化活性,尤其是B1(Pseudomonas brassicacearum subsp. neoaurantiaca)和B5(Bacillus aryabhattai);8株丹参内生细菌对5种人体病原细菌抑制活性较弱,仅B1、B3(Pseudomonas thivervalensis)和B5具有较弱活性;丹参内生细菌对8种植物病原菌菌丝生长有较强的抑制活性,对番茄灰霉病菌尤其敏感,IC₅₀为1.48~12.06 g/L,其中B5的广谱性较强,对测试菌株都有活性,IC₅₀为1.48~32.28 g/L。     

壳寡糖对黄曲霉毒素B1诱导大鼠肝细胞毒性损伤的干预作用

为了研究壳寡糖（COS）对黄曲霉毒素B1（AFB₁）诱导大鼠肝细胞（BRL 3A细胞）毒性损伤的干预作用。采用CCK-8法分别测定AFB₁对细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）和COS对细胞的无损害作用浓度；用试剂盒检测COS预处理细胞6 h后再加入AFB₁继续培养24 h的细胞存活率、活性氧（ROS）水平、丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、谷胱甘肽S-转移酶（GST）活性和细胞凋亡率；通过Real-time quantitative PCR（RT-qPCR）测定Nrf2、Keap1、Ho-1、Nqo1、Bax和Bcl-2基因的mRNA相对表达量；最后通过RNA-seq研究分析差异表达基因的层次聚类和富集途径。结果：AFB₁对BRL 3A细胞的IC₅₀为15.86 μmol/L，COS浓度小于125 μmol/L时不会对细胞造成毒性损伤；COS可以缓解AFB₁引起的细胞内ROS水平和MDA含量升高，增强SOD和GST酶活性，进而提高细胞自身的抗氧化能力，降低细胞凋亡率；AFB₁可引起促凋亡基因Bax的显著表达（P<0.05），并显著降低Nrf2、Keap1、Ho-1、Nqo1的转录水平（P<0.05），而COS预处理则能显著提高Nrf2、Keap1、Ho-1、Nqo1基因的表达（P<0.05），显著降低Bax的表达水平（P<0.05）；在RNA-seq的富集途径结果中，COS还可能通过细胞色素P450对外源物质的代谢作用、药物代谢-细胞色素P450和p53信号通路途径来缓解AFB₁诱导的细胞毒性损伤（P<0.05）。结果表明：COS预处理对AFB₁诱导大鼠肝细胞的毒性损伤具有干预作用，其机制可能与Nrf2信号通路、细胞色素P450对外源物质的代谢作用、药物代谢-细胞色素P450和p53信号通路有关。     

4个不同世代凡纳滨对虾群体AFLP遗传多样性分析

利用AFLP(amplified fragment length polymorphism)技术对4个不同世代的凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)群体进行遗传分析,探讨亲本、F₁、F₂和F_n4个世代群体间的遗传差异。选取10对AFLP引物组合对4个世代凡纳滨对虾群体共80尾个体进行比较分析,共扩增出483个位点,其中348个为多态位点;4个群体的多态位点比例为:61.90%、49.28%、50.52%、46.38%;4个群体的Shannon多样性指数分别为:0.3134、0.2621、0.2594、0.2262;结果表明亲本与F₁,F₂与F_n相互间遗传距离更为紧密。通过对4个不同世代群体的遗传多样性研究,为下一步进行杂交选育提供理论支持。     

9种生物杀菌剂对党参根腐病菌的毒力测定及田间防效

为了探索生物杀菌剂对党参根腐病的防控效果,选用9种生物杀菌剂,对党参根腐病主要病原菌尖孢镰孢菌(Fusarium oxysporum)进行了室内毒力测定,并开展了田间药效试验。室内毒力测定结果表明：80%乙蒜素EC抑菌活性最强,EC₅₀为9.49 μg/mL,其次为1%申嗪霉素SC、3%中生菌素WP,EC₅₀依次为24.49 μg/mL、29.56 μg/mL;10亿cfu/g 哈茨木霉DP、4%小檗碱AS、10%多抗霉素WP的抑菌活性略低,EC₅₀依次为51.01 μg/mL、55.74 μg/mL、498.45 μg/mL。田间试验结果表明：10%多抗霉素WP的效果最好,防效为44.72%;其次为80%乙蒜素EC与10亿cfu/g 哈茨木霉DP,防效分别为41.93%和41.78%。     

辛硫磷及毒死蜱对中华稻蝗的毒力研究

本文采用点滴法分别测定了辛硫磷和毒死蜱对中华稻蝗5龄若虫的毒力,做出了毒力回归曲线并得到毒力回归方程及LD50值。辛硫磷的毒力回归方程为Y=2.79X-6.07,LD50=1.96μg/g虫重,毒死蜱的毒力回归方程为Y=2.86X-7.01,LD50=3.69μg/g虫重。比较两种农药的毒力回归方程、LD50值和95%置信区间,结果表明辛硫磷对中华稻蝗5龄若虫的药效较毒死蜱强。     

20种杀虫剂对稻纵卷叶螟高龄幼虫的效果

20种杀虫剂对稻纵卷叶螟高龄幼虫的试验表明:24h内防治效果最好的杀虫剂品种是阿维菌 素,其次是锐劲特及赛丹。拟除虫菊酯类杀虫剂功夫、灭扫利及高效氯氰菊酯,以及沙蚕毒系的杀虫 双仍能有效控制稻纵卷叶螟的为害。有机磷类杀虫剂三唑磷、乙酰甲胺磷、辛硫磷、乐斯本、甲胺磷、 甲基1605及敌敌畏以及三种含有机磷的混剂对稻纵卷叶螟高龄幼虫几乎无效。同一杀虫剂对不同 地区的稻纵卷叶螟幼虫的防治效果有差异。     

3种有机磷杀虫剂对烟草粉螟幼虫的室内熏杀效果

目前我国农户烟仓害虫的防治多采用有机磷杀虫剂进行熏杀处理,但因施药剂量随意性较大而影响卷烟原料的品质,寻找科学合理的熏杀剂量意义重大。采用滤纸载药密闭熏蒸法,研究了敌敌畏、毒死蜱和辛硫磷3种常规有机磷杀虫剂熏蒸浓度分别为3、6和9 g/m3时对烟草粉螟3龄幼虫的室内熏杀效果。结果表明：敌敌畏熏杀效果最好,辛硫磷次之,毒死蜱熏杀效果最差。敌敌畏3 g/m3浓度熏蒸3 d,试虫的校正死亡率可达89.9％;辛硫磷6 g/m3浓度熏蒸5 d,试虫的校正死亡率可达88.3％;毒死蜱6 g/m3浓度熏蒸5 d,试虫的校正死亡率为76.3％。目前在我国农户烟仓害虫防治方面,敌敌畏仍不失为一种理想的熏杀药剂。     

5种药剂对金银花尺蠖室内毒力及田间药效研究

[目的]明确常用杀虫剂对金银花尺蠖的防治效果。[方法]选用5种药剂(敌敌畏、辛硫磷、溴氰菊酯、毒死蜱和高效氯氰菊酯)的原药和乳油分别对金银花尺蠖幼虫进行了室内毒力测定和田间药效试验。[结果]5种药剂中,高效氯氰菊酯的毒力最大,48 h的LC50为0.019 3μg/ml;其他依次为毒死蜱、敌敌畏、辛硫磷和溴氰菊酯,48 h的LC50分别为0.027 6、0.050 5、0.053 3和0.056 3μg/ml。5种药剂在药后7 d的防效均达到80%以上,其中4.5%高效氯氰菊酯乳油和48%毒死蜱乳油的效果最好,其药后7 d的防效均为100%。[结论]5种药剂对金银花尺蠖幼虫均具有较高的毒力和田间防效。     

落叶松毛虫AChE 最佳反应体系建立及其 对3 种杀虫剂敏感性比较

通过正交试验和酶活性测定法研究了落叶松毛虫6 龄幼虫乙酰胆碱酯酶(AChE)最佳反应体系及对3 种杀 虫剂的敏感性。结果表明:落叶松毛虫6 龄幼虫AChE 最佳反应条件为酶液质量浓度0郾2 g/ mL、底物浓度0郾8 mmol/ L、反应体系pH 7郾5、水浴温度35 益和反应时间5 min。敌敌畏、高效氯氟氰菊酯和阿维菌素对落叶松毛虫6 龄幼虫体外AChE 活性产生不同的抑制作用,且抑制效应与杀虫剂呈现明显的剂量鄄效应关系;其中敌敌畏抑制效 果最显著(IC50 =3.018 ·10 -4 mg/ mL),其次是高效氯氟氰菊酯(IC50 = 1.436 ·10 -2 mg/ mL),而阿维菌素对AChE 活性抑制效果最弱。      

罗非鱼乙酰胆碱酯酶的组织分布尧动力学特性及农药敏感性分析

鱼体内乙酰胆碱酯酶(AChE)活性的降低是水体环境农药污染的重要生物化学标记.以奥利亚罗非鱼(Oreochromis aurea)肌肉、肝脏和脑组织为材料,研究乙酰胆碱酯酶的组织分布、动力学性质及12种杀虫剂(9种有机磷类、3种氨基甲酸酯类)对酶的抑制作用.结果表明:脑组织蛋白含量最低(1.53 mg/mL),比活力最高(1.34μmol/min· mg).脑组织AChE的Km值最小(0.160 mmol/L),其次是肌肉AChE (0.227 mmol/L),最高是肝AChE(0.902 mmol/L).脑组织AChE的Vmax最大(2.35 μmol/min ·mgp),其次是肝组织,最小是肌肉组织(0.63μmol/min· mgp).12种农药对肌肉AChE抑制作用强弱顺序为:敌敌畏＞辛硫磷＞敌百虫＞呋喃丹＞乐果＞甲基异柳磷＞马拉硫磷＞氧化乐果＞丁硫克百威＞甲胺磷＞对硫磷＞灭多威,对脑AChE抑制作用强弱顺序为:敌敌畏＞呋喃丹＞灭多威＞敌百虫＞辛硫磷＞氧化乐果＞乐果＞对硫磷＞丁硫克百威＞甲基异柳磷＞马拉硫磷＞甲胺磷,对肝脏AChE抑制作用强弱顺序为:呋喃丹＞敌敌畏＞辛硫磷＞甲基异柳磷＞灭多威＞敌百虫＞氧化乐果＞丁硫克百威＞对硫磷＞马拉硫磷＞甲胺磷＞乐果.     

几种杀虫剂对甜菜夜蛾的毒力

采用点滴法和浸渍法分别测定了15种和9种药剂对甜菜夜蛾4龄幼虫的毒力,比较了不同龄期幼虫对药剂敏感性的差异.结果表明:点滴法测定的15种药剂的毒力大小顺序为虫螨腈>虫酰肼>硫丹>抑太保>溴氰菊酯>灭多威>甲氰菊酯>高效氯氰菊酯>阿维菌素>毒死蜱>氰戊菊酯>功夫菊酯>敌敌畏>乙酰甲胺磷>丙溴磷;浸渍法测定的9种药剂的毒力大小顺序为虫酰肼>溴氰菊酯>灭多威>抑太保>氰戊菊酯>硫丹>敌敌畏>三唑磷>辛硫磷;不同龄期甜菜夜蛾幼虫对药剂的耐药性差异显著,且随着龄期增大,幼虫的耐药性明显增强.     

不同药剂对绿豆豆象的防治效果研究

试验研究了不同药剂对绿豆豆象的防治效果。结果表明：用40%辛硫磷乳油500倍液浸种2h＋40%辛硫磷乳油500倍液喷雾防治效果最好,相对防效达到了85.85%,其次用80%敌敌畏乳剂500倍液浸种2h＋80%敌敌畏乳剂500倍液喷雾,相对防效达到了83.23%,用40%毒死蜱乳剂乳油1000倍液喷雾效果最差。     

几种中低毒杀虫剂防治稻水象甲成虫的效果研究

以中低毒杀虫剂200 g/L氯虫苯甲酰胺EC(康宽)、5%来福灵EC、20%丙溴磷EC、40%毒死蜱EC、40%辛硫磷EC和20%辛硫.三唑磷EC为试验药剂,研究了不同药剂对稻水象甲成虫的防治效果。结果表明:5%来福灵EC375 mL/hm2、200 g/L氯虫苯甲酰胺EC150 mL/hm2、40%毒死蜱EC900 mL/hm2、20%丙溴磷EC3600 mL/hm2、20%辛硫.三唑磷EC 950 mL/hm2对稻水象甲成虫均有良好的防治效果。其中,200 g/L氯虫苯甲酰胺EC、40%毒死蜱EC和20%辛硫.三唑磷EC可以作为生产上替代高毒农药防治稻水象甲的药剂。20%丙溴磷EC虽然防效较好,但其用药量大,成本高,可作为生产上交替使用的药剂品种。