中药提取物和盐酸左旋咪唑免疫调节作用的研究

本研究分别在临床健康鸡和在1日龄使用免疫抑制剂环磷酰胺(CY)诱发了免疫抑制状态的鸡,测试了中药制剂和盐酸左旋咪唑对鸡的免疫调节作用。结果表明,在饮水中添加50ppm的盐酸左旋咪唑(Lev),无论在健康鸡还是免疫抑制鸡对鸡新城疫病毒(NDV)、H5亚型禽流感病毒(H5-AIV)灭活疫苗免疫后的血凝抑制(HI)抗体水平都没有明显影响(P0.05);由黄芪、当归、白术、甘草组成的提取物对NDV和H5-AIV免疫后的HI抗体水平也没有明显影响(P0.05),但是在CY诱发了免疫抑制的鸡,该中药浸出物可显著提高对NDV、H5-AIV的HI抗体滴度(P0.01)。该研究表明,由黄芪、当归、白术和甘草组成的提取物对CY诱发的免疫抑制状态下的鸡有显著的免疫调节作用,盐酸左旋咪唑没有免疫调节作用。     

中药提取物对鸡免疫调节作用的研究

选择临床健康鸡和1日龄感染网状内皮组织增生症病毒(REV)诱发了免疫抑制的鸡,测试了不同方法提取的中药提取物对免疫调节的作用。结果表明,在饮水中添加由黄芪、党参、淫羊藿和甘草组成的提取物,无论是水溶性提取物(水提取物和乙醚提取后的水提取物)还是脂溶性提取物(乙醚提取物),对健康鸡NDV和H5-AIV灭活疫苗免疫后HI抗体水平没有影响(P>0.05),水溶性提取物对REV诱发的免疫抑制鸡的NDV和H5-AIV灭活疫苗免疫后HI抗体水平有显著影响(P<0.01),可显著提高其抗体水平。REV也同样诱发了试验动物体重和免疫器官的抑制,无论是水溶性提取物还是脂溶性提取物对免疫抑制动物的体重没有影响(P>0.05),水溶性提取物对免疫抑制动物免疫器官重量有显著作用(P<0.05),可显著增加免疫器官重量,脂溶性提取物对免疫器官重量没有影响(P>0.05)。试验表明,中药的水溶性成分可明显增强免疫抑制鸡的抗体水平,并可以显著增加免疫抑制鸡的胸腺、法氏囊和脾脏的重量,而由同样中药组成的乙醚提取成分则没有免疫增强作用。     

中药对vMDV型强毒诱发的免疫抑制鸡免疫增强作用的研究

试验探讨华蟾毒精、黄芪、党参、银杏果肉、淫羊藿及甘草组成的中药提取物对MDV-Ⅰ型强毒(vMDV)诱发的免疫抑制鸡只免疫增强作用,为开发中药免疫增强剂提供依据。试验分别用315只1日龄海兰褐仔公鸡和315只1日龄无特定病原体(SPF)白来航雏鸡感染vMDV诱发免疫抑制,检测华蟾毒精和中药提取物对鸡只的免疫增强作用。试验结果显示,华蟾毒精和中药提取物均可显著提高新城疫病红细胞凝集抑制试验(NDV HI)和禽流感H5亚型病毒红细胞凝集抑制试验(H5-AIV HI)抗体滴度(P0.05),说明华蟾毒精和中药提取物对vMDV诱发免疫抑制状态下的鸡只具有免疫增强作用。     

不同来源禽网状内皮增生病病毒株的致病性比较

本研究旨在探讨不同来源的禽网状内皮增生病病毒(REV)对1日龄SPF鸡的致病性.用包括分子克隆化病毒REV-C99在内的不同来源的6个REV株人工感染1日龄SPF鸡,以禽流感病毒灭活疫苗(H9-AIV、H5-AIV)与新城疫病毒灭活疫苗(NDV)免疫后HI抗体滴度的测定结果为指标,比较不同REV株的致病性.结果表明,分别用3000TCID_(50)·只~(-1)的剂量人工感染1日龄SPF鸡,6个REV感染组与对照组相比,H9-AIV、H5-AIV与NDV免疫后4、5与6周的HI抗体水平均极显著降低(P<0.01).但6个REV感染组之间差异不显著(P>0.05).研究结果显示,不同来源REV株感染1日龄SPF鸡后均造成生长迟缓,并对体液免疫反应有明显的抑制作用,同时,这也揭示出REV感染可能是免疫失败的重要原因之一.     

甲硝唑对鸡新城疫病活疫苗免疫效果影响的观察

本研究进行观察甲硝唑药物对鸡ND疫苗初次免疫的影响。结果显示高母源抗体雏鸡免疫ND疫苗前应用甲硝唑，用药鸡免疫后抗NDV抗体滴度明显升高；免疫后应用甲硝唑，抗NDV抗体滴度也明显高于未用药鸡；左旋咪唑具有类似作用。甲硝唑用药鸡ND疫苗二次免疫后，鸡血清抗NDV抗体滴度明显高于未用药鸡；左旋咪唑也具有类似作用。     

左旋咪唑配合灭活禽流感病毒口服免疫对鸡免疫反应和生长性能的影响

研究左旋咪唑配合灭活H5N1禽流感病毒(IAIV)口服免疫对鸡免疫反应和生长性能的影响。用左旋咪唑配合灭活H5N1禽流感病毒口服免疫雏鸡后,通过检测口腔、肠道和呼吸道中特异性Ig A、血清中特异性Ig G和HI抗体水平对免疫效果进行评价,通过称重、检测空肠绒毛长度来评价生长性能。左旋咪唑配合灭活禽流感病毒口服免疫雏鸡后,口腔棉拭子、肠道和气管涮洗液中特异性Ig A水平极显著(P0.01)或显著(P0.05)高于单独口服IAIV;左旋咪唑配合灭活禽流感病毒口服免疫雏鸡后,体重没有变化。本研究表明,左旋咪唑配合灭活H5N1禽流感病毒口服免疫雏鸡,不仅能刺激局部的黏膜免疫应答,还能诱导全身免疫应答反应,对鸡的生长性能影响不大。     

NDVLaSota、V4疫苗免疫鸡及免疫攻毒鸡的主要特异性血清抗体动态变化规律比较

本研究应用间接ELISA方法对新城疫LaSota和V4疫苗免疫SPF鸡及免疫后攻毒SPF鸡的血清中新城疫病毒（NDV）特异性HI抗体、IgM和IgG抗体水平的动态变化进行了检测。结果表明，V4较LaSota疫苗免疫鸡HI抗体提前3天左右出现，但除高峰期（1周左右）外，其HI抗体水平均低于LaSota免疫鸡。LaSota免疫鸡。LaSota疫羁免疫鸡血清中NDV特异性IgM和IgGr抗体高峰较V4免疫鸡提前约2周出现，攻毒后，LaSota免疫鸡血清中特异性IgG和IgG回忆应答显著，而V4免疫鸡IgM和IgG回忆应答不明显。     

鸡新城疫、禽流感(H9亚型)二联油乳剂灭活疫苗最小免疫剂量试验

将ND-AI(H9亚型)二联苗分别以1.0、0.5、0.2、0.1、0.05、0.02 mL 6个不同剂量免疫5周龄SPF鸡,免疫后3周采血测NDV及AIV 的HI抗体,并用H9亚型AIV及NDV F48株攻击.结果表明,这6个免疫组鸡的NDV HI抗体几何平均效价分别为2 10、2 8.8、2 8.5、2 7.0、2 6.1、2 5.7;AIV HI抗体水平分别为2 9.3、2 8.4、2 7.7、2 5.7、2 5.1、2 2.8;对照组鸡的NDV及AIV HI抗体均为零.攻毒试验证实,以0.1～1.0 mL剂量免疫鸡获得了100%的抵抗NDV及AIV强毒攻击的保护力;0.02 mL和 0.05 mL的免疫剂量也可使其对NDV与AIV的保护率达到90%～100%.     

不同免疫增效剂对鸡新城疫免疫效果的影响

为研究鸡转移因子、黄芪、左旋咪唑、灵芝4种免疫增效剂的功效,以鸡新城疫（Newcastle disease,ND）血凝抑制抗体效价作为指标,比较其免疫效果。试验鸡先采血测定ND抗体效价,接种注射ND-IB-EDS灭活油乳剂疫苗,再将试验鸡随机分成5组,1～4组为试验组,给予不同的免疫增效剂,5组为空白对照组。在给药后第4、6、8、10、12、14、16、18、20、22和24天分别采血,采用微量血凝抑制试验检测ND抗体效价,统计后比较其抗体效价的变化。结果表明：灵芝组抗体效价在12 d开始显著高于对照组和其他试验组（P＜0.05）,且保持较高的水平;转移因子组和黄芪组抗体效价从14 d开始均显著高于对照组和左旋咪唑组（P＜0.05）,并分别从第22和20天开始持续在较高水平;左旋咪唑组的抗体效价高于对照组,但未出现显著性差异。由此可见,不同的免疫增效剂对鸡ND疫苗的免疫增强作用各异。综合考虑,临床应用时首选鸡转移因子,其次黄芪,灵芝和左旋咪唑需酌情使用。     

禽流感、新城疫、传染性支气管炎三联没乳剂灭活疫苗的研制

以禽流感病毒（AIV）H5N4株，新城疫病毒（NDV）LaSota株与传染性支气管炎病毒（IBV）M41株为抗原研制了AI－ND－IB三联油乳剂灭活疫苗，并对疫苗的物理性状，安全性，免疫效力，保存期及抗体消长规律进行了检测，结果表明，疫苗在免疫后3周后6个月内，对AIV－H5N4，NDV－北京株的攻击均获全部保护，在免疫后52周内，免疫鸡箅清中AIV－N5N4，MDV，IBV的HI抗体也保持较高的水平，疫苗在4℃保存15个月，其免疫力没有下降。     

不同免疫增效剂对鸡减蛋综合征免疫效果的影响

为了验证不同免疫增效剂对鸡减蛋综合征(EDS76)免疫效果的影响,试验以鸡减蛋综合征抗体效价为指示,比较不同免疫增效剂的免疫效果。每只鸡皮下注射EDS76灭活油乳剂疫苗,再将试验鸡随机分成4个试验组和1个对照组,试验组分别给予鸡转移因子、黄芪、左旋咪唑、灵芝粉4种药品,对照组给予等量的生理盐水。在免疫后的1,4,6,8,10,12,14,16,18,20,22,24天分别采血,采用血凝抑制试验(HI)测定EDS76抗体效价。结果表明:鸡转移因子组在第14天时抗体效价出现极显著差异,且一直保持增长趋势;黄芪组在第18天时抗体效价出现极显著差异,且一直保持高水平状态;左旋咪唑组只在第20天时抗体效价出现显著变化;灵芝粉组在第12天时抗体效价出现显著变化,并一直保持高水平状态。说明鸡转移因子的增效作用最强可优先使用,黄芪和灵芝粉次之,左旋咪唑酌情使用。     

左旋咪唑对鸡新城疫免疫效果的影响

为了提高鸡的免疫力,延长免疫期,在给鸡注射新城疫Ⅰ系苗的同时,服用左旋咪唑进行试验,通过HI试验,监测鸡体的抗体消长规律,证明服用左旋咪唑的鸡免疫效果良好。     

黄芪多糖粉剂和注射剂对雏鸡免疫功能和生长的影响比较

以黄芪多糖粉剂、黄芪多糖注射液作为免疫增强剂，以盐酸左旋咪唑为药物对照，通过给雏鸡添饲黄芪多糖粉剂和肌内注射黄芪多糖注射液后观察其对雏鸡免疫功能和生产性能的影响。结果表明，黄芪多糖粉剂、黄芪多糖注射液和盐酸左旋咪唑对雏鸡均有较好的免疫增强作用，黄芪多糖粉剂和黄芪多糖注射液在促进新城疫抗体效价方面作用相似，与盐酸左旋咪唑作用效果差别较小；在提高增重和E玫瑰花环形成率方面黄芪多糖粉剂和黄芪多糖注射液效果相当，但均优于盐酸左旋咪唑。     

盐酸左旋咪唑-维生素E可溶性粉对鸡免疫功能增强作用研究

用盐酸左旋咪唑-维生素E可溶性粉对疫苗免疫后的鸡进行试验。结果表明盐酸左旋咪唑-维生素E可溶性粉具有促进机体细胞性免疫和体液免疫应答反应的明显作用，且200mg／kg体重剂量效果最为优良，鸡口服盐酸左旋咪唑-维生素E可溶性粉后7d即表现出明显的免疫增强作用，鸡对IBD疫苗及ND疫苗特异性免疫应答反应明显增强，血清ND抗体及IBD抗体水平明显升高，血液中ANAE阳性淋巴细胞百分率显著提高。     

免疫增强剂的研究应用（下）

5，化学合成类 左旋咪唑左旋咪唑是第一个被发现具有免疫调节作用的人工合成化合物，具有广泛的免疫调节活性，可促进细胞免疫和体液免疫，增强正常鸡体体液免疫应答反应，使鸡抗胸腺依赖性抗原抗体滴度、抗非胸腺依赖性抗原抗体滴度均明显升高。左旋咪唑对鸡新城疫疫苗、马立克疫苗和鸡传染性法氏囊疫苗均有免疫增强作用。     

CAV与REV共感染SPF鸡对疫苗免疫反应的抑制作用

用1日龄SPF鸡人工感染鸡贫血病毒(CAV)和禽网状内皮增生病病毒(REV),探讨病毒感染对鸡体疫苗免疫反应的影响。结果表明,在用禽流感病毒(AIV,H5和H9)疫苗免疫后,CAV与REV单独感染均显著抑制了鸡体对H5和H9亚型禽流感病毒灭活疫苗的HI抗体反应,在CAV与REV共感染后,这种抑制作用更为明显。CAV单独感染后鸡体对新城疫病毒(NDV)和传染性法氏囊病病毒(IBDV)疫苗的免疫反应受到抑制,但与对照组在统计学上的差异不显著,然而,CAV可以显著加重REV感染对鸡体在NDV和IBDV疫苗免疫后抗体反应的抑制作用。从而证实CAV与REV共感染在疫苗免疫抑制上有协同作用。     

新城疫3组基因亚单位疫苗的免疫原性试验

将3个融合表达重组菌pGHN/DE3、pGF/DE3和pGF/E.coli复苏后进行酶切鉴定，确认无误后均经1mmol/L的TPTG诱导，然后分组3次免疫鸡。试验鸡血清经血球凝集抑制试验（HI）和微量细胞中和试验（SN）来检测HI抗体和SN抗体。结果表明：重组菌pGHN/DE3所生产的亚单位苗免疫鸡后，可激发较高的HI抗体，但激发的中和抗体较弱。与I系NDV常规疫苗相比，3个重组大肠杆菌基因工程苗所诱发的中和抗体效价较弱，对各组中起关键作用的中和抗体进行方差分析表明，3个基因工程菌所诱发的中和抗体与常规疫苗免疫组和基础免疫对照相比，差异显著，因此，尽管3种基因工程苗产生了中和抗体，但中和抗体效价上升缓慢，HI抗体效价上升较快。     

禽流感灭活疫苗(H5N2,N28株)和重组禽流感灭活疫苗(H5N1,Re-1株)免疫鸡和鸭后抗体消长规律的比较研究

禽流感灭活疫苗（H5N2，N28株）和重组禽流感灭活疫苗（H5N1，Re-1株）各3批，以重组禽流感灭活疫苗（H5N1，Re．1株）推荐的免疫程序和剂量分组免疫5周龄SPF鸡和5周龄非免疫鸭。免疫后定期采集血样，测定血清HI抗体效价，分别计算各免疫组鸡和鸭HI抗体效价的几何平均数，绘制各批疫苗免疫鸡和鸭后HI效价消长曲线，并分别对两种疫苗免疫鸡和鸭后各时期的HI抗体效价进行t检验。结果为：①免疫后1周，各免疫组均未测到HI抗体；②鸡免疫后4～5周，HI抗体效价达到峰值1：2^6.0～1：2^7.0，随后2周下降相对较快，平均每周下降0．3—0．7个滴度，之后HI抗体效价缓慢下降，直到试验结束，平均每周下降0．04～0．17个滴度；③鸭首次免疫后第3周各免疫组HI抗体效价达到1：2^4.0～1：2^5.3，加强免疫（首次免疫后第3周）后，HI抗体效价迅速升高。加强免疫后第3周（首次免疫后第6周）HI抗体效价达到最高值1：2^10.6-1：2^11.7，且在峰值水平维持3周，之后1周下降相对较快，平均下降1．2～2．7个滴度，然后缓慢下降，到首免后24周平均每周下降0．28～0．39个滴度，24周除049H5N2批疫苗免疫组外，其他各批免疫鸡HI抗体效价均小于1：2^4.0；④免疫后3周内，两种疫苗刺激鸡产生的HI抗体效价均高于相应批次疫苗免疫鸭产生的HI抗体效价，免疫后第2周相差1．9—2．3个滴度，免疫后第3周相差1．6～2．0个滴度；⑤两种疫苗免疫鸡和鸭后，各时期HI抗体效价t检验差异均不显著（P〉0．05）。以上结果表明，两种疫苗免疫SPF鸡和非免疫鸭后，HI抗体效价消长规律一致，两种疫苗免疫后各个时期的HI抗体效价在统计学上差异均不显著（P〉0．05）。     

禽流感灭活疫苗（H5N2亚型，D7株）与同类产品对鸭和鸡免疫后血清学比较试验

为评价禽流感灭活疫苗（H5N2亚型,D7株）与同类产品对不同日龄鸭及SPF鸡的免疫效果,将该疫苗与国内两家禽流感生产企业的2批重组禽流感灭活疫苗（H5N1亚型,Re-5株）分别免疫鸭和SPF鸡,免疫后14、21、28、42 d采血测定各免疫组的HI抗体效价。禽流感灭活疫苗（D7株）以0.25 mL剂量免疫鸭后14 d,所有免疫组鸭的HI抗体几何平均滴度（GMT）即能达到6㏒2以上,28 d HI抗体GMT达到峰值9.1㏒2,而两批重组禽流感灭活疫苗以0.5 mL剂量免疫鸭21 d后HI抗体GMT均没有达到6㏒2;两种疫苗分别免疫21日龄SPF鸡21 d后各免疫组的HI抗体GMT基本相似。试验结果表明,禽流感灭活疫苗（D7株）对鸭的免疫效果要明显优于重组禽流感灭活疫苗(Re-5株),而对鸡的免疫效果相似。     

不同免疫增强剂对肉鸡禽流感免疫效果的影响试验

试验选用盐酸左旋咪唑,黄芪多糖粉剂,黄芪多糖注射液作为免疫增强剂,并设空白对照组,观察其对肉鸡禽流感免疫效果和生产性能的影响。结果表明,黄芪多糖粉剂,黄芪多糖注射液和盐酸左旋咪唑对肉鸡禽流感均有较好的免疫增强作用,黄芪多糖粉剂和黄芪多糖注射液在促进肉鸡禽流感抗体效价方面作用相似,与盐酸左旋咪唑作用效果差异不显著;在提高增重和E玫瑰花环形成率方面黄芪多糖粉剂和黄芪多糖注射液效果相当,且均优于盐酸左旋咪唑。