Tyrphostin AG555对重组人肌醇磷脂3-激酶p110β催化亚基活性的影响

目的：研究tyrphostin AG555对重组人肌醇磷脂3-激酶（PI3-K）p110β催化亚基的影响。方法：利用基因工程的方法获得PI3-K p110β催化亚基;用磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸．[У-^32P]ATP与重组PI3-K p110У催化亚基一起保温的方法测定PI3-K的活性;用氯仿和甲酵抽提^32p标记的磷脂。并以硅胶扳薄层层析和放射自显影来进行分析。结果：AG555（2．5～20μmol／L）对重组人PI3-K p110β催化亚基有抑制作用。结论。tyrphostin AG555是一种重组人PI3-K p100β抑制剂。重组人PI3-K p110β催化亚基可作为一种较为简便的筛选有效的PI3-K抑制剂的反应物。     

重组人磷脂酰肌醇3-激酶p110β催化亚基的原核表达

目的：表达人磷脂酰肌醇3－激酶p110β催化亚基。方法：将构建有人磷脂酰肌醇3－激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3-K)p110β催化亚基cDNA的重组质粒，转化大肠杆菌BL21（DE3），用IPTG进行诱导表达。用磷脂酰肌醇－4、5－二磷酸、[γ-^32P]ATP与重组PI 3－K p110β催化亚基一起保温的方法测定PI 3－K的活性；^32P标记的磷脂用氯仿和甲醇抽提、板薄层层析和放射自显影来分析。结果：SDS－PAGE显示表达出－110kD的新蛋白质分子，重组蛋白占菌体总蛋白的比例为15％，大多数重组蛋白以可溶性形成存在。wortmannin是PI3－K特异的抑制剂，wortmannin对重组PI 3－K p110β亚基有抑制作用，这种抑制作用呈剂量依赖关系（2.5-20nmol/L)。结论：重组蛋白是有活性的人PI3－Kp110β催化亚基。     

腺苷对大鼠心肌原蛋白I及磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用

用差速离心及等密度离心法从大白鼠心肌细胞中分离收缩蛋白质及质膜,分别与[γ-~(32)P]ATP 保温,观察细胞成分的磷酸化,以及腺苷或腺苷类似物对磷酸化的影响.结果表明,在收缩蛋白质组分,~(32)P 主要掺入肌原蛋白Ⅰ(TroponinⅠ,29000Da);在质膜组分、~(32)P主要掺入磷脂酰肌醇-4-—磷酸(PtdIns-4-P);也就是 ATP 使磷脂酰肌醇(PtdIns)磷酸化。腺苷对此两种磷酸化都有抑制作用,尤以对PtdIns 的磷酸化抑制作用最强。cAMP 对肌原蛋白Ⅰ的磷酸化有刺激作用,这与文献报道相符.作者认为腺苷和 cAMP 对肌原蛋白Ⅰ磷酸化的拮抗作用,与腺苷和肾上腺素对心肌调节的拮抗作用有明显的相关性。鉴于近年发现肌醇磷脂转换在调节细胞活动中起有重要作用,腺苷对磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用,可能具有重要的生物学意义。     

肌醇磷脂的信号作用

人们早已发现磷脂酰肌醇(PtdIns)普遍存在于真核细胞中,占质膜中磷脂的2～12%,但对其生理作用所知甚少.直到30多年前,M.R.Hokin 和 L.E.Hokin 才初次报     

磷脂酶D特性及其在功能性磷脂生产中的应用

磷脂酶D(Phospholipase D,PLD)是催化磷酸二脂键水解和碱基交换反应的一类酶的总称.生产中利用PLD的转酯作用来制备功能性磷脂.本文介绍了磷脂酶的分子结构、催化机理及功能,以及磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰乙醇胺(PE)和磷脂酰肌醇(PI)的生产方法,包括物理萃取法、化学合成法和酶促合...     

Tyrphostin AG555对重组人磷脂酰肌醇3-激酶pll0 β催化亚基的影响

磷脂酰肌醇 3 -激酶 (P13 - K)是多磷脂酰肌醇通路中一个重要的效应器和涉及信号转导、细胞转化的关键酶。P13 - K根据结构的相似性和底物的特殊性可分为 3种类型 ,其中第一种类型的 P13 - K是由 85 k D(p85 α和 p85 β)调节亚基和 110 k D(p110 α、p110 β和 p110 δ)催化亚     

腺苷对大鼠心肌钙蛋白 I 及磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用

用差速离心及等密度梯度离心法从大白鼠心肌细胞分离收缩蛋白质及质膜,分别与[γ—~(32)P]ATP 保温以观察细胞成分的磷酸化,以及腺苷和腺苷类似物对磷酸化的影响。结果表明,在收缩蛋白质组分,~(32)P 主要参入肌钙蛋白 I(Troponin1,29000Da);在质膜组分,~(32)P 主要参入磷脂酰肌醇-4-一磷酸(Ptd Ins4P),亦即 TAP 使磷脂酰肌醇(PtdIns)磷酸化。腺苷对此两种磷酸化都有抑制作用,尤以对 Ptd Ins 磷酸化的抑制最强烈。cAMP 对肌钙蛋白 I 的磷酸化有剌激作用,这与文献报道相符。作者认为,腺苷和 cAMP 对肌钙蛋白 I 磷酸化的拮抗作用与腺苷和肾上腺素对心肌调节的拮抗作用有明显的相关性。鉴于近年发现,肌醇磷脂转换在调节细胞活动中起重要作用,腺苷对磷脂酰肌醇磷酸化的抑制作用可能有重要的生物学意义。     

5′肌醇磷酸酶影响骨骼肌纤维发育的研究进展

5′肌醇磷酸酶(Skeletal muscle and kidney enriched inositol polyphosphate phosphatase,SKIP)基因多物种的QTL定位表明,SKIP是影响骨骼肌发育的候选基因,其在骨骼肌里面的表达由成肌转录因子Myo D所调控。SKIP在成肌分化过程中发挥着重要的负调控作用,其作用机制主要依赖于水解磷脂酰肌醇三磷酸PI(3,4,5)P3的酶活性及对PI3K-AKT信号通路的负调控。因此,对SKIP影响骨髓肌纤维发育进行了简要综述。     

山楂生物膜磷脂组成的研究

本文用硅胶薄板进行单向层析,从山楂的不同组织和细胞器中分离出了7种膜磷脂:磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰已醇胺(PE)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰丝氨酸(PS)磷脂酸(PA)和溶血磷脂酰胆碱(LPL).除定性分析外,对山楂不同组织和器官中膜磷脂的含量进行了测定比较。     

磷脂酰肌醇3-磷酸对UV-B诱导蚕豆保卫细胞中过氧化氢产生和气孔关闭的影响

【目的】研究磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）催化产物磷脂酰肌醇3-磷酸（PI3P）对紫外线B（UV-B）诱导保卫细胞中过氧化氢（H2O2）产生和气孔关闭的影响,为进一步阐明植物细胞转导UV-B辐射信号的机制提供依据。【方法】以蚕豆（Vicia faba L.）表皮条为材料,采用PI3K的抑制剂沃曼青霉素（WM）和LY294002（LY）来抑制PI3P的形成,采用二苯基碘（DPI）和水杨基氧肟酸（SHAM）分别抑制H2O2形成的NADPH氧化酶途径和细胞壁过氧化物酶途径,通过气孔开度分析和激光扫描共聚焦显微镜技术,确定PI3P在0.8 W•m-2 UV-B辐射诱导蚕豆保卫细胞H2O2产生和气孔关闭中的作用。【结果】WM和LY能显著抑制UV-B诱导的保卫细胞H2O2产生和气孔关闭;外源H2O2处理能显著逆转WM和LY对UV-B诱导气孔关闭的抑制效应,但WM和LY不能抑制外源H2O2诱导的气孔关闭;UV-B诱导的保卫细胞H2O2产生和气孔关闭能被活性氧清除剂和SHAM显著抑制,但不能被DPI抑制。【结论】PI3P通过诱导蚕豆保卫细胞中产生于过氧化物酶途径的H2O2形成来介导UV-B辐射诱导的气孔关闭。     

大豆磷脂的开发利用

大豆磷脂是毛油精炼过程中得到的一种副产物。通常商业上获取的磷脂是一种成分复杂的混合物 ,主要含有 1 9%～ 2 0 %的卵磷脂 (磷脂酰胆碱PC)、8%～ 2 0 %脑磷脂 (磷脂酰乙醇胺 PE)、2 0 %～2 1 %的磷脂酰肌醇 PI及磷脂酰丝氨酸等。根据磷脂的性质与功能 ,磷脂常作为乳化剂、分     

家蚕磷脂酰肌醇3-激酶(Bmpi3k)基因的克隆及分析

磷脂酰肌醇3-激酶是一种重要的信号传导因子,对细胞生长、调节等生命活动起重要的作用。文章通过对家蚕(Bombyx mori)表达序列标签(EST)搜索及基因组DNA的预测,利用RT-PCR克隆得到家蚕磷脂酰肌醇3-激酶基因的全长cDNA序列,命名为Bmpi3k。序列分析表明,该基因mRNA全长3 368 bp,其开放式阅读框(ORF)大小为3 165 bp,编码产生1055个氨基酸。其预测的蛋白分子量为122.79 kDa,等电点为7.32。通过对BmPI3K蛋白质序列比对分析发现,BmPI3K保守性较高,包含5个PI3K蛋白特有的保守结构域,推测其参与了家蚕的重要生命活动的调节。     

高效液相色谱法分析黄瓜子叶极性脂

通过HPLC的二次操作,可将黄瓜子叶极性脂快速、经济地分离成各脂成分,并进一步分离成各分子种。通过第1次操作,黄瓜子叶极性脂被分离成各脂组分:单半乳糖二甘油脂(MGDG),双半乳糖二甘油酯(DGDG),磷脂酰乙醇胺(PE),磷脂酰胆碱(PC),磷脂酰甘油(PG),磷脂酰肌醇(PI)和磷脂酸(PA)等;第2次经HPLC系统后,各脂组分被分离成C18∶3/C18∶3、C18∶2/C18∶3、C18∶2/C18∶2、C16∶0/C18∶3、C16∶0/C18∶2等分子种。     

肝素等药物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的影响

在Mg~(2+)存在下,用(γ-~(32)P)ATP与猪红细胞膜保温(30℃)3min,观察一些药物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的影响。用氯仿:甲醇中止反应。用酸性氯仿:甲醇混合液抽提磷脂及硅胶板TLC分离磷脂。经放射自显影及液体闪烁计数测定生成的(~(32)P)-磷脂酰肌醇-4-磷酸。结果表明①肝素和新霉素对磷脂酰肌醇磷酸化有抑制作用;②六氯环己烷对磷脂酰肌醇磷酸化有促进作用;③Li_2SO_4(10mmol/L)、EGTA(100μmol/L)、茶硷(100μmol/L)作用不明显;④二甲亚矾在低浓度时有促进作用,而在较高浓度时则有抑制作用。结果提示上述作用可能与这些药物的作用机理有关。     

肝素等药物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的影响

用~(32)P标记法研究肝素等药物对猪红细胞膜上磷脂酰肌醇磷酸化的影响,结果表明:肝素和新霉素对磷脂     

鸡皮中功能性极性脂质成分的分析研究

[目的]以鸡皮为原料,分析研究对鸡皮极性脂质的功能性成分,为提取开发利用提供理论依据.[方法]硅胶柱层析法分离总脂质中的中性和极性脂质,利用双向薄层层析法进行极性脂质成分鉴定,气相色谱法分析脂质的脂肪酸组成.[结果]蛋鸡皮及肉鸡皮中脂质含量分别为31.8; 和40.5;,其中极性脂质分别占总脂质的1.8;和3.2;,主要是磷脂酰乙醇胺(脑磷脂PE),磷脂酰胆碱(卵磷脂PC),磷脂酰丝氨酸(PS), 鞘磷脂(SM)和磷脂酰肌醇(PI).总脂质的脂肪酸组成油酸(C18:1)含量最高,其次是棕榈酸(C16:0).蛋鸡皮的亚油酸(C18:2)含量高于肉鸡皮.极性脂质中主要的脂肪酸是C18:1,C18:2和C16:0,主要的甲基缩醛是十六二甲基缩醛和十八二甲基缩醛.[结论]肉鸡皮中极性脂质含量高于蛋鸡皮,主要由磷脂酰乙醇胺、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、鞘磷脂和磷脂酰肌醇组成.     

精胺对猪血小板膜中磷酸肌醇和47K蛋白质磷酸化的影响

在Mg~(2+)和外源性磷脂酰肌醇—4—磷酸存在下,用猪血小板膜与〔γ—~(32)P〕ATP在30℃下保温3min,测     

精胺对猪血小板膜中肌醇磷脂和蛋白质磷酸化的影响

用猪血小板膜与(r-~(32)P)ATP进行磷酸化反应,观察精胺对肌醇磷脂和蛋白质磷酸化的影响.结果表明:(1)对磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸的生成有明显促进作用;(2)对血小板中47KDa蛋白质磷酸化有强烈抑制作用(IC_(50)≈1.0mmol/L)。精胺的这些作用可能与其生理作用机理有关。     

饲料磷脂水平对巴丁鱼(Pangasius sutchi)鳃Na+-K+-ATPase 活性及细胞膜脂肪酸组成的影响

试验旨在研究饲料磷脂水平对巴丁鱼(Pangasius sutchi)鳃中的Na+-K+-ATPase活性及细胞膜脂肪酸组成的影响。对巴丁鱼(初始体重约1.45±0.08 g.尾-1)分别投喂5组饲料,各组饲料磷脂添加水平为0%(PL0组)、1%(PL1组)、2%(PL2组)、3%(PL3组)和4%(PL4组),饲养56 d。结果显示,鱼鳃中的Na+-K+-ATPase活性随着饲料磷脂水平的升高而下降(P<0.05);鳃膜脂肪酸组成发生显著变化:饱和脂肪酸(saturated fatty acids,SFA)含量以对照组(PL0组)的最高,与PL2、PL3组差异显著(P<0.05);PL0组的单不饱和脂肪酸(monounsaturated fatty acids,MUFA)含量显著高于其余4组(P<0.05);PL3组的多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acids,PUFA)含量最高,与PL0、PL1组有显著差异(P<0.05);PL0组的高不饱和脂肪酸(highly unsaturated fatty acids,HUFA)含量显著低于其他添加了磷脂的各试验组(P<0.05)。结果表明,饲料磷脂水平对巴丁鱼鳃Na+-K+-ATPase活性有一定影响,未添加磷脂的饲养条件下鳃Na+-K+-ATPase表现出较强的补偿能力,以维持稳定的生理水平及正常的基础代谢;巴丁鱼鳃细胞膜中的∑HUFA和∑PUFA含量显著高于对照组,有助于细胞膜更好地执行和完成正常生理功能。     

CM52纤维素柱层析法分离纯化多磷酸肌醇磷脂

本文报道一种简单、得率较高、有较大实用价值的CM_(52)纤维素柱层析分离纯化多磷酸肌醇磷脂的方法。该法可从每克牛脑(湿重)中分得磷脂酰肌醇-4-单磷酸0.2mg,磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸1.2mg。