家兔早期胚胎体外培养和移植研究

用ＦＳＨ，ＰＭＳＧ，ＨＣＧ和ＩＣＩ－８０９９６对２０只家兔进行超数排卵，平均每只排卵１９．１枚，回收胚胎１３．５枚。超排卵数和卵子回收数ＦＳＨ分别为２６．３枚和２１．１５枚，ＰＭＳＧ为２２枚和１３．５。将正常的２５枚１细胞，７枚２细胞和３２枚４细胞期胚胎在ＴＣＭ－１９９培养液，５％ＣＯ２和 ３８．５℃环境中培养６０－７ ０ｈ，６３．１７％的胚胎可发育至囊胚移植至５只体兔后，产出仔兔１３只。     

猪体外成熟,受精卵的体外培养研究

用自己改良的发育培养基使３．９％￣２０．１％体外成熟体外受精卵在体外发育过了４－细胞阻滞期，到达８￣１６－细胞期，个别发育到桑椹期；培养中还观察到葡萄糖对猪胚胎的体外发育没有抑制作用，说明葡萄糖不是猪胚胎体外培养中出现阻滞的原因，在培养基中添加ｐＦＦ可促进猪胚胎体外发育，使发育至８￣１６－细胞期的胚胎率从３．９％，提高到１０２．２％。     

小鼠早期胚胎体外培养的实验研究

本试验采用国产化学试药和哈尔滨地区的天然水,制备了 Brinster 化学合成培养液。把160枚通过超数排卵获得的2-细胞期小鼠胚胎放在添加适量牛血清白蛋白或胎牛血清的 Brinster 化学合成培养液内,并在适当湿度、5%CO_2和95%空气的气相环境、37℃温度条件下培养。58小时后,大约67%4小鼠2-细胞期胚胎发育到桑椹胚阶段;大约32%的小鼠桑椹胚发育到囊胚期阶段。试验证明,用国产化学药品和哈尔滨地区水配制的培养液可以对早期小鼠胚胎进行体外培养研究。     

家兔子宫平滑肌细胞的体外分离培养

【目的】研究家兔子宫平滑肌层细胞的体外培养和扩增方法。【方法】应用酶解消化法对新西兰大白兔的子宫平滑肌细胞进行体外分离和培养,并研究不同水平性腺激素对其生长的影响。【结果】酶解消化法可成功进行家兔子宫平滑肌细胞的体外培养和传代。子宫平滑肌细胞在体外的增殖受卵巢性腺激素的影响,100nmol/L雌二醇对其体外增殖有促进作用,而100nmol/L孕酮则有抑制作用。免疫组织化学结果表明,体外培养的子宫平滑肌细胞在激素作用下仍可维持其特性,在体外可传9~10代。【结论】建立了家兔子宫平滑肌细胞的体外培养和扩增方法,可为构建子宫三维结构提供充足的种子细胞。     

家兔原始卵泡卵母细胞体外发育的培养体系研究

本研究根据家兔卵巢的发育特征初步探讨了家兔卵巢卵母细胞体外发育的培养体系。采集新生或30日龄家兔卵巢在不同培养液中培养,并分析家兔卵母细胞的体外发生与成熟情况与体内正常发育的兔卵巢卵母细胞之间的差异,来筛选和优化家兔卵巢卵母细胞的体外培养体系。本试验从高糖DMEM、FSH浓度、BSA/血清等3个方面来筛选较好的培养条件,结果表明:①不添加高糖DMEM的M199培养液与添加的相比,卵巢上卵母细胞数量要多,但随着培养时间的延长,组织块上卵母细胞的形态会变得不清楚;②家兔卵巢组织在FSH浓度为50和100m IU/m l、添加血清的DMEM/F12培养液中生长较好,体外培养24d后,卵母细胞数量多,直径增加到65μm;③与添加BSA的培养液相比,添加血清的培养液中的卵巢卵母细胞生长状态较好,体外培养28d后,卵母细胞数量多,并且直径可达65μm。     

克服小鼠早期胚胎体外培养发育阻滞的研究

为探讨不同培养基及共培养对克服小鼠早期胚胎体外发育阻滞的影响,用不同成分组成的5种常用培养液对小鼠早期胚胎进行体外培养,后以KSOM作为基础培养基,KSOMFBS为对照,分别与小鼠输卵管上皮细胞(MOEC)和卵丘细胞(CC)进行共培养,观察从2细胞发育到4细胞的胚胎数和囊胚数的变化。结果发现5种培养液中从2-细胞发育到4-细胞的胚胎率为30.5%~43.5%,差异不显著。KSOM组囊胚率为40.9%,显著高于其他各组(27.9%~30.0%)。共培养后,各组中克服发育阻滞的胚胎数和囊胚数均有显著提高,其中添加胎牛血清组4细胞胚胎数和囊胚数显著高于不添加组,输卵管上皮细胞组显著高于卵丘细胞组。结果显示共培养对克服小鼠2-细胞发育阻滞作用明显,添加胎牛血清效果明显好于不添加,输卵管上皮细胞共培养效果好于卵丘细胞。     

哺乳动物早期胚胎体外培养各细胞阶段营养需求研究

从哺乳动物早期胚胎体外培养发育阻断机理和早期胚胎的体内环境入手,阐述了胚胎体外培养各细胞阶段胚胎对营养物质的需求,寻求合理的体外培养条件和方法,以便提高体外胚胎早期的囊胚发育率.     

家畜胚胎体外生产技术

家畜胚胎体外生产技术是胚胎工程技术的重要内容之一。本文对家畜胚胎体外生产的相关主要技术环节,包括卵母细胞的体外成熟技术、体外受精技术及早期胚胎的体外培养技术等进行了综述,同时对该技术的发展前景进行了展望。     

黄牛孤雌胚胎的体外培养

试验研究了培养液中血清的添加时间和添加浓度及不同培养体系对黄牛孤雌胚胎体外发育潜力的影响.结果表明.黄牛成熟卵母细胞孤雌激活后的第3天添加10%的FBS对孤雌胚的体外发育效果较好;4种培养体系在孤雌激活后的第3天添加10%的FBS.平均囊胚率分别可达46.25%(SOFaa)、43.58%(Crlaa)、40.25%(KSOM)和17.98%(TCM199);TCM199组的囊胚率显著低于其他3组(P<0.05),SOFaa组优于Crlaa和KSOM组,但差异不显著(P>0.05).表现最好的是黄牛成熟卵母细胞孤雌激活后的第3天在SOFaa组中添加10%的FBS,其平均囊胚率可达46.25%.     

小麦成熟胚离体培养研究

以美国小麦品种Overley成熟胚作为外植体进行离体培养,研究外源激素对小麦成熟胚诱导愈伤组织、分化出苗以及试管苗增殖的影响。试验结果表明,在MS培养基中添加2,4-D3mg·L-1愈伤组织诱导频率较高,成愈率为84.0%;在添加有KT2～3mg·L-1的MS分化培养基中愈伤组织分化率较高,可达85%以上;将试管苗转接至添加0.2mg·L-1的NAA和0.5～2.0mg·L-1的6-BA的培养基中,试管苗有一定的分化增殖,但最高分化率仅为33.3%,增殖系数2.05。     

转人血清白蛋白基因小鼠胚胎的体外培养

探讨了获取受精卵的时间、显微注射和培养液等因素对显微注射胚胎体外发育的影响。结果表明：在注射HCG后24～26h和18～22h时获得的受精卵的囊胚率分别为45％和20％,二者差异显著;注射胚和非注射胚卵裂率差异显著(56／80 VS 74／76),但显微注射对2-细胞以后阶段的发育没有显著影响;mWM1培养液和mWM2培养液都能有效克服受精卵体外发育阻断。mWM2培养液更支持早期转基因胚胎体外发育。     

颗粒细胞单层对黄牛孤雌胚胎体外发育的影响

为优化颗粒细胞单层共培养体系,研究了不同类型、不同种属的颗粒细胞单层及不同时间更换培养单层对黄牛孤雌胚胎体外发育的影响.结果表明.就卵裂率、囊胚率和囊胚孵出率而言.壁颗粒细胞单层组与丘颗粒细胞单层组之间无显著差异(P>0.05);来自黄牛、猪和小鼠的颗粒细胞单层在支持黄牛孤雌胚胎体外发育方面无显著差异(P>0.05):就囊胚率而言,共培养的第3天和第6天两次更换单层分别与共培养的第4天更换单层和始终不更换单层的对照组之间无显著差异(P>0.05),但第4天更换单层与对照组之间有显著差异(P<0.05).所以.不同类型和不同种属的颗粒细胞单层都能很好地支持黄牛孤雌胚胎的体外发育.在胚胎的体外发育过程中更换培养单层可以明显提高胚胎的囊胚率和囊胚孵出率,并且在共培养的第4天更换培养单层可以得到较高的囊胚率.     

百合幼胚离体培养的研究

对百合败育胚离体培养的影响因素进行研究的结果表明：pH值对百合幼胚的萌发及成苗有一定的影响，以pH值5.0为最好；活性炭的浓度对其影响不明显，培养基中加入氨基酸类物质使胚萌发及成苗比率均高于对照，加入维生素类物质对胚的影响不大。     

孕兔子宫内膜淋巴细胞的制备及体外培养

对孕兔子宫内膜的对比消化及统计分析表明 ,用浓度为 2 .5g/L或 1 .2 5g/L的胰酶 0～ 4℃消化7h3 0 min至 8h55min,可分离到正常的子宫内膜淋巴细胞 ( EML) ;培养条件单独作用或与酶浓度共同作用分别可极显著影响 ( P<0 .0 1 )或显著影响 ( P<0 .0 5)孕兔子宫内膜淋巴细胞的活化作用。试验表明 ,孕兔子宫内膜经 1 .2 5g/L的胰酶 0～ 4℃消化 8～ 9h,所获淋巴细胞在体外培养 4 8h是孕兔子宫内膜淋巴细胞制备及体外培养的可行方案 ;培养出的淋巴细胞适合用噻唑蓝 ( MTT)比色法进行活性检测。     

柑桔球形合子胚的离体培养

以雪柑、芦柑和柚为母本,分别用芦柑、福桔、枳壳和柚的花粉进行授粉,观察合子胚的发育.结果表明授粉后50—55d,胚囊只有1个球形合子胚,珠心胚尚未侵人胚囊,可以单独分离培养.将合子胚接种于改良White基本培养基及其附加物。蔗糖浓度为10％.待子叶胚分化明显时,移入MT培养基。即可抽芽.芽长2—3cm,再转入诱导长根培养基,便发育成为正常的植株.试验自1986年获得雪柑与福桔和芦柑授粉的合子胚苗之后,1988—1989年又先后获得雪柑与枳壳,柚与枳壳,芦柑与柚授粉的合子胚苗.小苗的GOT基因酶和过氧化物同工酶测定,证明其杂种性,通过多次杂交试验,探索柑桔球形合子胚离体培养技术,有效地排除了珠心胚的干扰.     

水稻离体培养及其无性系变异的研究

近30年来,水稻离体培养及其体细胞无性系变异的研究取得了很大的进展,已成为水稻品种改良中提高变异频率、增加变异类型、加快育种进程、提高育种效率等的一个重要手段.本文较全面地综述了有关资料,并提出一些粗浅看法.     

特定电磁波照射对家兔体外受精的影响

家兔精液用特定电磁波（ＴＤＰ）照射３ｍｉｎ，精子体外获能采用ｍ—ＨＩＳ（１５ｍｉｎ）＋ｍ－ＤＭ（２－４ｈ）．家兔卵母细胞经ＴＤＰ照射５ｍｉｎ并体外培养１０－１２ｈ．家兔的卵泡卵母细胞经体外受精和体外培养的结果表明，经ＴＤＰ照射的精液与未经ＴＤＰ照射的卵母细胞的体外受精，原核形成率达６４．７％，对照织为４４．４％，两者差异显著（Ｐ＜０．０５），２－细胞以上的受精卵发育率分别为５６．８％和５０％（Ｐ＞０．０５），经ＴＤＰ照射的卵母细胞与未经ＴＤＰ照射的精液的体外受精，原核形成率达６３．７％，对照组为４６．７％，两者差异显著（Ｐ＜０．０５），２－细胞以上的受精卵发育率分别为５８．９％和４７．２％（Ｐ＞０．０５）、用ＴＤＰ照射精液或卵母细胞能显著提高其体外受精率．