一株产淀粉酶、蛋白酶益生芽孢杆菌的分离与鉴定

本试验根据芽孢杆菌生理特点,采取稀释平板法从健康日本鹌鹑(Coturnix japonica)盲肠内容物中分离获得一株芽孢杆菌P-12,结合细菌生理生化鉴定、16S rDNA测序和系统发育树对其进行分析。研究表明,该菌种为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus),其16S rDNA GeneBank登录号为GU269268,具有产蛋白酶、淀粉酶活性。     

吉林白鹅消化道纤维分解菌的鉴定

选择54日龄吉林白鹅(肉用),无菌刮取盲肠内壁黏膜,筛选菌株进行分离培养,应用DNS法测定酶活力,通过菌株生化试验及16S rDNA测序同源性比较,鉴定出具有产纤维素酶特性的菌株,利用PCR进行筛选,基因组部分测序,结果经序列BLAST比对,确定其部分序列与无芽孢杆菌同源性达到99%,初步鉴定为无芽孢杆菌属。     

贝莱斯芽孢杆菌的鉴定和抑菌作用研究

该研究对6株贝莱斯芽孢杆菌分离株进行测序鉴定、药敏试验与抑菌试验。结果表明：所分离的6株菌16S rDNA序列与贝莱斯芽孢杆菌处于同一遗传进化树分支，对选定的7种抗菌药物均敏感。应用指示菌进行抑菌试验，6株菌及其代谢产物对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌均有抑菌作用，抑菌作用从强到弱依次是：贝莱斯芽孢杆菌菌液、上清液和菌液滤液。     

产芽孢木质素降解菌株N13的分离与鉴定

研究旨在从牛粪中筛选出1株对木质素有降解能力的细菌,并对其鉴定到种。对其形态和生理生化特征进行研究,发现其特征与解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）很相近。将所测得的16S rDNA序列用BLAST软件在GenBank数据库中进行比对,选取序列相似性高的菌株,用ClustalX（1.8）软件进行16S rDNA相似性分析,Neighbor-Joining法构建系统发育树。N13菌株与Bacillus amyloliquefaciens的相似性达到99.85%,鉴定该菌为解淀粉芽孢杆菌。     

16S rDNA序列分析法鉴定鸡源肠道乳酸菌

从北京郊区某散养鸡场健康成年鸡肠道中分离纯化得到12株未知菌,分别提取DNA,采用16S rDNA扩增通用引物,经PCR扩增后,测定其16S rDNA序列,测序结果与Gen Bank数据库中的序列作对比,根据序列相似性,利用MEGA软件,对12株未知菌序列构建进化树。经鉴定5株为乳酸杆菌、3株为唾液乳杆菌、2株为肠球菌、1株为罗伊氏乳杆菌及1株为葡萄球菌。结果表明,16S rDNA序列分析技术与传统方法相比具有简便和快速等优点,提高鉴定效率,可进行乳酸菌种级水平鉴定,适合用于实验室内对乳酸菌的鉴定。     

产纤维素酶细菌的分离筛选与鉴定

通过筛选获得高产纤维素酶细菌菌株,为纤维素酶制剂研制及纤维素酶工程菌构建提供试验材料。采用刚果红平板从牛羊粪便及腐败的玉米秸秆和木屑中分离产纤维素酶菌株,以DNS法测定酶活,根据酶活复筛产纤维素酶分离菌株;观察分离菌株的形态、染色与培养特性;应用16S rDNA通用引物扩增菌株基因组DNA,测序结果提交GenBank数据库进行Blast比对分析和相似性搜索,作出复筛菌株种的鉴定。结果表明:分离获得16株纤维素酶产量较高的细菌菌株,均为革兰氏阳性菌,菌体呈短杆状、具中央芽孢,经16S rDNA序列比对分析和相似性搜索,鉴定为10株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、6株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。     

水产养殖用复合微生物粉剂中菌种的分子生物学鉴定

对两种市售水产养殖用复合微生物粉剂中微生物菌种进行鉴定。利用平板分离技术对粉剂中的微生物进行分离纯化,进行了形态学观察、16S rDNA和26S rDNA序列分析,并构建系统发育树。结果表明,两种微生物粉剂中菌群结构存在一定差异,S1粉剂中鉴定出5株芽孢杆菌和2株酵母菌,分别为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌或索诺拉沙漠芽孢杆菌、葡萄牙棒孢酵母和库德里阿兹威毕赤酵母;S2粉剂中鉴定出3株芽孢杆菌、1株放线菌、2株酵母菌和3株肠球菌,分别为解木糖赖氨酸芽孢杆菌、环状芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌或索诺拉沙漠芽孢杆菌、芬氏纤维微菌、酿酒酵母、库德里阿兹威毕赤酵母、鹑鸡肠球菌、屎肠球菌或乳酸肠球菌。明确水产养殖用复合微生物粉剂的菌群结构为同类产品的安全性及有效性评估提供理论基础。     

枯草芽孢杆菌Pab02产纤维素酶活性的研究

试验主要对目前饲料领域应用广泛的枯草芽孢杆菌进行产纤维素酶能力筛选及发酵优化条件的研究，为枯草芽孢杆菌Pab02开发成微生态制剂及生产纤维素酶提供理论依据。通过羧甲基纤维素钠培养基筛选分离到具有产纤维素酶能力的枯草芽孢杆菌Pab02。通过分析初始pH、发酵温度和发酵时间对枯草芽孢杆菌Pab02产纤维素酶活性的影响，得出最佳初始pH为8．0、发酵温度为37℃、发酵时间为48h。在该条件下发酵液酶活达到358．751u／mL酶液，比优化前提高了2．1倍。     

圆孢芽孢杆菌A95的分离与鉴定

从茶树根际土壤中分离获得一株对多种家蚕病原真菌具有强烈拮抗作用的细菌。经培养特征观察以及生理生化指标测定、16S rDNA碱基序列测定和同源性分析,鉴定该菌株为圆孢芽孢杆菌,定名为Bacillus globisporusA95。该菌株的16S rDNA序列已在GenBank注册(登记号:AY387584)。     

母猪粪便中乳酸菌菌株体外益生特性初步研究

试验从健康母猪粪便中分离乳酸菌,并对其益生特性进行初步研究。通过形态和生理生化鉴定,再利用16S rDNA序列同源性分析的方法进行16S rDNA基因扩增与测序,并将测序结果与GenBank中菌株的16S rDNA基因序列进行同源性比较分析,得到1株链球菌,2株约氏乳杆菌,4株乳酸片球菌。体外益生特性结果表明,各菌株在pH 2.0~3.0,胆盐浓度0.1%~0.3%均有较强的耐受能力,各菌株对大肠埃希氏菌和单核细胞增多症李氏杆菌均有较好的抑制作用。     

广州桑树植原体分子检测及多样性初探

采用植原体16S-23S rDNA区段的通用引物对P1/P7和巢式引物对Rm16F2/Rm16R1,建立了快速准确的桑树植原体巢式PCR检测技术。对广州的两个桑树品种资源圃中的部分桑树品种进行了植原体分子检测,结果在两个资源圃中均发现有植原体存在。对巢式PCR的扩增产物(16S rDNA片段)进行了限制性片断长度多态性(RFLP)分析,显示出3种RFLP带型,暗示桑树植原体存在多样性。对所得植原体16S rDNA片段进行序列测定,并与其它植物植原体作亲缘关系分析,结果表明该植原体的16S rDNA序列与其它植物病原植原体之间的同源性为83.3%~99.9%,并初步判断所检测到的桑树植原体属于16S rI组。     

致病性嗜水气单胞菌PCR快速检测方法的建立

本试验根据GenBank已登录的致病性嗜水气单胞菌保守序列16S rDNA和Aero,设计2对引物,以嗜水气单胞菌纯培养物为起始材料,建立PCR检测方法。从12株分离物中均扩增到16S rDNA片段,从3株分离物中均扩增到Aero片段,经序列测定和分析,所扩增的片段均为嗜水气单胞菌的核苷酸序列。结果表明,建立的PCR方法可用于检测致病性嗜水气单胞菌。     

细菌16SrDNA基因芯片的构建及应用

本试验为建立能检测兽医临床重要病原菌的基因芯片方法,采用通用引物扩增菌株16S rDNA V1-V3区,制备16SrDNA PCR产物基因芯片,对5种兽医临床微生物进行检测.结果显示,制备的基因芯片能特异性地检测金黄色葡萄球菌、链球菌和鸡毒支原体,以及这3种菌株混合样品,但对大肠杆菌及沙门菌检测结果不理想.基因芯片检测灵敏度为3μg/L.     

Phylogenetic relationship of Pasteurella pneumotropica isolates from laboratory rodents based on 16S rDNA sequence

A 1344 bp fragment of the 16S ribosomal DNA (rDNA) sequence was used to determine the genetic relationship of Pasteurella pneumotropica isolates from laboratory rodents. A total of 30 nucleotide sequences of P. pneumotropica, including 24 wild strains, 3 reference strains, and 3 nucleotide sequences deposited in GenBank, were examined for heterogeneity of their 16S rDNA sequences. Phylogenetic analysis based on 16S rDNA sequence discriminated 5 types of branching lineages. Of these 5 types, 3 types had significant associations with mice or rats, and 2 had significant associations with the beta-hemolytic phenotype. These results suggest that 16S rDNA sequencing of P. pneumotropica isolates demonstrates genetic heterogeneity and phylogenetic discrimination in terms of their hemolytic phenotype and host associations.     

貂源停乳链球菌似马亚种的分离鉴定

为了研究引起水貂肺炎死亡的病因,对送检的病死水貂进行剖检。从病死水貂病料中分离出了一株革兰阳性球菌,对其进行菌落形态观察、生化鉴定以及16S rDNA序列分析,构建系统进化树并进行同源性分析,同时对该菌株进行药敏试验。结果表明：根据分离菌的形态特征、生物化学特性,结合16S rDNA序列测定与进化树分析,将其鉴定为链球菌属的停乳链球菌似马亚种。药敏试验结果显示,该菌株对青霉素、阿莫西林、莫西沙星等药物敏感,但对四环素有较强的耐药性。     

贵州省某猪场体表脓肿病原菌的分离鉴定及药敏分析

为探明贵州省某猪场引起猪体表脓肿的原因,本研究对该猪场脓肿部位的脓汁进行细菌分离培养,并对分离所得的细菌进行革兰氏染色镜检、生化试验、药敏试验、16S rDNA序列分子分析及动物感染试验。结果显示,从脓汁中成功分离到了3株菌落形态不一的菌株,分别为金黄色葡萄球菌、化脓隐秘杆菌、停乳链球菌类马亚种,根据分离地点和时间将其分别命名为GZGP2018-1、GZGP2018-2和GZGP2018-3;GZGP2018-1菌株与NCBI上金黄色葡萄球菌的同源性高达99.9%,GZGP2018-2菌株与NCBI上化脓隐秘杆菌的同源性高达99.9%,GZGP2018-3菌株与NCBI上停乳链球菌类马亚种的同源性高达100%;3株分离菌株对头孢拉定、环丙沙星、磺胺间甲氧嘧啶和氟苯尼考较敏感,对青霉素类药物和红霉素耐药;3株分离菌株对试验小鼠均具有致死性。本研究为该猪场猪体表脓肿的发病原因、实验室诊断方法及日常防控提供了理论参考。     

枯草芽孢杆菌Pab02喷雾剂对肉鸡呼吸道菌群的影响

选取48羽7日龄艾维茵肉公鸡随机分为对照组和试验组,试验组动物房内每日8时喷雾1mL/m3的枯草芽孢杆菌Pab02制剂（108 CFU/mL）,对照组同法喷雾100mL蒸馏水。28日龄时对肉鸡测体质量,采用活菌计数法和PCR-DGGE法对28,49日龄肉鸡呼吸道菌群进行检测,石蜡组织切片法对肺部结构进行观察。结果显示,喷雾枯草芽孢杆菌Pab02对28日龄肉鸡的采食量、日增重、料肉比等生长性能有所提高,但不显著（P〉0.05）;喷雾Pab02能增加49日龄呼吸道细菌数量（P〈0.01）,提高同一生态位菌群的稳定性和呼吸道菌群的多样性;Pab02喷雾剂不引起肺组织损伤,能使淋巴小结增多。结果表明,芽孢杆菌Pab02喷雾剂不能显著改善肉鸡的生长性能,但是能调节呼吸道菌群的结构,增强肺脏的免疫功能。     

Development of a PCR test for the identification of Staphylococcus intermedius based on the 16S rDNA sequence

The development of a PCR assay based on the 16S ribosomal RNA gene (rDNA) sequence was carried out for the identification of Staphylococcus intermedius. Sixty-six strains of S. intermedius, 70 of Staphylococcus aureus and 2 of Staphylococcus hyicus were examined for the assay. The 16S rDNA, of which the PCR target fragment makes up 901 bp corresponding to the sequence data of the gene, was detected in all strains of S. intermedius, but it was not detected in any strains of either S. aureus or S. hyicus. These results suggest that the PCR allows a simple and precise identification of S. intermedius.     

1株猪源肠道益生菌的分离鉴定及其生物学特性研究

从健康猪肠道中分离出1株对仔猪大肠杆菌病和副伤寒病病原有较强拮抗作用的菌株,命名为W-02,对其进行菌落形态、生理生化特性和16S rDNA系统发育分析,确定该菌株为凝结芽孢杆菌。对该菌株胃肠道耐受特性和安全性进行了研究,结果表明,W-02菌株在人工胃液、人工肠液、猪胆盐和80℃高温表现出很强的耐受能力,急性毒性试验结果表明该菌株为无毒菌株。