GPC3在肝癌患者血清、癌组织和肝癌细胞株中的表达

目的探讨GPC3在肝癌患者血清、组织和肝癌细胞株中的表达。方法荧光定量PCR检测GPC3基因在HepG2、Huh7、LM3肝癌细胞株及HL7702正常肝细胞株中的表达;免疫组化S-P法检测肝癌患者癌组织、癌旁组织及良性病变中Glypican-3蛋白的表达;Western blot检测肝癌、慢性肝炎患者和正常人血清中Glypican-3蛋白的表达。结果 GPC3基因在肝癌细胞系HepG2、Huh7、LM3中的表达分别为35.38、11.82、35.77,在正常肝细胞系HL7702中不表达;Glypican-3蛋白在肝癌组织、癌旁组织及良性病变中的表达率分别为72.9%、0%、0%;肝癌、慢性肝炎患者和正常人血清中Glypican-3蛋白阳性率分别为51.6%、0%、0%。结论 GPC3在肝癌患者血清、组织和肝癌细胞株中均呈高表达。     

端粒酶活性在子宫颈癌组织中的表达

目的 :了解不同临床分期、组织学分级子宫颈鳞癌组织中端粒酶活性。方法 :采用以 PCR为基础的端粒酶重复扩增方法及非变性 PAGE银染定性法检测不同临床分期、组织学分级子宫颈鳞癌组织中端粒酶活性。结果 :在子宫颈癌组织中端粒酶活性的表达率较正常宫颈、不典型增生宫颈组织的端粒酶活性高 (P<0 .0 1 ) ,且不同临床分期的子宫颈癌宫颈组织间端粒酶的表达率差异有显著性 (P〈0 .0 5) ,但不同病理分级的子宫颈癌宫颈组织间端粒酶活性的表达率差异无显著性 (P>0 .0 5)。结论 :端粒酶在子宫颈癌组织中呈现高表达 ,且与临床分期有关 ,端粒酶可望成为检测子宫颈癌的一个重要指标。     

一例原发性肝癌大熊猫的病理学观察

观察一例因原发性肝癌致多器官功能障碍而死亡的大熊猫全身的病理形态学变化,探讨大熊猫肝细胞癌的病理特征。大熊猫“盼盼”年龄31岁,雄性,于2016年12月28日死亡。对其进行系统解剖,取肝脏、胰腺、胃、十二指肠、结肠、直肠、心脏、肺脏、肾脏、膀胱、脾脏、甲状腺、颌下腺、肠系膜淋巴结、颌下淋巴结、睾丸、肛周皮肤组织、前肢肌、后肢肌,以及全身肿块组织进行苏木精-伊红(HE)染色。尸检发现,其腹腔积液,肝脏表面结节性增生,直肠后端可见大量出血点,脾脏下半段肿大,肛周皮肤散在小结节,右阴囊皮肤内侧散在结节,并且其右侧腋下、肝脏左叶、膈肌、腹膜及肠系膜上均可见明显肿块。HE结果显示,肝脏组织可见多灶性脓肿,细胞坏死,肝细胞呈多角形,呈腺样、鹅卵石样结构排列,细胞异型增生,核质比增大,致细胞密度增加。肾组织中可见异型性细胞团块。心脏、肺脏、胰腺、十二指肠、直肠、脾脏、膀胱、甲状腺、肠系膜淋巴结、颌下淋巴结、睾丸、肛周皮肤组织、前后肢肌均出现了病理损伤。结果提示,该大熊猫疑似由于原发性肝癌大面积迅速邻近转移,导致多器官出现功能障碍甚至衰竭而死亡。     

信号传导与转录活化因子3在肝细胞癌组织中的表达及意义

目的 研究信号传导与转录活化因子3(STAT3)在肝细胞癌组织中的表达及其意义.方法 分别应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫组织化学法检测肝癌组织、癌旁组织和良性病变肝组织中STAT3 mRNA和蛋白的表达,应用免疫组织化学法检测Bcl-xL的蛋白表达情况.结果 肝癌组织、癌旁组织中STAT3 mRNA的相对表达量和蛋白阳性率均高于良性病变肝组织(P均<0.01或0.05).肝癌组织及癌旁组织中Bcl-xL蛋白表达率明显高于良性病变肝组织(P<0.05).肝癌组织中STAT3蛋白与Bcl-xL蛋白表达有密切关系(P<0.01).结论 STAT3高表达可能是肝癌发病机制中的早期事件;在癌旁肝组织中,那些STAT3蛋白阳性的肝细胞可能是潜在的癌前细胞.STAT3基因可能通过直接或间接促进Bcl-xL的表达,抑制细胞的凋亡,从而在肿瘤的发生发展过程中发生重要作用.     

端粒酶催化亚基活性中心hTERT的克隆及其真核表达

本实验采用RT—PCR技术,应用高保真DNA聚合酶从人喉癌细胞中扩增端粒酶催化亚基活性中心基因片段,将克隆载体上hTERTcDNA用EcoR I和HindⅢ双酶切,连入真核表达载体pCR3．1,利用pCR3．1载体上带有强的CMV启动子,高效表达活性中心蛋白,采用RT—PCR检测hTERT mRNA的表达情况,结果表明,在细胞内检测到了mRNA,证明该cDNA在细胞内确实得到了表达,并采用TRAF-ELISA方法检测端粒酶活性。     

miR-34b在儿童急性白血病中的表达

目的了解儿童急性白血病中miR-34b的表达。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应（RQ-PCR）检测儿童初诊急性白血病（AL）患儿35例[其中急性淋巴细胞性白血病（ALL）25例、急性髓系白血病（AML）10例]和非恶性血液病患儿20例（对照组）的骨髓标本中miR-34b的表达水平。结果 AL组、ALL组和AML组中的miR-34b相对表达量均明显低于对照组,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 miR-34b可能作为新的抑癌基因参与儿童初诊AL、ALL和AML的形成。     

PCR技术及其在害虫抗药性研究中的应用

ＰＣＲ技术及其在害虫抗药性研究中的应用北京农业大学应用化学系阎艳春，陈年春聚合酶链反应（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）又称无细胞分子克隆系统或特异性ＤＮＡ序列体外引物定向酶促扩增法，是８０年代建立的一项体外基因放大技术。自１...     

MSCT在原发性肝细胞癌射频消融术穿刺定位中的应用

目的探讨多层螺旋CT（multi—slicespiralCT,MSCT）在射频消融（radio—frequencyablation,RFA）治疗肝细胞癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）行穿刺定位中的应用价值。方法术前1天行多层螺旋cT平扫及增强三期扫描并行多平面重建（multi—planarreconstruction,MPR）,最大密度投影（maximumintensityprojection,MIP）及容积再现（volumerendering,VR）重建,作为穿刺参考依据;术前参考三期扫描及后处理图像,经体表放置自制扫描定位线后行5mm层厚平扫,确定最佳穿刺进针点、穿刺路径,进针深度。术中监测电极针位置,必要时微调。穿刺成功后瘤灶行RFA术。术后CT平扫观察肿瘤形态、大小及密度变化,肿瘤周围肝实质密度变化。肝包膜、腹膜腔和胸膜腔有无积液（血）、积气等。结果所有瘤灶电极针准确植入病灶,准确率为100％（118／118）;1次植入电极位于肿瘤中心部．RFA术无需调整占94．92％（112／118）;有部分偏差。需微调位置．占5．08％（6／118）。RFA治疗完成后肿瘤缩小。占27．11％（32／118）;肿瘤密度减低（液化、坏死及炭化）,占100％（118／118）。周围肝组织密度减低,占20．34％（24／118）。肝包膜下积液（血）,占13．56％（16／118）,肝包膜下积气,占1．69％（2／118）。腹膜腔内积气l例,占0．85％（1／118）,积血5例,占4．24％（5／118）。12例靠近膈肌肝肿瘤RFA后：血、气胸占8．33％（1／12）,肺组织损伤占16．61％（2／12）。结论在CT引导下射频消融定位精确,可实时测量电极角度和深度,监测病灶内部的变化情况;对周围肝组织损伤小,术后并发症少,为消融术提供可靠的依据及良好的引导作用。     

聚合酶链反应技术及其在禽病诊断和研究中的应用

就ＰＣＲ基本方法的细节，如原理、模板制备、引物及其设计、产物鉴定和影响因素、污染等几个问题作了较详尽的阐明及经验交流，并就ＰＣＲ在禽病诊断和研究中的应用略作介绍。     

某豆科植物粗提物(JA1)对人肝癌细胞株端粒酶活性的抑制和细胞周期的改变

采用单管法一步完成端粒重复序列扩增法检测人肝癌细胞株,经不同浓度JA1及不同时间的作用前后端粒酶活性的变化,并采用流式细胞仪分析细胞周期的变化。结果显示,JA1可显著抑制人肝癌细胞端粒酶活性,而且这种抑制效果有剂量依赖性和时间依赖性。流式细胞仪分析细胞周期的变化表明,端粒酶活性被抑制后,肝癌细胞被阻滞在G2/M。同时,在检测标本中显示有明显的DNA低含量颗粒(“亚G1期”峰),表明肝癌细胞凋亡的存在。     

原花青素对SMMC-7721肿瘤细胞凋亡及其端粒酶活性的影响

采用M TT法、HE染色、DNA电泳、TUNEL法和TRAP法(端粒重复序列扩增法),研究原花青素对人肝癌细胞SMM C-7721株凋亡及端粒酶活性的影响,探讨了其抗癌机制。结果表明,原花青素可抑制SMM C-7721肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低细胞端粒酶活性。说明原花青素具有诱导肿瘤细胞凋亡和降低肿瘤细胞端粒酶活性2种抗肿瘤作用。     

肝癌组织中PTEN和TIMP-3的表达及其临床意义

目的探讨抑癌基因PTEN和TIMP-3在肝细胞性肝癌（HCC）组织中的表达及其临床意义。方法收集30例HCC、癌旁组织和10例正常肝组织,用qRT-PCR、Western blot、免疫组化SP法检测PTEN、TIMP-3mRNA和蛋白表达,分析PTEN和TIMP-3表达与HCC临床病理特征的关系。结果癌组织中PTEN和TIMP-3mRNA和蛋白表达均明显低于癌旁组织、正常肝组织（P〈0.01）,且在癌旁组织中的表达亦明显低于正常肝组织（P〈0.01）。PTEN和TIMP-3蛋白表达在肝外转移、分化差、血清AFP≥400μg/L和Ⅲ～Ⅳ期肝癌组织中的表达明显低于无肝外转移、分化好、血清AFP〈400μg/L和Ⅰ～Ⅱ期肝癌（P〈0.01或0.05）者;两者在是否伴有肝硬化和不同肿瘤大小肝癌组织中的表达均无统计学意义（P〉0.05）。结论 HCC癌组织中PTEN和TIMP-3表达下调,表达水平有助于判断HCC侵袭转移能力、临床分期和肝外转移。     

肝细胞癌中miR-155与CD44v6表达及相关性研究

目的探讨mi R-155及CD44v6在肝细胞癌（HCC）中表达及其相关性。方法采用q RT-PCR检测32例HCC患者癌组织及癌旁组织中mi R-155及CD44v6 m RNA表达,用免疫组化法检测CD44v6蛋白表达,分析两者间相关性及其与HCC临床病理特征关系。结果 HCC癌组织CD44v6蛋白及CD44v6、mi R-155m RNA较癌旁组织表达升高（P〈0.05）,IIIIV级及侵犯脉管的癌组织中mi R-155和CD44v6 m RNA表达较高（P〈0.05）。mi R-155和CD44v6 m RNA表达呈正相关（P〈0.05）。结论 mi R-155和CD44v6均参与HCC发生及发展。     

肝细胞癌影像学表现与转移的关系

目的：从影像学表现预测肝细胞癌(HCC)发生转移潜在可能性。方法2134例经手术病理证实的HCC患者，术前全部进行CT常规扫描和动态增强扫描。对肿瘤及瘤周组织进行评价、分级；CT表现与病理结果以及患者随访情况进行比较分析。结果：(1)肿瘤直径大于3cm者发生转移的机会明显高于3cm以下者；(2)重度增强发生转移的可能性明显高于轻中废增强；(3)出现门静脉癌栓、动静脉瘘和病灶周围肿瘤血管者发生转移的机会明显高于无上述表现者。结论：本文结果提示，可从HCC肿瘤大小、增强程度和一些增强CT表现来判断肿瘤是否发生潜在转移。     

脱氧核酶对端粒酶hTERT mRNA的切割以及对鼻咽癌细胞凋亡相关基因的影响

目的:探讨脱氧核酶对端粒酶蛋白亚基hTERTmRNA的切割作用及对人鼻咽癌细胞凋亡相关基因表达的影响。方法:针对hTERT基因的核苷酸序列,合成“10～23”型脱氧核酶及其类似物,提取总RNA在体外切割hTERTmRNA;转染鼻咽癌细胞后,用RT-PCR扩增hTERT基因片段,用PCR-ELISA法测定端粒酶活性,用RT-PCR和荧光免疫测定凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果:未经修饰的脱氧核酶DzT和在DzT的3'末段添加倒位连接T碱基的脱氧核酶DzTi在体外能够有效地切割hTERTmRNA;在转染鼻咽癌细胞后,DzTi比DzT对hTERTmRNA表现出更强的切割作用,DzTi能够显著地降低鼻咽癌细胞端粒酶活性(P<0.01)、抑制鼻咽癌细胞的生长(P<0.05)和bcl-2基因的表达(P<0.05),上调bax基因的表达(P<0.05)。DzT和DzTi的催化中心的一个碱基被替换后形成的脱氧寡核苷酸DzT'和DzTi'在体外和胞内均不表现对hTERTmRNA的切割作用。结论:人工合成的脱氧核酶确实能够高效特异地切割端粒酶hTERTmRNA,并降低鼻咽癌细胞的端粒酶活性,促进鼻咽癌细胞凋亡。作为一种新发现的催化性核酸,脱氧核酶在肿瘤的基因治疗领域中将具有极其重要的应用价值。     

顺铂对鼻咽癌细胞株端粒酶活性和凋亡的影响

目的：研究抗癌药顺铂对5株鼻咽癌细胞端粒酶活性和凋亡的影响．以探讨端粒酶活性水平与鼻咽癌的关系及顺铂诱导鼻咽癌细胞凋亡的可能机制，为端粒酶可能成为一种很好的鼻咽癌治疗靶点提供实验依据。方法：用TRAP—ELISA的方法定量检测5株鼻咽癌细胞在顺铂处理前后的端粒酶活性水平，观察细胞形态及生长状态．以流式细胞仪分析细胞周期的改变并检测凋亡。结果：5株鼻咽癌细胞端粒酶均呈阳性，其中LTRs—LMP细胞株端粒酶活性水平最高，高分化细胞株CNE—1端粒酶活性水平低于低分化细胞株CNE—2Z、HNE—2。经顺铂处理后5株鼻咽癌细胞端粒酶活性明显受抑制、细胞形态发生明显改变，出现细胞凋亡。结论：端粒酶的活化与鼻咽癌密切相关。临床常用化疗药物顺铂可能是通过在S期抑制端粒酶活性并诱导鼻咽癌细胞凋亡而发挥杭癌作用的。因此我们认为端粒酶可以作为鼻咽癌的一个治疗靶点。     

青年人原发性肝癌致病因素配对病例对照研究

目的：调查湛江市青年人原发性肝癌（ＰＨＣ）的病因。方法：对１２０例青年人原发性肝癌患者采用病例－对照研究。结果：湛江市青年人原发性肝癌与乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染密切相关,ＨＢＶ总感染率为７９．５％,明显高于对照组１９．５％（Ｐ〈０．０１）。肝癌家族史、肝炎史、饮水、饮酒为青年人原发性肝癌主要危险因素。结论：ＨＢＶ感染在青年人肝癌中的作用远远高于其他危险因素。